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Liproxstatin-1对K562白血病细胞的增殖抑制作用及其机制研究
2023年
目的:研究Liproxstatin-1(Lip-1)对K562白血病细胞株的抑制作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度Lip-1处理前后的细胞活力。将未经任何处理的K562细胞作为对照组,10μmol/L Lip-1处理24 h的K562细胞作为低浓度组,20μmol/L Lip-1处理24 h的K562细胞作为高浓度组。用二代测序法分析各组转录组表达差异。分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blotting法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(CDKN1A)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)基因及蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期时相,微量法测定细胞内谷氨酸含量。将K562细胞在含或不含谷氨酰胺培养基中培养,用细胞计数法检测细胞倍增时间(DT)变化。结果:Lip-1浓度依赖性抑制K562白血病细胞增殖。与对照组相比,低、高浓度组CDKN1A、SLC7A11基因及蛋白表达水平增高(P<0.05),高浓度组细胞内谷氨酸含量下降(P<0.05),低浓度组发生G1/S阻滞,而高浓度组同时存在G1/S和G2/M阻滞。K562细胞在不含谷氨酰胺培养基培养时细胞的DT较含谷氨酰胺组增高(P<0.05)。结论:Lip-1可抑制K562白血病细胞增殖,其机制可能与SLC7A11表达增高引起的谷氨酸剥夺及CDKN1A表达增高引起的细胞周期阻滞有关。
梁诗婧董海群许玉玲孙娜赵慧涵程鹏应燕萍
关键词:白血病谷氨酸细胞周期阻滞
低极性人参皂苷F4抑制SHI-1和K562白血病细胞增殖及诱导分化的研究被引量:1
2020年
目的:观察低极性人参皂苷F4(F4)抑制人单核系白血病细胞SHI-1和红系白血病细胞K562增殖及诱导分化的作用。方法:以不同浓度(0、40、80和120 mg/L)的F4处理SHI-1和K562细胞,MTT比色法和半固体集落形成实验检测F4对细胞增殖的抑制作用;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞趋向分化的形态;流式细胞术和免疫荧光法检测分化相关抗原CD11b和CD14阳性表达率及其荧光反应强度;免疫细胞化学和Western blot法分析SHI-1细胞分化相关转录因子PU.1和K562细胞红系分化相关GATA-1和γ-globin的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测PU.1和GATA-1的mRNA表达变化。结果:与对照(0 mg/L)组比较,F4能够抑制SHI-1和K562细胞增殖(P<0.01),诱导白血病细胞趋向分化,表现为细胞核/质比缩小,染色质粗糙,核仁减少,可见空泡,SHI-1细胞核有扭曲。SHI-1细胞CD11b和K562细胞CD14阳性表达率显著升高(P<0.01),且免疫荧光反应从弱阳性转变为强阳性;但SHI-1细胞CD14和K562细胞CD11b阳性表达率无显著变化。同时,F4上调PU.1和GATA-1的mRNA和蛋白表达水平及γ-globin的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:低极性人参皂苷F4具有抑制SHI-1和K562白血病细胞增殖及诱导分化的抗白血病作用,其作用可通过调控分化相关PU.1、GATA-1和γ-globin的表达来实现。
李弯高瑞兰余潇苓尹利明唐比强兰高琛兰金剑赵燕娜
关键词:SHI-1细胞K562细胞细胞增殖
UVRAG参与K562白血病细胞铁死亡过程
目的:  探讨抗紫外线辐射相关基因(UV radiation resistance-associated gene,UVRAG)是否参与K562白血病细胞铁死亡过程,为进一步研究铁死亡在白血病中的作用以及可能为白血病新的...
宁涛
关键词:白血病
文献传递
K562白血病细胞中Musashi2干扰慢毒载体的构建和鉴定
2019年
目的:构建干扰Musashi 2 (Msi2)的慢毒载体,并探究其在K562白血病细胞株中的干扰效率。方法:将两个Msi2干扰片段分别连接入GV418慢毒载体,与pHelper1. 0、pHelper2. 0辅助载体共转染入293T细胞进行慢毒包装。提取细胞上清感染白血病K562细胞,并用嘌呤霉素药物稳筛,获取稳定感染细胞株。定量PCR和western blot分别检测K562细胞内Msi2的干扰效率。结果:与对照组比较,干扰组shMsi2-1和shMsi2-2的Msi2 mRNA水平分别降为3%和28%(P <0. 05);与对照组相比,优选出的shMsi2-1组中Msi2蛋白水平也显著下降(P <0. 05)。结论:成功构建Msi2干扰慢毒载体并显著沉默白血病K562细胞中Msi2的表达,为后续研究Msi2在白血病中的功能和机制奠定实验基础。
张慧娟胡蓉江丽霞
关键词:白血病慢病毒载体
地西他滨抑制K562白血病细胞增殖和诱导分化的作用被引量:7
2017年
目的:观察地西他滨(DAC)抑制白血病K562细胞生长和诱导分化的作用。方法:不同浓度的DAC处理K562细胞。MTT法和半固体集落生成实验检测K562细胞增殖能力;瑞氏染色观察细胞形态;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率;Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)、细胞周期负调控因子P27、红系分化核转录因子GATA-1及粒系分化核转录因子PU.1蛋白的表达水平。结果:DAC能够减少K562细胞集落形成的数量,降低细胞活力,减少核质比,抑制K562细胞进入S期,并阻滞在G_2/M期,提高分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率,上调P27、GATA-1和PU.1蛋白表达,同时下调CDK2和cyclin E1蛋白表达。结论:DAC可能通过调控细胞周期抑制K562细胞增殖,同时诱导多向分化。
余潇苓赵燕娜郑智茵高瑞兰尹利明
关键词:地西他滨白血病细胞增殖分化细胞周期
酸性丝氨酸蛋白酶ASP_(NJ)对K562白血病细胞热休克蛋白基因表达的影响
2017年
目的 探讨酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ对人慢性髓系白血病细胞K562中热休克蛋白HSP90、60、27基因表达的影响,以揭示ASPNJ抗白血病细胞作用的相关机制。方法 体外培养K562白血病细胞株,ASPNJ单独及与化疗药物联合处理细胞,应用Western blot和RT-PCR检测膜蛋白和总蛋白水平及mRNA水平HSP90、60、27基因表达的变化。结果 ASPNJ对HSPs在总蛋白质水平和膜蛋白质水平的表达影响有所不同,ASPNJ对三种HSPs分别在总蛋白质水平或膜蛋白质水平产生某种修饰作用;ASPNJ对三种HSPsmRNA水平的表达影响并不明显,但联合用药组与单独ASPNJ组及单独多柔比星组相比,HSPsmRNA基因表达量呈现不同程度的降低趋势。结论 ASPNJ对K562白血病细胞的增殖抑制作用及其增加细胞对化疗药物的敏感性作用与ASPNJ对HSPs表达的影响和对HSPs蛋白质的修饰作用存在某种复杂的相关性。
贾博吴昕哲王鎏越张建一崔佳乐刘剑凯
关键词:白血病细胞多柔比星
多柔比星对K562白血病细胞内活性氧水平及羰基还原酶1表达的影响
目的:  检测多柔比星(Doxorubicin,DOX)作用下的K562白血病细胞株的凋亡情况,细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平及羰基还原酶1(Carbonyl reductas...
刘会青
关键词:儿童患者K562白血病多柔比星活性氧水平
磷酸腺苷活性激酶/环氧化酶-2在槲皮素抑制K562白血病细胞增殖中的作用被引量:1
2017年
目的观察对槲皮素人慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的影响。方法不同浓度槲皮素孵育K562细胞48小时后用CCK-8法检测细胞存活率;Western-blot法检测槲皮素孵育K562 p-AMPK(磷酸腺苷活性激酶)和Cox-2(环氧化酶-2)蛋白表达水平。结果槲皮素抑制K562细胞的增殖,呈时间和浓度依赖性。槲皮素孵育48h后K562细胞的IC50值是83.11μm;随着槲皮素浓度的增加,K562细胞Cox-2蛋白水平表达下降,而p-AMPK蛋白表达水平上升。结论槲皮素呈浓度依赖性抑制HL-60细胞的增殖,可能通过激活AMPK抑制Cox-2进而抑制K562细胞增殖。
牛国敏张复华杨国雷凌奕文潘焕玉于嗣俭徐嘉愉麦秀渠
关键词:槲皮素
氨基甾体H42649对K562白血病细胞的作用
2014年
目的探讨氨基甾体H42649对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的作用机制。方法通过荧光分光光度计检测H42649作用于K562细胞内游离钙离子浓度的变化;通过Real-time PCR检测H42649对K562细胞钙通道蛋白mRNA的表达的影响;通过Real-time PCR检测H42649对K562细胞bcr/abl融合基因mRNA表达的影响。结果氨基甾体H42649作用于K562细胞后,可导致细胞内游离钙含量下降;钙通道蛋白mRNA表达上调;细胞bcr/abl融合基因mRNA表达下调。结论氨基甾体H42649对K562细胞的作用与K562细胞膜钙通道、细胞内钙离子浓度及细胞bcr/abl融合基因存在一种相互关系。
张君周阳何群
关键词:K562细胞系钙通道BCR/ABL融合基因
携带人OCT4A基因的慢毒载体的构建及其稳定转染K562白血病细胞株的建立被引量:2
2014年
本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白(GFP)慢毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引物序列,通过RT-PCR技术扩增出OCT4A全长片段,克隆至p CR-Blunt载体。将OCT4A DNA片段酶切回收后克隆至经EcoR1酶切线性化的慢毒载体p LVX-IRES-ZsGreen1,构建p LVX-OCT4A-Zs Green1慢毒重组质粒,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢毒颗粒并感染人白血病细胞K562,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用Real-time PCR和Western blot方法分别检测稳定转染细胞系的OCT4A mRNA和OCT4A蛋白表达。应用CCK-8法和平板细胞克隆形成试验测定OCT4A对K562细胞增殖能力的影响。结果表明,经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带OCT4A基因的重组慢毒;包装毒颗粒超速离心后毒滴度达(1.43±0.25)×108U/ml;毒感染K562细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞,实时定量PCR及Western blot证实毒感染后OCT4A基因及蛋白的表达可有效上调;CCK-8法及平板集落形成试验显示毒感染的K562细胞体外增殖活性明显升高,与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。结论:成功构建了表达OCT4A基因的慢毒载体,并且获得可稳定上调OCT4A表达的K562细胞株。
孟凡静曹江周俊吴庆运陈翀徐开林
关键词:慢病毒载体K562细胞

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岑建农
作品数:378被引量:825H指数:12
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研究主题:白血病 骨髓增生异常综合征 造血干细胞移植 急性髓系白血病 白血病患者
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