搜索到1557篇“ ISSR-PCR反应体系“的相关文章
- 皂荚ISSR-PCR反应体系的建立与优化
- 2024年
- 建立皂荚ISSR-PCR反应体系,为皂荚遗传多样性分析、种质资源鉴定提供技术支持,以皂荚DNA为模板,对影响PCR扩增反应的4个因素(模板DNA浓度、引物浓度、Master Mix用量、PCR反应循环数)设置6个梯度并从3个水平上进行单因素优化,后采用L 9(34)正交设计,对各处理组合进行电泳检测后进行评分,对评分结果进行极差分析和方差分析,从而筛选出皂荚最佳的ISSR-PCR反应体系和扩增程序以及得出各因素对反应体系的影响程度。通过设置不同的退火温度,利用优化后的皂荚ISSR-PCR反应体系及扩增程序对已公布的100条ISSR通用引物进行筛选。研究结果表明,皂荚ISSR-PCR最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,DNA模板浓度35 ng,引物浓度5μmol/L,Master Mix用量12μL,30个循环;各因素影响大小依次是:DNA模板浓度>Master Mix用量>引物浓度>PCR反应循环数。最后在该体系下共筛选出了22条条带清晰、多态性好的引物。
- 张蕊齐钦辉朱文瑛李保会张芹
- 关键词：皂荚ISSR-PCR引物筛选
- 山豆根ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选
- 2024年
- 以山豆根为试验材料,采用正交试验考察DNA、引物、Mg^(2+)、dNTPs、Taq酶5个因素对ISSR-PCR反应体系的影响,建立并优化山豆根ISSR-PCR反应体系条件。结果表明:山豆根ISSR-PCR反应体系(20μL)最优条件为Mg^(2+)浓度3 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1 U,引物0.5μmol/L,模板DNA 100 ng,运用该体系从100条UBC引物中筛选到10条清晰、多态性好的引物。采用正交试验设计可有效建立山豆根ISSR-PCR反应的最优体系,为山豆根的亲缘关系,种质资源遗传多样性评价及品种鉴定和系统分类等研究提供科学依据。
- 李金梅关妙娟黄鼎明如宏李良波谭勇
- 关键词：山豆根正交试验引物筛选
- 蒜头果ISSR-PCR反应体系建立及验证
- 2024年
- 【目的】建立稳定的蒜头果ISSR-PCR反应体系,筛选出适用于蒜头果的多态性引物,为后续蒜头果遗传多样性研究及种质资源保护提供参考依据。【方法】采用单因素试验与L25(54)正交试验相结合的方法,对影响ISSR-PCR反应体系扩增效果的4个主要因素(模板DNA用量、引物浓度、d NTPs浓度、Taq DNA聚合酶)及反应循环数进行优化,确定最佳反应体系和条件。在此基础上筛选出适用于蒜头果的多态性引物,探究其最佳退火温度,并采集云南省境内3个野生居群10个蒜头果样品对优化的反应体系进行验证。【结果】蒜头果ISSR-PCR最佳反应体系(20.0μL):模板DNA 30 ng,ISSR引物0.3μmol/L,d NTPs 0.250 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.00 U,dd H2O补足至20.0μL。ISSR最佳反应程序为30个循环。利用优化后的反应体系筛选出了8条引物(UBC825、UBC826、UBC827、UBC836、UBC844、UBC861、UBC834和UBC851)的最佳退火温度,分别为50.2、56.5、50.2、56.5、50.2、50.2、50.2和54.0℃,部分引物(如UBC827、UBC836、UBC861等)实测最佳退火温度与软件预测退火温度存在明显差异。采用优化后的ISSR-PCR反应体系及引物对10个蒜头果样品进行ISSR-PCR分子标记检测,结果显示建立的ISSR-PCR反应体系稳定可靠,不同采样点的蒜头果在遗传上相对保守,且10个蒜头果样品的遗传分化系数(Gst)为0.74,说明其74%的遗传多样性存在于居群间,且基因流(N_(m))为0.18,远小于1.00,说明发生遗传漂变的概率大,易发生遗传多样性降低及居群分化。【结论】通过优化蒜头果ISSR-PCR反应体系,建立可用于蒜头果ISSR-PCR分子标记扩增的稳定反应体系,可用于蒜头果种质资源保护与利用研究工作。
- 张鹏远黄久妍童海珍胡博余潇雷小铃王娟
- 关键词：蒜头果ISSR-PCR
- 冰薰2号薰衣草ISSR-PCR反应体系优化及遗传特征分析
- 2024年
- 为探究冰薰2号薰衣草的遗传特征,采用ISSR分子标记技术在优化反应体系的基础上对冰薰2号薰衣草亲代及F1代个体进行遗传多样性分析。结果显示,优化的最佳ISSR-PCR扩增体系为:在20μL体系中,dNTP(每种2.5 mmol/L)用量为1.4μL,引物(10μmol/L)用量为0.7μL,DNA模板量为20 ng,Taq DNA聚合酶用量0.75μmol/min。选取8个ISSR引物对冰薰2号薰衣草亲代及F1代个体进行试验,根据扩增结果进行计算,并分析亲代及F1代个体间遗传多样性指数。结果表明,冰薰2号薰衣草遗传多样性水平低,遗传变异度低。
- 李瑞航李婧马天意郭佳欣张梅娟彭疑芳王韬闫爽赵井泉沙伟
- 关键词：薰衣草ISSR分子标记
- 一种木芙蓉ISSR-PCR反应体系及分子标记方法与应用
- 本发明涉及一种木芙蓉ISSR‑PCR反应体系及应用，每25uL反应体系中含模板DNA 50ng，Easy Taq Buffer(with Mg<Sup>2+</Sup>)3.5ul，引物1.5ul，Taq聚合酶0.2ul...
- 李方文唐圣雯马娇朱章顺石小庆陈曦曾心美
- 枫香ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选被引量：3
- 2023年
- 为探索最适的枫香叶片DNA提取方法、最优ISSR引物和最佳ISSR-PCR扩增反应体系,本试验采用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法、高盐低pH法和试剂盒法提取枫香叶片DNA;采用三因素五水平(DNA模板用量,2×Taq Master Mix用量引物浓度)正交试验构建并优化枫香的ISSR-PCR反应体系;对100条ISSR引物进行筛选及其退火温度优化。结果表明:改良CTAB方法提取的DNA浓度高,且电泳条带清晰无污染;SDS和试剂盒方法提取DNA的浓度低,电泳条带亮度低;高盐低pH值法提取的DNA的电泳条带模糊且降解拖尾现象严重。DNA模板浓度为20 ng、Taq Master Mix用量为10μL、引物浓度为0.6μmol/L、ddH2O为7.8μL时扩增程序的条带最清晰、多态性最好。筛选出17条重复性强、条带清晰明亮、多态性高的ISSR引物及其最适退火温度,其中扩增位点数最多的为引物UBC-834、UBC-836和UBC-853,扩增位点均为13个,以UBC-878为ISSR引物时的扩增反应中,当退火温度在46.9℃的时候能够扩增出较多明亮且清晰的条带。枫香叶片DNA最适提取方法为改良CTAB法;ISSR-PCR扩增程序的最优反应体系为20μL:模板DNA浓度为20 ng、Taq Master Mix用量为10μL、引物浓度为0.6μmol/L、ddH2O 7.8μL;筛选出17条最适枫香的ISSR候选引物及其最适退火温度。该枫香ISSR-PCR优化体系和候选引物适用于分子标记为枫香遗传多样性与亲缘关系作分析。
- 黄敏黄旭萍李斌奇张毅智林龙陈发兴
- 关键词：枫香改良CTAB法DNA提取ISSR-PCR引物筛选
- 云南栘[木衣]ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选被引量：2
- 2023年
- 为建立适合云南栘[木衣]的ISSR-PCR反应体系,本研究通过L_(16)(4~5)正交设计对影响PCR扩增反应的5个因素(模板DNA,引物,Mg~(2+),d NTPs,Taq DNA聚合酶)进行优化;在建立反应体系的基础上,筛选出多态性高的引物并确定其退火温度。结果表明,在25μL反应体系中,最佳反应体系用量为模板DNA 20 ng、引物0.3μmol/L、Mg~(2+)1.5 mmol/L、d NTPs 0.15 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U。建立的反应体系扩增稳定,筛选出的11条引物多态性较好、条带清晰。本研究反应体系的建立可为云南栘[木衣]遗传多样性研究提供技术支持。
- 刘宇朱泽莉彭劲谕王大玮段安安
- 关键词：ISSR-PCR正交设计引物筛选
- 广西莪术ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选被引量：1
- 2023年
- [目的]建立和优化广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G·Lee et C·F.Liang)的ISSR-PCR反应体系。[方法]通过单因素及正交试验设计研究模板DNA含量、Mg^(2+)浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度对广西莪术ISSR-PCR反应的影响。[结果]25μL广西莪术的ISSR-PCR最佳反应体系为模板DNA用量30 ng,Mg^(2+)2.25 mol/L,dNTPs 2.5 mol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq DNA聚合酶用量1.25 U;利用该体系从100条ISSR引物中进行初筛和复筛,筛选出14条引物。[结论]优化建立的广西莪术ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于广西莪术遗传多样性分析及种质资源保护研究。
- 林敬祯甘梓静谭勇黄鼎吴霞黄晓东
- 关键词：广西莪术正交设计引物筛选种质资源
- 朝鲜淫羊藿ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选被引量：3
- 2023年
- 本研究采用L16(43)正交试验设计,优化了朝鲜淫羊藿ISSR-PCR反应体系中的模板DNA加入量、引物加入量、2×Taq Master Mix加入量3个参数,建立了最佳反应体系。采用优化后的反应体系,从100条ISSR引物中筛选出7条多态性引物,并对每条引物的退火温度逐个优化。试验结果表明朝鲜淫羊藿ISSR-PCR最佳反应体系为:3μL模板DNA(8.7 ng/μL),3.5μL引物(2.5μmol/L),12μL 2×Taq Master Mix,双蒸水补足至体积为20μL。PCR扩增步骤:在94℃条件下先预变性4 min,后变性1 min,于57℃退火,72℃延伸均进行40 s,共循环35次,然后于72℃下补齐5 min,产物保存在4℃冰箱。经验证表明该反应体系稳定,引物条带清晰且多态性良好,该研究为朝鲜淫羊藿的群体遗传学研究奠定了前期基础。
- 吴望蕊王英哲国坤容路生孟芳芳孙云龙肖井雷姜大成
- 关键词：朝鲜淫羊藿ISSR-PCR分子标记引物筛选
- 蒜头果ISSR-PCR反应体系及标记方法与应用
- 本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开一种蒜头果ISSR‑PCR反应体系及标记方法与应用，蒜头果ISSR‑PCR最佳反应体系为：每20μL反应体系中含有模板DNA 30 ng、引物0.3μmol/L、dNTPs 0.25...
- 张鹏远王娟童海珍黄久妍潘悦朱俊琳
