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组织蛋白酶L 对脊髓损伤后小胶质细胞极化的影响研究 2024年 l component anal ysis,PCA)和一致流形近似与投影t-分布随机邻域嵌入(t-distributed stochastic neighbor embedding,t-SNE)降维,获得10个亚群细胞,并筛选出脊髓损伤后小胶质细胞中高表达的差异基因。2023年2月至2023年4月采用BV2细胞和C57BL /6小鼠进行前瞻性研究,验证组织蛋白酶L (cathepsin -L ,CTSL )的功能和作用机制。首先将BV2细胞分为7组:对照组,脂多糖(l ipopol ysaccharide,L PS)组,白细胞介素(interl eukin,IL )-4组,阴性对照(NC)-shRNA组,敲低(sh)-CTSL 组,NC-过表达(OE)组,OE-CTSL 组。动物模型分为5组:假手术(sham)组,脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)组,sh-CTSL 组,OE-CTSL 组,空白组。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative pol ymerase chain reaction,qPCR)和蛋白质印迹法(western bl ot,WB)检测CTSL 的mRNA和蛋白水平,qPCR检测肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)-α和IL -1β。流式细胞术检测M1型小胶质细胞(CD86+/CD80+)和M2型小胶质细胞(CD163+/CD206+)占比比例。免疫荧光染色检测小鼠脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶(inducibl e nitric oxide synthase,iNOS)阳性细胞数和Arg-1阳性细胞数。另外,评估5组小鼠在0、1、2、3、4周的运动神经功能(basso-beattie-bresnahan,BBB)评分。结果体外细胞实验中,对照组M1型小胶质细胞比例、IL -1β、TNF-α和M2型小胶质细胞比例均低于L PS组;L PS组M1型小胶质细胞比例、IL -1β和TNF-α高于IL -4组,而M2型小胶质细胞比例则低于IL -4组;sh-CTSL 组M1型小胶质细胞比例、IL -1β和TNF-α均低于L PS组和NC-shRNA组,而M2型小胶质细胞比例则高于这两组;OE-CTSL 组M1型小胶质细胞比例、IL -1β和TNF-α均高于IL -4�关键词：组织蛋白酶L 炎症反应 脊髓损伤 血清组织蛋白酶L 与慢性阻塞性肺疾病严重程度相关性研究 被引量：2 2021年 L (Cat-L )与慢性阻塞性肺疾病(COPD)严重程度的相关性。方法选取COPD患者170例为观察组,按肺功能分级分为四个亚组:GOL D1级(46例)、GOL D2级(46例)、GOL D3级(41例)、GOL D4级(37例);同时选取健康体检人员45例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法检测血清Cat-L 水平,同时完善肺功能及胸部高分辨率CT(HRCT)检查。比较观察组与对照组间的血清Cat-L 水平、肺功能相关指标和HRCT参数的差异,以及分析Cat-L 水平与肺功能指标及HRCT参数的相关性。结果随着COPD的肺功能分级增加,从GOL D 1级至GOL D 4级,血清Cat-L 水平逐级升高,差异有统计学意义(F=7.34,P<0.05),且GOL D1级、GOL D2级、GOL D3级、GOL D4级的Cat-L 水平均高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=3.25、4.34、5.12、6.57,P均<0.05)。观察组各级和对照组之间的第一秒用力呼气量/用力肺活量(FEV1/FVC)、FEV1占预计值的百分比(FEV1/prep)、肺一氧化碳弥散量(D_L CO)、残总气量百分比(RV/TL C)水平等肺功能指标比较,差异均有统计学意义(F分别=5.14、10.35、3.24、6.25,P均<0.05);观察组各级和对照组之间的低衰减区域占全肺体积的百分比(L AA%)、气道壁厚度/气管管腔外径(T/D)和管壁面积与总横截面面积比(WA)等HRCT参数比较,差异均有统计学意义(F分别=8.34、2.62、4.21,P均<0.05)。pearson相关性分析显示,血清Cat-L 与FEV1/prep呈负相关,与RV/TL C呈正相关(r分别=-0.47,0.35,P均<0.05)。血清Cat-L 与L AA%、T/D、WA呈正相关(r分别=0.37、0.41、0.38,P均<0.05)。结论血清Cat-L 与COPD病情严重程度呈正相关,提示Cat-L 可以作为COPD病情分级的血清标志物。关键词：慢性阻塞性肺疾病 肺功能 高分辨率CT 气道重塑 组织蛋白酶-L 在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义 被引量：2 2018年 L (CTSL )表达情况,并分析其表达水平与PTC临床病理参数及患者预后之间的关系。方法选取乐清市人民医院2014年1月—2015年1月PTC肿瘤组织标本60例作为研究组,同时取癌旁正常甲状腺组织40例作为对照组,应用免疫组织化学分析法,检测癌组织中CTSL 蛋白表达情况,并分析其表达与临床病理参数及患者预后的关系。结果在PTC患者癌组织中CTSL 表达阳性率为100.00%,显著高于癌旁正常组织中表达阳性率[5.00%(2/40)],差异有统计学意义(χ~2=87.947,P<0.001)。CTSL 高表达率在TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中分别为50.00%、80.00%、100.00%、100.00%,四者之间差异有统计学意义(χ~2=16.875,P=0.001)。CTSL 在有淋巴结转移中高表达率为97.06%,显著高于无淋巴结转移的57.69%,差异有统计学意义(χ~2=11.916,P=0.001)。肿瘤原发灶中CTSL 高表达率为82.35%(28/34),虽低于淋巴结转移灶中CTSL 高表达率[97.06%(33/34)],但差异无统计学意义(χ~2=2.548,P=0.110)。结论 PTC肿瘤组织中CTSL 表达水平的上调与TNM分期、淋巴结转移等病理参数密切相关,可作为预测PTC的疾病进展和淋巴结转移潜能的辅助指标。关键词：甲状腺乳头状癌 组织蛋白酶L 临床病理参数 预后 Identification and characterization of a cathepsin -L -l ike peptidase in Eimeria tenel l a 文献传递 Cathepsin-L 在缺血心肌中的表达 被引量：2 2012年 cathepsin -L (CTSL )在大鼠早期缺血心肌中的表达变化,并探讨其法医学意义。方法建立大鼠早期心肌缺血模型,设置早期缺血组(earl y ischemic myocardium,EIM)、非缺血组(non-ischemic myocardium,NIM)、假手术组以及空白对照组,采用real -time PCR方法检测大鼠缺血后15min,30min,1h和2h CTSL mRNA的表达量,并进行组内和组间比较。收集心源性猝死者缺血心肌和机械性损伤致死者正常心肌样本,采用免疫组化染色方法观察心肌组织中CTSL 蛋白表达。结果 EIM组CTSL mRNA表达量与NIM组、假手术组及空白组相比,在15min时无统计学意义(P>0.05),在30min、1h和2h时分别升高1.4、3.1和4.5倍(P<0.05);其余3组间差异无统计学意义(P>0.05)。观察10例冠脉狭窄程度Ⅲ～Ⅳ级的心源性猝死(SCD)者缺血心肌,CTSL 表达增强。结论大鼠心肌缺血后早期即可检测到CTSL mRNA的升高,并在SCD冠脉狭窄死者缺血心肌中高表达,提示CTSL 可作为心肌缺血与SCD的参考指标。关键词：法医病理学 早期心肌缺血 补肾法、疏肝法对促性腺激素预处理小鼠排卵过程组织蛋白酶-L 蛋白影响的比较研究 2012年 L 蛋白的影响。方法:选择体重16-18g未成年小鼠随机分为正常组、对照组、疏肝组和补肾组超促排卵,采用Western bl ot、免疫组化方法检测注射hCG后0h、4h、8h、12h Cat L 蛋白在各组小鼠卵巢的表达强度。结果:注射hCG后4h与对照组比较,疏肝组、补肾组小鼠卵巢Cat L 蛋白表达均升高(P<0.01);注射hCG后8h与对照组比较,疏肝组小鼠卵巢Cat L 蛋白表达升高(P<0.01),补肾组无统计学差异(P>0.05);注射hCG后12h与对照组比较,补肾组小鼠卵巢Cat L 蛋白表达升高(P<0.01),疏肝组无统计学差异(P>0.05)。结论:补肾法通过使卵巢Cat L 蛋白表达增强,使卵泡壁破裂而达到促排卵的作用,疏肝法通过使卵巢CatL 蛋白表达迅速达高峰起到促进排卵的目的。关键词：补肾法 疏肝法 小鼠 补肾调经方、逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠组织蛋白酶-L mRNA的影响 被引量：11 2011年 L (cathepsin -L ,Cat L )mRNA的影响。方法选择未成年小鼠随机分为正常组、对照组、逍遥丸组和补肾调经方组,每组12只,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-pol ymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测给予5IU人绒毛促性腺激素(humanchorionic gonadotropin,HCG)0、4、8、12h后Cat L mRNA在各组小鼠卵巢的表达强度。结果注射HCG0、4、8、12h后,Cat L mRNA在促性腺激素预处理小鼠对照组卵巢的表达逐渐升高,Cat L mRNA的相对表达含量分别为:0.066±0.005、0.383±0.045、0.737±0.024、1.036±0.073,各时间点比较差异有统计学意义(P<0.01)。注射HCG后4h与对照组比较,Cat L mRNA逍遥丸组、补肾调经方组小鼠卵巢表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01);注射HCG8h与对照组比较,逍遥丸组Cat L mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.01),补肾调经方组差异无统计学意义(P>0.05);注射HCG12h后与对照组比较,补肾调经方组Cat L mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.01),逍遥丸组差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾调经方通过使Cat L mRNA表达增强而达到促排卵的作用,消遥丸通过使Cat L mRNA表达高峰提前达到促排卵的目的。关键词：补肾调经方 逍遥丸 反转录聚合酶链式反应 Synthesis of the cathepsin -L 1 110-123 epitope conjugated to sequential ol igopeptide carrier and 1H-NMR conformational anal ysis in its free state l iver fl ukes Fasciol a hepatica and Fasciol a gigantica are causative agents of fasciol iasis in humans and r...组织蛋白酶L 小分子抑制剂的抗SARS-CoV-2活性研究 被引量：1 2024年 L (cathepsin L ,CatL )切割SARS-CoV-2刺突蛋白(spike gl ycoprotein,S),在病毒进入宿主细胞的过程中发挥着不可或缺的作用,因此CatL 是广谱抗冠状病毒药物开发的理想靶标之一。在本研究中,以荧光标记的底物建立CatL 酶抑制剂筛选模型,通过高通量筛选获得两个具有CatL 抑制活性的化合物IMB 6290和IMB 8014,其半数抑制浓度(hal f inhibitory concentration,IC50)分别为11.53±0.68和1.56±1.10μmol ·L -1,且细胞毒性低;聚丙烯酰胺凝胶电泳和细胞−细胞融合实验均证实了化合物浓度依赖性地抑制CatL 对S蛋白的水解作用;表面等离子体共振(surface pl asmon resonance,SPR)检测表明两个化合物与CatL 均具有中等强度的结合力;分子对接揭示了化合物与CatL 活性口袋的结合方式;假病毒实验进一步确证了化合物IMB 8014对S蛋白介导的进入过程的抑制活性;体外药代动力学评估发现,化合物可能具有良好的成药性。所有研究结果提示,这两个化合物具有治疗SARS-CoV-2感染的潜力。关键词：新型冠状病毒 组织蛋白酶L 抗病毒药物 小分子抑制剂 高通量筛选 组织蛋白酶L 抑制剂经线粒体途径抑制氧化应激诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡 2024年 L 抑制剂对视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的作用及其对线粒体氧化应激的影响。方法体外培养的人RPE细胞分为正常组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、H_(2)O_(2)+CTSL 抑制剂组。H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+CTSL 抑制剂组置于含400μmol /L H_(2)O_(2)的培养基孵育24 h;H_(2)O_(2)+CTSL 抑制剂组同时加入10μmol /l CTSL 抑制剂。正常组为常规培养细胞。建模后24 h进行后续实验。流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应检测细胞中CTSL 表达水平;MitoSOX荧光探针检测细胞中线粒体超氧化物表达水平;MitoTracker染色观察线粒体形态,定量分析线粒体平均面积、形状因子、分支节点。两组间比较采用双尾Student t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果与正常组比较,H_(2)O_(2)组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(t=3.307,P=0.0297);细胞中CTSL 表达水平升高(t=19.950、6.916、14.220,P<0.05)。与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+CTSL 抑制剂组CTSL 表达水平、细胞凋亡率、细胞线粒体超氧化物水平显著降低,差异有统计学意义(t=11.940、4.718、16.680,P<0.05)。H_(2)O_(2)+CTSL 抑制剂组细胞线粒体呈细长椭圆形或杆状;H_(2)O_(2)组细胞线粒体失去其连续轮廓与完整形态。4组细胞线粒体评价面积、形状因子、分支节点比较,差异有统计学意义(F=251.700、34.010、60.500,P<0.0001)。结论H_(2)O_(2)显著诱导RPE细胞的凋亡、CTSL 表达升高;CTSL 抑制剂可抑制H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞凋亡,降低线粒体超氧化物水平,有效恢复线粒体形态。关键词：组织蛋白酶L 细胞凋亡 线粒体 细胞实验
