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一种FHV-1和FCV的双重荧光定量PCR检测引物及其应用: 本发明公开了一种FHV‑1和FCV的双重荧光定量PCR检测引物及其应用，所述的引物对和探针组合中包含有：1)用于检测猫疱疹病毒病株FHV的引物对和探针，其上游引物的序列为SEQ ID NO:1，下游引物的序列为SEQ I...; 静争

鹅星状病毒Ⅰ型与Ⅱ型双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用: 2025年; 为建立一种快速检测鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)Ⅰ型(GAstV-1)与Ⅱ型(GAstV-2)的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法,试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物,将PCR扩增的两个片段分别克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒作为阳性质粒标准品,建立检测并鉴别GAstV-1与GAstV-2的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行评估,并运用该方法对28份疑似痛风雏鹅临床样品进行检测。结果显示:建立的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法检测GAstV-1、GAstV-2的标准曲线相关系数均在0.99以上,批间、批内重复变异系数均小于0.7%,最低检测限度均为10 copies/μL;该方法对鸭肝炎病毒、禽流感病毒、鹅细小病毒均无特异性扩增,同时检测GAstV-1与GAstV-2未出现交叉反应;该方法检测28份临床样品的GAstV阳性率为92.8%,其中GAstV-1和GAstV-2均为阳性的有6份,仅GAstV-2阳性的有18份,仅GAstV-1阳性的有2份。研究表明,建立的荧光定量PCR检测方法可用于GAstV-1与GAstV-2的鉴别检测,并且当前引发GAstV感染的主要病原依然是GAstV-2,GAstV-1和GAstV-2混合感染情况也同时存在。; 姚展杏王超林寅盛赵丹张嘉家伍辉吉朱婉君张济培陈济铛; 关键词：雏鹅痛风

一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用: 本发明公开了一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用；所述AIE阴道分泌物双重荧光染色液包括荧光剂；所述荧光剂包括第一荧光剂和第二荧光剂；第一荧光剂与第二荧光剂的摩尔比为1：（1‑6）。本发明AIE阴道分泌物双重荧光染...; 唐本忠何柳赵雪健王志明刘勇龚晚君

一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用: 本发明公开了一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用；所述AIE阴道分泌物双重荧光染色液包括荧光剂；所述荧光剂包括第一荧光剂和第二荧光剂；第一荧光剂与第二荧光剂的摩尔比为1：（1‑6）。本发明AIE阴道分泌物双重荧光染...; 唐本忠何柳赵雪健王志明刘勇龚晚君

人源TREM2蛋白的双重荧光标记活细胞样品及其制备方法和应用: 本发明提出一种人源TREM2蛋白的双重荧光标记活细胞样品及其制备方法和应用，涉及生物标记技术领域，其中，制备方法包括以下步骤：S1、基因扩展和融合：将红色荧光蛋白序列、TREM2基因编码序列及绿色荧光蛋白序列依次相连，得...; 徐亚廷张国良夏章伍静李卓家李银凤

具有双重荧光特性的不对称螺旋型荧光染料及其合成方法和应用: 本发明提供了一类具有双重荧光特性的不对称螺旋型荧光染料及其合成方法，该系列材料不仅结构简单，而且合成便利，并且能够利用其TICT和AIE性质，用作检测有机溶剂种类或极性的荧光探针，或温度传感荧光探针或有机溶剂中水分含量检...; 高鹏许剑斌

PEDV与TGEV双重荧光RT-LAMP检测方法的建立与评价: 2024年; 为建立可快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的双重荧光RT-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,从GenBank下载PEDV和TGEV不同毒株M基因序列进行比对后,针对高度保守区设计合成内、外引物对和探针,在PEDV探针5′端标记FAM基团,3′端标记BHQ1基团,在TGEV探针5′端标记CY5.5基团,3′端标记BHQ2基团,对反应条件和体系优化后建立了一种快速鉴别PEDV和TGEV的双重荧光RT-LAMP检测方法。采用建立的方法在63℃水浴锅中反应60 min,然后再85℃作用10 min结束反应,将反应管置于多色荧光成像仪,在520、690 nm双通道下即可观察结果。用该方法检测其他猪常见病毒性病原均无交叉反应;以10倍稀释的重组质粒为模板评价该方法的灵敏度,结果最低检测限为10^(2)拷贝/μL重组质粒,是常规RT-PCR方法敏感度的10倍。从175份有腹泻症状仔猪的肛拭子样品中采用建立的方法共检出PEDV阳性样品72份,TGEV阳性样品49份,PEDV和TGEV混合感染样品40份,均比采用常规RT-PCR方法的检出率高。本研究建立的双重荧光RT-LAMP方法采用普通水浴锅即可进行扩增反应,而无需对反应产物进行凝胶电泳,为快速方便的进行PED与TGE的鉴别诊断和PEDV与TGEV混合感染的同步检测提供了技术支撑。; 臧冉徐飞飞郑丹阳赵治钤赵谜王慧高洁穆杨; 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒

用于检测猫疱疹病毒Ⅰ型以及猫杯状病毒的一步法双重荧光定量PCR检测试剂盒及其应用: 本发明公开了一种用于检测猫疱疹病毒Ⅰ型以及猫杯状病毒的一步法双重荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。本发明根据FHV‑1CIRC基因、FCV ORF1基因和ORF2基因序列分别设计引物与探针，经反应体系和反应条件优化后，建...; 刘家森贾洪林康洪涛姜骞梁雨萌郭焕平

猪流行性腹泻病毒经典毒株与变异毒株双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用: 2024年; 建立一种可以快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典毒株和变异毒株的TaqMan双重实时荧光定量PCR。参照GenBank中收录的36株经典毒株和变异毒株的基因序列,设计特异性引物和探针优化反应条件。进行双重实时荧光定量PCR的特异性试验、灵敏性试验和重复性试验,并绘制标准曲线。本研究建立的方法和国家标准方法同时对临床收集的样品进行检测。通过条件优化,该方法的最佳退火温度是60℃,最佳引物浓度为0.5μmol/L,最佳探针浓度为0.5μmol/L。本方法对猪场常见疫病病毒PRRSV、ASFV、CSFV、PCV2、PCV3、PRV、PPV、TGEV均无交叉反应,特异性强。对N基因和S基因的检测下限分别为1 copies/μL和10 copies/μL。以N基因和S基因重组质粒构建的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数(R^(2))均为0.999。组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。临床样品检测结果为阳性率17.09%,与国标推荐的检测方法阳性率一致;变异毒株阳性率80%,经典毒株阳性率20%,与扩增S基因测序比对后结果一致。本研究建立一种具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点的双重实时荧光定量PCR方法,对PED风险预警及毒株分型具有重要意义。; 苏金辉邓云贵夏冰; 关键词：猪流行性腹泻病毒变异毒株实时荧光定量PCR

双重荧光逆转录-聚合酶链式反应与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒: 2024年; 目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。; 邓迎春郭旭光牛会敏任宝红韩小改郭瑞

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