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副鸡禽杆菌lpxM蛋白的原核表达及免疫原性研究: 2024年; [目的]探究副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)外膜蛋白lpxM的免疫原性,为预防鸡传染性鼻炎提供理论参考。[方法]构建pET-28a-lpxM原核表达载体,经PCR扩增和双酶切鉴定后将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,并对诱导时间和诱导浓度进行优化,用尿素缓冲液纯化重组蛋白lpxM并进行SDS-PAGE分析。利用Western blotting鉴定重组蛋白的特异性。将重组蛋白与MONTANIDEISA 71 VG佐剂制备成疫苗v-lpxM,通过动物试验观察重组蛋白的免疫效果。[结果]重组质粒pET-28a-lpxM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达,在37 ku处有目的蛋白特异性条带,在37℃、700 mmol/L IPTG、诱导4 h时蛋白表达量最高;重组蛋白lpxM在上清和沉淀中均有表达,且在沉淀中表达量相对较高;Western blotting结果显示,C型副鸡禽杆菌Modesto株的阳性鸡血清与纯化后的重组蛋白可发生免疫反应。免疫保护试验结果显示,v-lpxM疫苗对A、B和C型副鸡禽杆菌的保护率分别为0、20%和60%。[结论]本研究成功构建了原核表达载体pET-28a-lpxM,实现了lpxM重组蛋白的高效表达,且表现出良好的免疫原性。研究结果为探究副鸡禽杆菌外膜蛋白lpxM的免疫学特性以及为鸡传染性鼻炎的预防和疫苗的研发奠定了基础。; 梁之瑄梅晨张雪徐浩钧支岩李焕荣李焕荣; 关键词：副鸡禽杆菌原核表达免疫原性

重组B群脑膜炎球菌疫苗大鼠安全性和免疫原性研究: 2024年; 目的对大鼠重复给予重组B群脑膜炎球菌疫苗,考察该创新疫苗的非临床安全性和免疫原性,为临床设计人用剂量及临床毒副反应的监测提供参考依据。方法使用SD大鼠,设计阴性对照组、佐剂对照组、疫苗低剂量组(每只1剂)和高剂量组(每只3剂)4个主试验组及3个卫星组。于第0、3、6、9、12周分别肌肉注射,进行临床观察和解剖观察,并对多种组织脏器进行病理学检查。检测体质量、食量、体温、血细胞计数、凝血功能、血液生化、眼科、T淋巴细胞亚群、细胞因子、血清特异性IgG抗体和杀菌抗体等指标。结果低、高剂量重组B群脑膜炎球菌疫苗均能产生高水平的结合抗体,免疫血清具有较强活性的杀菌抗体。低、高剂量组疫苗可引起大鼠中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞显著升高,血红蛋白和红细胞比容显著降低。与给药相关的改变还表现为血清球蛋白升高,白蛋白降低,与之伴随的A/G值降低。4周恢复期后均可恢复正常。与佐剂和疫苗免疫相关的组织病理学改变为注射局部可见轻微至中度肉芽肿性炎症、急性炎症,坐骨神经外膜单个核细胞/混合细胞浸润、增生,淋巴结髓索浆细胞数目及粒细胞系增多等。结论重组B群脑膜炎球菌疫苗对SD大鼠具有良好的免疫原性和安全性,未见免疫毒性反应,可见与铝佐剂和免疫反应相关的外周血液指标变化以及注射部位炎症。本试验剂量下,重组B群脑膜炎球菌疫苗未见不良反应剂量(no observed adverse effect level, NOAEL)为每只3剂。; 苏桂民纪国存郭通冀颖龙静王欣惠朱卫华杜琳; 关键词：免疫原性安全性

牛血中β2-糖蛋白的提取纯化及免疫原性研究: 2024年; 【目的】为β2GPI的获得增加一个新的途径,提高牛血的利用效益,减少牛血资源浪费。【方法】牛血清经HClO_(4)沉淀、Heparin Sepharose CL-6B亲和层析及分子筛等方法纯化获得目的蛋白β2GPI。利用凝胶电泳技术对提取的Bβ2GPI进行了纯度鉴定和分析,然后采用ELISA技术对Bβ2GPI的免疫原性进行了评估。【结果】试验表明提取纯化的Bβ2GPI纯度约为95%,其反应性与β2GPI标准品相同。【结论】从牛血中成功提取纯化β2GPI,且所获得的蛋白具有较高纯度和良好的免疫原性。; 曲超邓庚粮贺书楷杨溪张哲源欧阳浩然刘绍; 关键词：牛血纯化免疫原性

禽致病性大肠杆菌HlyE蛋白的免疫原性研究被引量：1: 2024年; 为评估禽致病性大肠杆菌(APEC)溶血素HlyE蛋白的免疫原性,本研究对APEC溶血素HlyE蛋白进行原核表达和纯化,并对表达的重组蛋白进行SDS-PAGE和western blot分析,将纯化蛋白利用透析袋在4℃透析后,利用血琼脂平板对其溶血活性进行检测。SDS-PAGE和western blot结果显示,表达并纯化到分子量约为36 ku的重组HlyE蛋白(rHlyE),经ND-2000超微量核酸蛋白测定仪测定纯化后蛋白浓度为0.65 mg/mL;溶血活性检测结果显示,rHlyE具有溶血活性。以透析后的rHlyE作为抗原,按照50μg/只的剂量免疫小鼠,对照组于相同时间点注射等量PBS,共免疫3次间隔14 d,并于首免后不同时间采血,采用间接ELISA方法检测两组小鼠血清特异性抗体水平,并于三免后18 d以2 LD_(50)的APEC菌液攻毒小鼠,观察7 d内小鼠的死亡情况;于首免后28 d剖杀各组小鼠取其脾脏制备脾淋巴细胞,采用流式细胞术分别检测CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞亚型比率,对rHlyE的免疫原性进行评估。间接ELISA检测结果显示,该蛋白能够诱导机体产生体液免疫应答,分泌高表达量的IgG抗体,抗体水平于三免后15 d达到最高水平。rHlyE免疫攻毒保护试验结果显示,免疫组小鼠基本无明显临床症状,7 d内存活率达80%;而对照组小鼠表现明显临床症状,于攻毒后3 d内全部死亡。流式细胞术结果显示,与对照组相比,免疫组小鼠的CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚型比率均升高。上述结果表明,rHlyE在大肠杆菌BL21中为部分可溶性表达,将其免疫小鼠后可诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答,并且可对小鼠产生较好的免疫保护效果。本研究明确了APEC HlyE蛋白的免疫原性,为APEC免疫保护蛋白的筛选以及疫苗研发提供了借鉴与参考。; 张春晓王利丽赵奇孙欣艺侯冠欣刘畅史秋梅吴同垒张志强; 关键词：禽致病性大肠杆菌溶血活性免疫原性流式细胞术

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究: 2024年; 为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示:Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48~72 h病毒滴度达到峰值108.625 TCID_(50)/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD_(50)为103.000 TCID_(50)/0.2 mL。以10^(7.676) TCID_(50)的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^(7.676) TCID_(50)/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD_(50)的Y17215-1株进行攻毒,活毒和灭活疫苗的保护率均为100%。以上结果表明:Y17215-1株具有很好的体外增殖特性和免疫原性,可以作为候选疫苗毒株。; 李秀丽王利丽王利丽田向学李富强任卫科田向学张莉路超; 关键词：增殖规律免疫原性

新型发热伴血小板减少综合征病毒灭活疫苗的制备及免疫原性研究: 2024年; 目的评估和比较采用H_(2)O_(2)与β-丙内酯为灭活剂制备新型发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)灭活疫苗的免疫原性。方法将SFTSV分别用H_(2)O_(2)与β-丙内酯灭活,并与铝胶佐剂配伍制成灭活疫苗免疫小鼠,持续21 d测小鼠体重、进食量、精神状态等,评估疫苗的安全性。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中SFTSV特异性抗体水平,中和实验测定小鼠血清中SFTSV中和抗体水平,使用流式细胞术测定脾脏中B细胞的募集与活化水平。结果研究制备的两种灭活疫苗均表现出良好的安全性,SFTSV中和抗体均值在免疫后8周效价均能达到1∶300以上,诱导的免疫反应均倾向于Th2型,且具有较高的B细胞的活化水平,其中H_(2)O_(2)灭活剂组诱导产生的中和抗体效价高于β-丙内酯灭活剂组。结论成功制备了两种在小鼠中诱导强烈体液免疫反应的SFTSV灭活候选疫苗,并提供了相关的免疫参数。H_(2)O_(2)作为灭活剂已显示出一定的优势,有助于开发有效的疫苗,为制备发热和血小板减少综合征病毒新型灭活疫苗提供研究依据。; 杨盼刘乐乐田莉韩越赵忠欣孙培录郑学星夏咸柱郑文文; 关键词：灭活疫苗中和抗体

猴痘病毒亚单位疫苗候选抗原的制备及其免疫原性研究: 猴痘是由猴痘病毒（Monkeypox virus,MPXV）感染导致的一种类似天花的人兽共患病。MPXV是一种双链DNA病毒,属于痘病毒科正痘病毒属。猴痘疫情早期在中非和西非热带雨林地区流行,美国会零星爆发。世界卫生组织...; 谭敏; 关键词：猴痘病毒大肠杆菌表达系统融合抗原亚单位疫苗免疫原性

减蛋综合征病毒Knob-S蛋白的表达和免疫原性研究: 2024年; 为研究减蛋综合征病毒亚单位疫苗,构建了表达减蛋综合征病毒(Egg drop syndrome virus,EDSV)Knob-S蛋白的大肠杆菌重组菌株,成功表达出可溶性的Knob-S蛋白,血凝(Hemagglutination,HA)和交叉血凝抑制(Hemagglutination inhibition,HI)试验结果表明,该蛋白具有良好的生物学活性。分别以HA效价为1:32、1:64、1:128的Knob-S蛋白制备油乳剂灭活疫苗,免疫147日龄SPF鸡21 d后的HI抗体检测结果显示,HA效价为1:64和1:128制备疫苗免疫组可产生良好的HI抗体(≥7.1log2),攻毒结果显示,当HI抗体效价≥6log2时可提供有效的攻毒保护。结果表明,表达的Knob-S蛋白具有良好免疫原性,可作为减蛋综合征病毒亚单位疫苗制备的候选毒株。; 王秀丽时宏超刘新文祝洪伟刘大卫于可超夏娜; 关键词：免疫原性

分子伴侣促进猪细小病毒VLPs可溶性表达及免疫原性研究: 2024年; 为了提高猪细小病毒可溶性VP2蛋白表达并研制病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗,试验经密码子优化后,合成PPV VP2基因序列,构建pET30a-PPV-VP2重组表达质粒,并与pKJE7、pGro7、pTf163种分子伴侣共同转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经诱导后分析其可溶性表达水平并优化诱导条件,进行SDS-PAGE及Western-blot鉴定。通过Ni-NTA亲和层析纯化,透析除去咪唑进行体外自组装,通过动态光散射和透射电镜观察VLPs粒径和形态。用制备的PPV VLPs疫苗采用肌肉注射免疫和鼻滴免疫昆明鼠评价其免疫原性。结果表明:当pET30a-PPV-VP2与pTf16共表达时,以0.1 mmol/L IPTG、2 g/L l-阿拉伯糖、30℃培养16 h为诱导条件,VP2蛋白在大肠杆菌的可溶性表达最高。VP2蛋白经纯化后,可自组装成直径约为23.52 nm的PPV VLPs,其血凝效价为1∶2~9。表达的VLPs制备成疫苗,通过肌肉注射方式免疫昆明鼠,HI效价极显著高于猪细小病毒灭活疫苗(P<0.001),诱导小鼠产生较高水平的抗体(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3)和细胞因子[γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)]。鼻滴免疫VLPs可以诱导产生高水平的分泌型免疫球蛋白(sIgA),VLPs无明显的副作用,具有一定的安全性。说明制备的PPV VLPs具有较好的免疫原性,诱导昆明鼠产生细胞免疫、体液免疫及平衡的Th1/Th2免疫应答,鼻滴免疫VLPs疫苗时无需佐剂辅助可诱导产生高效的黏膜免疫应答。; 吕兆伟刘冰李耀政吴惠宇徐雨昕王丹红吴丛梅殷玉和; 关键词：猪细小病毒分子伴侣 VP2蛋白免疫原性

非洲猪瘟病毒抗原蛋白p30纳米颗粒抗原的构建及其免疫原性研究: 非洲猪瘟(ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(ASFV)引发的高度致命性疾病,对全球养猪业构成了严峻威胁。ASFV属于线性双链DNA病毒,其基因组大小介于170k bp至193k bp之间,展示出复杂的多层次结构。在现有的AS...; 孙瑞泽; 关键词：非洲猪瘟病毒免疫原性

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