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小鼠肺组织单细胞悬液制备的酶消化比较研究
2025年
该研究比较两种胶原酶及配合使用Percoll细胞分离液对小鼠肺组织单细胞悬液中淋巴细胞得率、活性和数量的影响,为单细胞测序前处理提供技术参考。将12只C57BL/6小鼠随机分为四组,分别是Ⅰ型胶原酶消化组(G1)、Ⅰ型胶原酶消化+Percoll细胞分离组(G2)、Ⅳ型胶原酶消化组(G3)和Ⅳ型胶原酶消化+Percoll细胞分离组(G4)。四组方所提取的肺组织单细胞悬液,于显微镜下进行形态学观察,拍照并计数,后采用流式细胞术检测单个核细胞、活细胞和淋巴细胞的得率和数量,以及不同免疫细胞亚群的比例和数量。结果显示,两种胶原酶对小鼠肺组织细胞解离效果无明显差异,G1组制备的肺单细胞数量显著高于G3组(P<0.05)。相同数量的细胞中,G2和G4组获得单个核细胞、活性细胞、CD45^(+)细胞、CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、NK细胞个数均显著高于G1和G3组(P<0.05),但在CD4^(+)T细胞、CD11c^(+)细胞、NKT细胞个数上没有显著优势。应用Ⅰ型胶原酶消化可以获得更多的细胞总数,但应用Ⅳ型胶原酶消化可以获得更多的淋巴细胞。经过Percoll细胞分离液处理的G2和G4组可以分离获得更高活性的单个核细胞、CD45^(+)细胞、CD3^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和NK细胞,该研究为今后进行肺组织单细胞测序前处理提供了重要的技术参考。
董心怡谢楠希徐玉东王宇杨永清陈艳焦
关键词:小鼠酶消化法
一种利用煅烧-消化提高磷矿品位且除杂的方
本发明公开了一种利用煅烧‑消化提高磷矿品位且除杂的方,涉及磷矿选矿技术领域。本发明包括以下步骤:磷矿破碎:将磷矿原料输送至颚式破碎机进行粗碎,粗碎后的矿石再进入圆锥破碎机进行中碎,中碎后的矿石进入球磨机进行细碎,同时...
褚寿晶刘伟伟胡德兴阳倩王序聂登攀
小鼠肠道固有层单细胞悬液制备的酶消化比较研究
2024年
目的探究小鼠小肠固有层单细胞悬液制备的最佳酶消化。方采集10根长度一致的小鼠小肠,随机分为两组,每组分别采用以胶原酶A或胶原酶VIII为主的酶消化制备固有层单细胞悬液,比较这两种酶消化对单细胞悬液细胞获得率、细胞活性和细胞表面抗原的影响,然后对较优酶消化制备的单细胞悬液进行流式检测。结果与以胶原酶VIII为主的酶消化相比,以胶原酶A为主的酶消化可以获得更高的细胞产量(9.48±1.10)×10^(9) vs(4.18±1.02)×10^(9)、活细胞比例(86.36±3.32)%vs(61.62±10.93)%以及活性CD45^(+)细胞比例(57.19±5.11)%vs(26.01±11.44)%、活性CD3^(+)细胞比例(8.73±2.89)%vs(4.52±2.49)%、活性CD4^(+)细胞比例(6.19±2.09)%vs(3.22±1.91)%和活性B220^(+)细胞比例(15.06±4.27)%vs(5.07±2.20)%,为后续流式检测提供了高质量细胞。结论以胶原酶A为主的酶消化更适合于小鼠小肠固有层单细胞悬液的制备。
曾勤梁莹王新慧闫蕾王湘鹏杨嘉仪余仁欢
关键词:单细胞悬液酶消化法流式细胞术
一种生物蛋白酶联合二级厌氧消化污泥脱水方
本发明公开了一种生物蛋白酶联合二级厌氧消化污泥脱水方,涉及污泥脱水技术领域;具体包括以下步骤:将污泥从污水处理系统中收集起来,对污泥进行预处理;对预处理后的污泥投入搅拌釜中进行热处理和均匀搅拌;向搅拌釜中间歇投入比例...
李恩胜
不同酶消化提取猪原代肝细胞的效果比较
2024年
猪肝细胞是猪圆环病毒的靶细胞,简单快速地提取猪原代肝细胞对于研究猪圆环病毒病的致病机制具有重要意义。该文采用离体酶消化,比较胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、Ⅳ型胶原酶、Ⅱ型和Ⅳ型胶原酶混合物提取猪原代肝细胞的效果。结果显示,这4种酶消化均能获得有功能的肝细胞,其中胶原酶混合物分离的肝细胞数量最多,胰蛋白酶分离的肝细胞数量较少,Ⅱ型、Ⅳ型胶原酶消化分离的肝细胞排列整齐、边界清晰。
周徐倩董磊
关键词:原代肝细胞圆环病毒圆环病毒病
非酶消化获取树鼩大脑星形胶质细胞的分离培养方
本发明涉及一种非酶消化获取树鼩大脑星形胶质细胞的分离培养方,属于细胞分离培养技术领域。本发明以gentleMACS全自动组织处理器解离脑组织,消化传代时用TrypLE Express替代常用的胰酶来消化树鼩大脑星形胶...
代解杰施梅言王文广罕园园阮蕾颖陆彩霞李娜孙晓梅仝品芬
一种生物蛋白酶联合二级厌氧消化污泥脱水方及装置
本发明公开了一种生物蛋白酶联合二级厌氧消化污泥脱水方及装置,该方包括:将污泥以0‑140℃热水解,将热水解后的污泥以50‑55℃一级厌氧消化处理,将一级厌氧消化处理后的污泥混合生物蛋白酶,生物蛋白酶投加量为污泥干基...
王玮王佳伟任征然赵亚伟陈沉文洋韩军付兴民
一种小鼠肝脏逆行灌注消化同步分离多种原代细胞的方
本发明属于细胞技术领域,涉及小鼠肝脏多种原代细胞的分离,是一种用于小鼠肝细胞、肝星状细胞和肝单个核细胞分离和纯化的简易可行方案,适用于一般实验室的小鼠体内相关细胞分离及进一步培养。本发明所提供的方核心是在小鼠下腔静脉插...
甘建纪翠锋全无暇王江涛缪延栋时巍巍
用于一步消化去除真核生物核糖体RNA的试剂和方
本发明属于微生物或酶领域,公开了一种一步消化去除真核生物核糖体RNA的试剂和去除方。所述试剂包括RNase H和DNase I的混合酶。本发明采用RNase H与DNase I的混合酶,配合缓冲溶液,使混合酶中的各单...
杨亮张亚红王凯韩典林
仿生消化估测生长猪饲料有效能的准确性及可加性研究
2024年
旨在探讨仿生消化估测生长猪饲料原料消化能(DE)、代谢能(ME)和净能(NE)的准确性和可加性,为快速获得生长猪饲料的有效能值提供参考。采用单因素完全随机设计,以生长猪仿生消化测定12个能量饲料、9个蛋白质饲料,以及由上述21个饲料原料配制的17个饲粮的酶水解物能值(EHGE),每个处理5个重复,每个重复1根消化管。通过EHGE、粗蛋白(CP)和酸性洗涤纤维(ADF)估测DE、ME及NE值。比较饲料原料有效能(DE、ME、NE)估测值与GB/T 39235-2020中同本研究同名的17个饲料原料的能量利用率乘以总能(GE)实测值得出的体内有效能值的差异及相关性,以验证仿生消化估测饲料有效能的准确性。根据饲料原料的有效能估测值计算饲粮有效能加权值,并根据饲粮EHGE估测有效能的数学模型获得饲粮的有效能值,比较两者的差异以验证仿生消化估测饲料有效能值的可加性。结果表明,采用GB/T 39235-2020计算的17个饲料原料的DE、ME、NE对EHGE结合CP、ADF估测的有效能值线性回归模型的决定系数(R2)分别为0.774,0.778和0.870。回归诊断分析发现,米糠、小麦麸和玉米胚芽粕偏离了其他14个饲料原料样品体内值与估测值的线性关系■。剔除上述3个样品后,GB/T 39235-2020计算的体内有效能对估测值线性回归的决定系数高于0.93。17个试验饲粮的EHGE实测值对加权计算值,DE、ME和NE的估测值对加权计算值的线性回归与Y=X重叠(R2>0.95,P<0.01)。上述结果表明,仿生消化可以满意地估测14个饲料样品的有效能值,但低估了米糠和小麦麸的有效能值,却高估了玉米胚芽粕的DE和ME。仿生消化测定的EHGE及通过EHGE估测的DE、ME、NE均具有良好的可加性。
任聪张虎王钰明解竞静萨仁娜赵峰
关键词:生长猪饲料原料有效能

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作品数:649被引量:3,229H指数:29
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供职机构:上海交通大学医学院附属第九人民医院
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