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一种从异源表达细胞或原代培养细胞中分离外泌体的方法及其在生物分析中的应用: 一种从异源表达细胞或原代培养细胞中分离外泌体的方法及其在生物分析中的应用，属于生物医药技术领域。本发明从异源表达细胞或原代细胞中分离外泌体的方法，包括：对含有外泌体的待提取液进行差速离心后，取第一上清液再进行高速离心，在...; 霍斯特梵格郭李伟饶智丽郭豪杰王芳芳张华威袁曙光

一种人类原代培养细胞基因组编辑、定点基因敲入方法: 本发明提供一种人类原代培养细胞定点基因敲入方法，利用基于切口酶产生DNA单链缺口的技术，辅以一套同源重组修复因子RecOFAR来实现高效、精确、定点的人类原代培养细胞基因组编辑，包括定点基因敲入整合。本发明方法大幅度提高...; 杨宇丰何小镇陈文锋; 文献传递

胃癌组织中miR-45表达及其对胃癌原代培养细胞5-FU敏感性的影响被引量：6: 2020年; 目的胃癌中微小RNA-145(miR-145)存在异常表达,但miR-145与胃癌化疗耐药的关系罕见报道。本研究探讨胃癌组织中miR-145表达与肿瘤细胞对氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)化疗敏感性关系及临床意义,为改善5-FU对胃癌的化疗效果提供依据。方法收集2017-06-01-2019-10-31河北医科大学第四医院外科确诊并手术的70例胃癌患者肿瘤及癌旁组织(距肿瘤边缘>3cm,镜下未见到癌或不典型增生组织),实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测组织中miR-145及多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)、B淋巴细胞/白血病-2(B lymphatic leukaemia 2,Bcl-2)、Livin和胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)基因的mRNA表达;免疫组化法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、Bcl-2、Livin和TS蛋白表达;噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测胃癌细胞对5-FU的体外敏感性。结果miR-145在胃癌组织水平(0.389 0±0.111 8)低于癌旁正常组织(0.505 7±0.202 0),差异有统计学意义,t=-4.229,P<0.001;胃癌组织MDR1、Bcl-2和TS的mRNA水平均高于癌旁正常组织,均P<0.05。MTT结果显示,肿瘤组织细胞在5-FU作用后活性为(46.081±15.721)%;miR-145高水平的肿瘤细胞对5-FU的活性(42.223±13.478)%低于miR-145低水平者(50.406±17.090)%,t=-2.236,P=0.029;在胃癌组织中P-gp、Bcl-2和TS蛋白阳性的肿瘤组织对5-FU的活性高于阴性表达者(P<0.05),Livin表达与肿瘤组织对5-FU的活性无关(P>0.05)。miR-145与Bcl-2(r=-0.510 6,P<0.001)、TS(r=-0.403 2,P=0.000 5)的mRNA表达关系经Spearman秩相关分析发现均存在中度负相关,与MDR1(r=-0.203 2,P=0.091 6)、Livin(r=-0.174 3,P=0.149 0)的mRNA无统计学意义的相关。结论 miR-145可能通过调节Bcl-2、TS等耐药相关基因参与了胃癌对5-FU的耐药形成。; 檀碧波张明月赵群范立侨刘庆伟李勇; 关键词：胃癌氟尿嘧啶药物抵抗

氯化锰对大鼠脑脉络丛上皮原代培养细胞的细胞周期的影响: 目的锰(manganese,Mn)及其化合物长期过量接触可引起慢性锰中毒。以脉络丛组织(choroid plexus,CP)上皮细胞为主要结构基础的血-脑脊液屏障,是外源性化合物进入中枢神经系统的首个毒性靶部位。我们前期...; 何雨欣宁钧宇敬海明李子南冯颖刘晶晶杨庆张鹏张文静韩高超李国君; 关键词：氯化锰血-脑脊液屏障细胞周期; 文献传递

一种人类原代培养细胞基因组编辑、定点基因敲入方法: 本发明提供一种人类原代培养细胞定点基因敲入方法，利用基于切口酶产生DNA单链缺口的技术，辅以一套同源重组修复因子RecOFAR来实现高效、精确、定点的人类原代培养细胞基因组编辑，包括定点基因敲入整合。本发明方法大幅度提高...; 杨宇丰何小镇陈文锋; 文献传递

兴义维蚋蚋卵(胚胎)原代培养细胞核型分析: 2016年; 目的：分析兴义维蚋蚋卵（胚胎）原代培养细胞核型。方法：应用组织块法处理野外采集兴义维蚋蚋卵（胚胎），以改良Shields and Sang M3为基础培养基，pH 6.0-6.5，置于28℃生化恒温培养箱中进行原代细胞培养，选取10个处于有丝分裂增殖时期的细胞，通过秋水仙素处理，制作中期染色体标本，进行核型分析。结果：显微镜下观察，前中期染色体为3对（2n=6），染色体凝集程度未达最大化呈现长杆状，染色体长度为9.43-13.58μm；中期染色体为3对（2n=6），高度凝集呈现短杆状，染色体长度为2.43-4.67μm，两条中期染色体臂比值〈1.67，属中着丝粒染色体，4条染色体臂比值〉1.67，属亚中着丝粒染色体。结论：初步阐析了兴义维蚋蚋卵（胚胎）原代培养细胞核型特征。; 周静刘占钰徐旭崔立秋陈汉彬杨明; 关键词：蚋科胚胎原代细胞核型分析

五种抗肿瘤药物对原发性乳腺癌原代培养细胞化疗效果的影响因素分析被引量：3: 2015年; 目的分析多西他赛(DOC)、吡柔比星(THP)、表柔比星(EPI)、长春瑞滨(NVB)、顺铂(CDDP)对原发性乳腺癌原代培养细胞单药化疗有效率的相关影响因素。方法原发性乳腺癌患者536例,均手术切取新鲜乳腺癌组织。采用胶滴肿瘤药敏检测(CD-DST)技术检测原发性乳腺癌细胞对DOC、THP、EPI、NVB、CDDP单药化疗有效率。结果在乳腺癌原代培养细胞中,DOC、EPI、THP、CDDP、NVB的单药有效率分别为46.5%、42.9%、42.7%、42.5%、34.0%。DOC在年龄<60岁、ER阴性、p53阳性、非Luminal型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均<0.05),EPI在ER阴性、Her-2阳性、非Luminal型、非Luminal A型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均<0.05),THP在组织学Ⅲ级、Her-2阳性乳腺癌细胞中单药有效率高(P均<0.05),CDDP在ER阳性、Luminal型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均<0.05),NVB在PR阳性、Luminal B型和非Her-2过表达型乳腺癌细胞中单药有效率高(P均<0.05)。结论年龄、分子分型、组织学分级等因素影响抗肿瘤药物的化疗有效性,不同临床病理参数对5种化疗药物有效性影响不同。; 姜鹏玲尼杰谷峰李春艳张敏付丽只向成; 关键词：药物敏感性化疗药物

乳腺癌组织原代培养细胞中的干细胞检测及其临床意义研究被引量：3: 2014年; 目的：①探讨具有干细胞标记特性的ALDHCD44＋细胞在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况。②探讨乳腺癌ALDHCI）44＋细胞与肿瘤免疫组化指标ER、PR、Her2及Ki67之间的关系。方法：①实验组选取24例乳腺癌患者的术中新鲜癌组织，另取17例癌旁2cm组织标本作为对照。机械一酶方法消化组织、收集细胞悬液，并行肿瘤细胞原代培养，再经流式细胞仪检测ALDHCD4g＋细胞的含量。②利用统计学相关分析及￡检验方法了解乳腺癌原代细胞中ALDHhiCD44‘细胞与临床免疫组化指标ER、PR、Her2、Ki67之间相关性。结果：①24例浸润性乳腺癌组织中有22例原代培养成功（培养成功率为91．67％），17例癌旁组织中有14例能够培养出原代细胞（培养成功率为82．35％）。②ALDHhiCIM4＋细胞在癌组织原代培养的细胞中含量为（4．56±2．92）％（0．56％-10．30％），在癌旁组织原代细胞中含量为（0．15±0．06）％（0．05％-0．23％），两值相比差异有统计学意义（P〈0．05）。@ALDHhiCD44‘细胞与ER（P=0．065）、PR（P=0．107）、Her2（P=0．050）表达量之间差异无统计学意义，无相关性，与Ki67（P=0．007）表达量之间差异存在统计学意义，相关系数r=0．593。结论：①利用肿瘤组织原代细胞培养、检测方法，进一步证实ALDHhiCD44＋乳腺癌干细胞的存在，其在癌灶的表达量高于癌旁组织。②结合患者临床病理结果分析，显示乳腺癌干细胞ALDHhiCD44＋与Ki67之间存在相关性，与ER、PR、Her2指标之间无相关性。; 崔军威于志强刘晓岭韦伟; 关键词：乳腺癌肿瘤干细胞原代培养免疫组化

凡纳滨对虾翻译控制肿瘤蛋白基因的克隆及其在对虾原代培养细胞中的表达研究: 尽管国内外学者们在对虾细胞建系上进行了大量的探索和不懈的努力,但对虾细胞培养技术目前仍处于原代培养水平,永生性细胞系一直未成功建立。而对虾永生性细胞系的建立对于研究对虾病毒的致病机理和制备病毒疫苗等具有重要科学意义。在哺...; 王晶; 关键词：凡纳滨对虾细胞培养基因克隆; 文献传递

肿瘤坏死因子α诱导早孕原代培养细胞滋养细胞的凋亡被引量：4: 2014年; 目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对早孕细胞滋养细胞凋亡的影响.方法选取正常妊娠早孕（7～9周）绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养细胞进行原代培养.A组6孔培养皿分别加入10 μL PBS,10 μg/mL,100 μg/mL TNF-a,B组双孔对照.24 h后分别收集细胞使用RT-PCR方法测定Bax和Bcl-2的表达.并使用TUNEL方法测定细胞凋亡数目.结果 A组与B组相比,TNF-α可以明显增加Bax的表达（P〈0.05）,并呈剂量相关性.TUNEL方法测定显示：与B组相比,A组凋亡细胞数明显增加（P〈0.05）.结论 TNF-α可以诱导早孕细胞滋养细胞的凋亡.; 张琳琳张晓萍刘媛; 关键词：细胞滋养细胞凋亡肿瘤坏死因子-Α

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