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高产色素低产桔青霉素红曲霉菌筛选及发酵工艺优化研究 2024年 该研究通过扩大菌株分离源,选育优质红曲霉菌M7-5。以该菌株为发酵菌株,采用单因素试验研究大米糊化水量、发酵温度、碳源种类及添加量、氮源种类及添加量对红曲发酵色价及桔青霉素含量的影响,在此基础上,利用响应面试验优化最佳控制参数。结果表明,红曲最佳发酵条件为大米糊化水量13%、甘油添加量8%、硝酸钠添加量1.85%,在此条件下,色价与桔青霉素含量的比值(p/c值)达到22158.2。该研究可为传统红曲发酵工艺的改进和工业化应用提供参考。 殷倩倩 左勇关键词:红曲 发酵工艺 色价 响应面 基于分子对接及动力学模拟的红曲橘霉素合成小分子抑制剂的高通量筛选 2024年 通过计算机模拟技术,对红曲橘霉素合成关键酶CitE的抑制剂进行高通量筛选。首先,采用Alphafold 2对CitE蛋白进行同源建模,并与相似序列比对以预测配体结合区域;随后,在Arthor数据库中检索天然配体和黄酮骨架类似物,构建了一个包含20000个化合物的配体库;之后,通过Maestro对CitE蛋白和小分子化合物库进行分子对接,筛选出潜在的CitE配体;并采用Gromacs动力学模拟评估结合稳定性,通过MM/PBSA计算结合自由能,之后对蛋白-配体的结合模式进行分析,进一步确定了槲皮素、木犀草素、芹菜素、染料木素、5,4’-二羟基黄酮、漆黄素6个小分子配体具有较强的CitE结合性能。固态及液态发酵结果表明,上述化合物具有显著的橘霉素抑制活性。其中,固态发酵(20mg/28g干物料)添加上述化合物分别使橘霉素产量降低42.52%、48.81%、32.54%、32.57%、21.02%和13.67%,液态发酵添加(0.1 g/L)上述化合物分别使橘霉素产量降低33.77%、15.58%、33.33%、62.34%、58.87%、50.22%。本研究对建立高效、安全的红曲发酵体系具有借鉴意义。 李居行 葛佳琦 张志宇 何苗 崔萌菲 郭庆彬 李贞景 王昌禄 刘欢欢关键词:红曲霉 抑制剂 分子对接 贵州黔东南腌鱼中桔青霉素和亚硝酸盐含量的检测及分析 2024年 目的:了解贵州省黔东南腌鱼中桔青霉素及亚硝酸盐的含量水平,为腌鱼的食用安全性提供参考。方法:采集贵州省黔东南榕江县、从江县农户自制的腌鱼,采用荧光分光光度法测定样品中桔青霉素含量,盐酸萘乙二胺可见分光光度法测定样品中亚硝酸盐含量。结果:检测腌鱼样品共60份,检测出的桔青霉素平均含量为0.1725μg·kg^(-1),亚硝酸盐平均含量为1.3820 mg·kg^(-1)。对榕江县、从江县两县的桔青霉素、亚硝酸盐检出含量进行比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:腌鱼样品中桔青霉素和亚硝酸盐含量较低,均未超过食品安全国家限量标准要求。 肖星 杨婕妤 邵征洋 谭俊逸 尤伟雄 汪希兰关键词:腌鱼 亚硝酸盐 降解桔霉素酵母菌的筛选及降解条件的优化 2024年 目的从阿瓦提红葡萄果园土壤以及实验室现有酵母菌株中筛选出一株降解桔霉素(citrinin ,CIT)的酵母菌,并对其降解桔霉素的培养条件进行优化。方法以YES为基本培养基,将筛选得到的酵母菌与高产CIT红曲菌M7共培养,挑选对CIT降解率较高的菌株,采用形态学和分子生物学进一步对菌株进行鉴定,采用单因素结合正交试验法优化酵母菌降解CIT的培养条件。结果得到一株降解CIT能力较高的酵母菌株PT,经鉴定为库德毕赤酵母,酵母菌PT降解CIT的最优条件为:葡萄糖添加量为165 g/L,FeSO_(4)添加量为0.50 g/L,pH为3.0,于28℃培养13d,在此培养条件下酵母菌PT对CIT的降解率为76.78%。结论采用生物法降解CIT是可行的途径。本研究结果可为微生物脱除CIT的方法提供参考,同时筛选的酵母菌也可应用于其他发酵食品中。 申家荣 李鑫 王娅楠 王丽玲 何毅关键词:桔霉素 酵母菌 降解 Transportation of citrinin is regulated by the CtnC gene in the medicinal fungus Monascus purpureus 2023年 Monascus is one of the most essential microbial resources in China,with thousands of years of history.Modern science has proved that Monascus can produce pigment,ergosterol,monacolin K,-aminobutyric acid,and other functionally active substances.Currently,Monascus is used to produce a variety of foods,health products,and pharmaceuticals,and its pigments are widely used as food additives.However,Monascus also makes a harmful polyketide component called citrinin in the fermentation process;citrinin has toxic effects on the kidneys such as teratogenicity,carcinogenicity,and mutagenicity(Gong et al.,2019).The presence of citrinin renders Monascus and its products potentially hazardous,which has led many countries to set limits and standards on citrinin content. Yanling GUI Guangfu TANG Haiqiao MAN Jiao WANG Jie HAN Jiehong ZHAO关键词:RENDER MONASCUS FUNGUS 桔霉素分子印迹预组装体系的量子化学模拟及吸附性能研究 被引量:1 2023年 为解决桔霉素分子印迹聚合物在构建和应用过程中模板分子泄露和功能单体筛选工作量大的问题,以1-羟基-2-萘甲酸为假模板分子,基于液相色谱法构建桔霉素和1-羟基-2-萘甲酸的同时检测方法,该方法对分子印迹洗脱液中的两种目标物具有良好的回收率(≥95%),也能对功能红曲醇提液中桔霉素进行分离。运用量子化学方法,通过分子构型优化、原子电荷分布计算和结合能计算优选了构建分子印迹聚合物的功能单体2,6-二氨基吡啶。以响应面对其制备工艺进行优化,优化后的聚合物对桔霉素的吸附载量为(195.10±13.21)ng/g,相比优化前提高了0.79倍。以甲基丙烯酸为功能单体构建的桔霉素分子印迹聚合物为对照,对比了优化后的聚合物和对照聚合物的吸附性能,前者对桔霉素的吸附载量为后者的3倍,证实计算机模拟技术在桔霉素分子印迹聚合物构建中的实用性,旨在为分子印迹聚合物的构建和桔霉素富集与检测提供参考。 周康熙 吴俐 吕旭聪 倪莉关键词:桔霉素 红曲 分子印迹 量子化学 基于系统文献检索的桔青霉素遗传毒性分析与识别 2023年 桔青霉素是由曲霉属、青霉属和红曲霉属等真菌产生的聚酮类真菌毒素,常污染谷物及其制品。桔青霉素具有明确的肾脏毒性,但其致癌性证据有限。考虑到遗传毒性试验可用于筛查化学物质潜在致癌性,本文从基因突变、染色体畸变和DNA损伤3个遗传学终点的角度对桔青霉素的遗传毒性进行综述。桔青霉素是一种致染色体畸变的遗传毒性物质,机制可能与其影响细胞有丝分裂期间微管蛋白聚合与纺锤体形成,导致细胞周期阻滞有关。本文期望为桔青霉素风险评估工作提供基础数据结论。 王柯新 谭剑斌 李庆 陈壁锋 赵敏关键词:遗传毒性 基因突变 染色体畸变 DNA损伤 两种同时检测茶叶中赭曲霉毒素A与桔霉素方法的比对 被引量:1 2023年 目的对比两种同时检测茶叶中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)与桔霉素(citrinin ,CIT)的方法。方法考察不同提取方法、溶剂、料液比的提取效果,比较适配体结合超滤法与免疫亲和柱纯化效果;对比高效液相色谱-荧光检测器(high performance liquid chromatography-fluorescence detector,HPLC-FLD)与超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定OTA与CIT的检出限、精密度、准确度等差异,评价方法的适用性。结果采用70%甲醇超声与振荡的提取方法,在料液比为1:3的条件下,OTA、CIT的提取率最佳,回收率分别为99.49%的92.77%;经适配体结合超滤纯化后,CIT与OTA的回收率为82.07%~92.95%,与免疫亲和柱纯化方法效果类似;UPLC-MS/MS测定CIT和OTA的基质效应(20.0%、-20.0%)小于HPLC-FLD测定CIT和OTA的基质效应(48.8%、50.3%),二者测定CIT与OTA均具有良好线性度,相关性系数均不小于0.9989;HPLC-FLD测定CIT与OTA的检出限分别为0.09μg/kg、0.12μg/kg;UPLC-MS/MS测定CIT和OTA的检出限分别为0.12μg/kg、0.09μg/kg,两种方法的加标回收率分别为84.20%~100.70%与89.22%~97.88%,相对标准偏差分别为1.30%~4.31%与0.74%~4.04%。结论适配体结合超滤纯化方法操作简单,成本低廉,免疫亲和柱纯化方法成本较高且低浓度下的准确度高;HPLC-FLD和UPLC-MS/MS均适用于茶叶基质中CIT与OTA的提取与检测,但后者基质效应更低,定性更准确。 王亚青 陈欢 滕建文 夏宁 韦保耀 黄丽关键词:茶叶 赭曲霉毒素A 桔霉素 适配体 超滤法 红曲桔霉素致毒机理的网络药理学分析 被引量:3 2023年 为探讨红曲中桔霉素导致毒性的内在机理,通过搜索Swiss Target Prediction、Similarity ensemble approach、Comparative Toxicogenomics Database和GeneCards数据库,利用Metascape、Kobas 3.0、Cytoscape 3.7.2和AutoDock软件,开展了网络药理学分析。结果显示,通过筛选去重获得桔霉素与“liver toxicity”和“kidney toxicity”相关的潜在靶点110个,GO富集分析功能条目496条,其中涉及分子功能、生物过程和细胞组成的条目分别为97、354和45条。KEGG信号通路富集靶点数和显著性均较高的是肿瘤MicroRNA通路、肿瘤通路、乙型肝炎等通路。桔霉素可能通过TP53、CASP3、MAPK3和ALB等关键靶点导致肝肾毒性。分子对接实验证明,桔霉素与靶点可以结合,揭示了桔霉素导致肝肾毒性的潜在作用靶点和信号通路,为进一步研究桔霉素致毒机理和健康防护提供理论参考。 唐光甫 桂艳玲 满海乔 刘畅 赵杰宏关键词:红曲霉 桔霉素 肝肾毒性 分子对接 桔青霉素诱导小鼠肠道屏障功能障碍的机制研究 被引量:1 2023年 旨在探讨内质网应激在桔青霉素诱导肠道屏障功能障碍中的作用。试验选用24只初始体重为(27.8±1.5)g的7周龄昆明小鼠,随机分为4组,分别为对照组(5%乙醇)和桔青霉素低(1.25 mg·kg^(-1))、中(5 mg·kg^(-1))、高(20 mg·kg^(-1))剂量组。适应性饲养1周后,对照组按0.1 mL·10g^(-1)体重灌胃5%乙醇,毒素处理组分别灌胃不同剂量桔青霉素,持续14 d。试验结束后,采血并分离血清,测量小肠长度并收集小鼠空肠样本。HE染色观察肠道病理变化;ELISA检测血清中二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-lactic acid,D-LA)、内毒素(endotoxin,ET)的含量;检测空肠组织抗氧化酶的活性及活性氧(reactive oxygen species,ROS)的释放。为进一步探究内质网应激在桔青霉素诱导肠道损伤中的作用,选用32只昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组(5%乙醇)、桔青霉素中剂量(5 mg·kg^(-1))组、内质网应激抑制剂4-苯基丁酸苯基丁酸(4-Phenylbutyric acid,4-PBA)(240 mg·kg^(-1))组和桔青霉素(5 mg·kg^(-1))+4-PBA(240 mg·kg^(-1))组。4-PBA经腹腔注射预处理小鼠1 h后,用桔青霉素对小鼠进行灌胃处理。14 d后,检测空肠组织病理损伤,氧化损伤,细胞凋亡情况及内质网应激相关蛋白表达,并用Spearman相关性分析确定内质网应激信号通路与肠道氧化应激、肠道屏障功能障碍之间的相关性。结果显示,不同剂量的桔青霉素会造成肠道组织损伤、氧化应激及屏障功能障碍。与桔青霉素中剂量组相比,4-PBA预处理能提高小鼠空肠总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC),降低ROS和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,抑制细胞凋亡及内质网应激,降低血清中DAO、D-LA和ET的含量,升高空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1 mRNA表达,缓解桔青霉素诱导的空肠组织损伤,且内质网应激信号通路与 杨梦然 杨成林 吴悠 王思琪 孔祥祎 宁灿 肖文广 范慧 邬静 邬静关键词:内质网应激 氧化应激 细胞凋亡 肠道屏障功能障碍
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