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毒害艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA文库的构建与筛选及3-1E{1}的克隆表达: 鸡球虫病是由一种或数种艾美耳球虫寄生于鸡消化道上皮细胞内而引起的一种原虫寄生虫病,严重危害养鸡业。目前,球虫病的防治主要依赖化学药物或鸡球虫病活疫苗,虽然人们采取了穿梭用药、轮换用药、联合用药等各种措施,但球虫几乎对所有...; 蔡秀清; 关键词：毒害艾美耳球虫第二代裂殖子 CDNA文库 3-1E基因原核表达; 文献传递

鸡柔嫩艾美耳球虫HN株3-1E{1}的原核表达与鉴定被引量：1: 2015年; 根据已报道的柔嫩艾美耳球虫3-1E{1}序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到1条特异片段,将扩增产物克隆至p MD-18T载体,转化感受态菌JM109,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与已发表的国内外相关虫株的3-1E{1}序列比较,核苷酸的同源性均在99.2%-99.8%,氨基酸的同源性均在98.2%-100%。然后将重组质粒和表达载体p GEX-4T-1分别用Xho I和EcoR I酶切后构建重组表达载体p GEX-3-1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测显示,3-1E{1}在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白的分子量为44.7 ku,诱导表达5 h的蛋白表达量可达到30%以上。; 张艳刘海隆曹宗喜林哲敏谭树义; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因原核表达

柔嫩艾美耳球虫海南株3-1E{1}的克隆与序列分析: 2014年; 为了研究鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)海南(HN)株3-1E{1}的遗传变异情况,试验根据GenBank发表的鸡堆型艾美耳球虫(E.acervulina)美国株(US)3-1E{1}cDNA序列(登录号为AF113613)的开放阅读框(ORF)设计1对引物,采用RT-PCR方法从E.tenella HN株总RNA中扩增3-1E{1},将扩增产物与pMD18-T载体连接后进行测序和序列分析,并与已发表的E.tenella相关序列进行比较。结果表明:E.tenella HN株3-1E{1}全长为513 bp,与已发表的国内外虫株的3-1E{1}序列相比,核苷酸有5个位点发生变化,其中有4个位点的变化引起氨基酸发生改变,还有1个位点的变化未引起相应氨基酸发生改变。经系统发育树分析发现:同种间比较,E.tenella HN株3-1E{1}与E.tenella sporozoite antigen株的遗传关系最近;同属间比较,E.tenella HN株3-1E{1}与E.acervulina US株的遗传关系最近。; 张艳刘海隆曹宗喜林哲敏谭树义; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因克隆

柔嫩艾美耳球虫3-1E{1}工程活载体疫苗对肉鸡的保护效果被引量：9: 2014年; 选1日龄健康的艾维音肉鸡120羽,随机分为非感染非免疫对照组(CK1组)、感染非免疫对照组(CK2组)、芽孢杆菌空载体对照组(Bacillus subtilis[pBE2],记为BS-P组)和基因工程菌试验组(Bacillus subtilis[pBE2-{1}1E],记为BS-{1}1E组)。试验组每千克饲料添加108 CFU重组枯草芽孢杆菌。17日龄时,各组鸡(CK1组除外)口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊5×104个/羽,感染后8d测定抗球虫指数,并每个重复随机抽取5只体质量相近的肉鸡测其生理生化指标。结果显示,试验组活载体疫苗对感染柔嫩艾美耳球虫的肉鸡有显著生理保护效果,抗球虫指数(ACI)B.S-{1}1E组显著低于CK1,比CK2组显著提高了18.8%(P<0.05)。同时,与CK2组相比,试验组肉鸡血清一氧化氮合成酶(iNOS)活力和一氧化氮(NO)含量显著提高(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、过氧化氢酶(CAT)活力显著上升(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01);乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)含量显著升高(P<0.05),尿酸(UA)、血清葡萄糖含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。结果表明,表达{1}-1E抗原基因的重组枯草芽孢杆菌作为活载体疫苗对肉鸡抵抗柔嫩艾美耳球虫感染具有一定的保护效果。; 余东游史艳云邓斌毛翔飞林志伟李卫芬; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因枯草芽孢杆菌活载体疫苗肉鸡免疫保护

低温诱导堆型艾美耳球虫3-1E{1}的可溶性表达被引量：2: 2012年; 设计合成特异引物应用RT-PCR技术扩增堆型艾美耳球虫的3-1E{1}。通过EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,{1}连接到表达载体PET28a上,转化入Escherichia coli BL21(DE3)感受态细菌,挑取阳性菌落。经过双酶切和测序鉴定,证明含目的{1}的表达载体PET28a构建成功。低温(16℃)诱导表达,经过SDS-PAGE和We-stren Bolt鉴定,表明此蛋白以可溶蛋白在细菌内表达。在诱导50h,IPTG浓度为0.4mmol/L时目的蛋白表达量最大。; 姚鹏张建军王黎霞安健; 关键词：堆型艾美耳球虫

堆型艾美耳球虫ADF基因和{1}-1E基因融合表达及其免疫保护性试验: 鸡球虫病(Coccidiosis)是由艾美耳属(Eimeria)的多种球虫寄生于鸡消化道引起感染的一种严重危害养鸡业发展的原虫病,目前该病的防治主要依靠化学药物,长期应用药物易使球虫产生耐药性,以及在肉蛋中药物残留危害人...; 刘义伟; 关键词：堆型艾美耳球虫免疫保护 3-1E基因

柔嫩艾美耳球虫3-1E{1}的原核表达和真核表达质粒的构建及免疫保护性研究: 鸡球虫病（Coccidiosis）是由艾美耳科（Eimeriidae）艾美耳属（Eimeria）球虫引起的一种严重危害鸡生长发育的寄生原虫病。该病呈世界性分布，难于防治。迄今公认的鸡艾美耳球虫病的病原有9种，其中柔嫩艾美...; 扈炳新; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因原核表达真核表达质粒免疫保护性; 文献传递

柔嫩艾美耳球虫杨陵株3-1E{1}的克隆与序列分析被引量：2: 2010年; 根据GenBank发表的鸡柔嫩艾美耳球虫(Ei meriatenella)3-1E{1}的ORF设计一对引物,用RT-PCR方法从E.tenella杨陵(YL)株总RNA中扩增3-1E{1},并将扩增产物与pMD18-T easy载体进行连接并测序,用DNAstar 5.0软件对测序结果进行分析。结果表明,2009年分离的E.tenellaYL株3-1E{1}与其他虫株相比,核苷酸有9个位点发生变化,其中7个位点的变化引起了相应氨基酸位点的改变,其他2个位点的变化未引起氨基酸的改变。对2006年和2009年分离的YL株3-1E{1}的核苷酸进行了比对,结果发现,有两个核苷酸位点发生了变化。系统发育树分析表明,E.tenellaYL株3-1E{1}同种间与E.tenella甘肃株遗传关系最近,同属间与E.acervulina法国株遗传关系最近。; 战美娜林青于三科宋军科; 关键词：艾美耳球虫 3-1E基因

鸡柔嫩艾美耳球虫哈尔滨株3-1E{1}的重组表达及其表达产物的免疫保护性被引量：5: 2010年; 应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫哈尔滨株子孢子表面抗原3-1E{1},再克隆至质粒载体pMD18-T中,获得重组质粒pMD18-T-3-1E,采用EcoRⅠ+HindⅢ双酶切法及PCR扩增鉴定正确后,将3-1E{1}cDNA目的片段亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒pET-32a-3-1E,用EcoRⅠ+HindⅢ双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确。表达蛋白的SDS-PAGE分析表明,表达产物与预期大小(36.47 ku)一致,为可溶性表达。对诱导时间以及IPTG浓度的优化结果表明,当诱导6 h且IPTG浓度在0.8 mmol/L时表达量最大。Western-blot分析表明,表达的蛋白可被感染柔嫩艾美耳球虫鸡的阳性血清特异性识别。将重组3-1E蛋白纯化后分为肌注蛋白组和肌注蛋白加弗氏完全佐剂组免疫AA鸡,通过计算抗球虫指数检测其保护力。结果显示,肌注重组蛋白组与肌注重组蛋白加弗氏完全佐剂组均能刺激鸡体产生一定的免疫反应,对柔嫩艾美耳球虫感染产生有力的保护,其中后者优于前者,表明该重组3-1E蛋白具有研制成亚单位疫苗的潜力。; 扈炳新李微韩彩霞赵黎黎李晓云宋铭忻; 关键词：柔嫩艾美耳球虫 3-1E基因克隆免疫保护性

鸡堆型艾美耳球虫3-1E{1}真核表达质粒的构建及其体外表达: 2010年; 为了构建鸡堆型艾美耳球虫(E.acervulina)3-1E{1}真核表达质粒,试验应用RT-PCR技术从E.acervulina子孢子中扩增出3-1E{1}片段,将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-3-1E,阳性克隆质粒经鉴定正确后将3-1E{1}片段亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。结果表明:阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光法和免疫组织化学技术检测到了3-1E蛋白在293T细胞中的表达,说明E.acervulina3-1E{1}真核表达质粒构建成功。; 马德星潘龙杨静红李广兴; 关键词：转染体外表达

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