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含LTB 基因 的狂犬病病毒口服疫苗株的构建与小鼠免疫研究 狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)引起的具有高度神经嗜性的烈性人兽共患传染病,致死率达 100%,已成为一个重大的公共卫生问题。该病目前无特效疗法,而通过暴露前预防(PrEP)或及... 曾小玲关键词:LTB基因 狂犬病病毒 免疫原性 文献传递 空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因 融合基因 的构建、表达及鉴定 2015年 目的采用重叠PCR方法将大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位ltB基因 和空肠弯曲菌外膜蛋白peb1A基因 进行连接,构建ltB-peb1A融合基因 原核表达系统,对其进行诱导表达与鉴定。方法利用PCR技术扩增ltB与peb1A基因 ,用重叠PCR法将ltB与peb1A基因 进行融合,然后插入pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A。用重组体转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白LTB -PEB1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,ELISA法鉴定其与牛Gm1活性,Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果 PCR及测序证实ltB-peb1A融合基因 原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A构建成功,SDS-PAGE分析目的蛋白最高表达量占全菌总蛋白的28%左右,其分子质量单位为40.7ku。ELISA法鉴定纯化的重组蛋白与牛Gm1有结合活性,Western blot分析重组蛋白能被兔抗空肠弯曲菌识别。结论成功构建了ltB-peb1A融合基因 原核表达载体,并获得高效表达的目的蛋白,为空肠弯曲菌黏膜免疫疫苗的研制奠定了基础。 杜联峰 夏墙 余妍 杨瑞 宋明英 孙万邦关键词:LTB基因 黏膜佐剂 基因融合 猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB 基因 的克隆及原核表达 被引量:3 2011年 从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据GenBank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB )基因 序列,设计了1对引物,采用PCR技术扩增LTB 的编码基因 ,得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体中,经酶切、PCR及序列测定法进行鉴定。测序正确后,将该基因 插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,将此重组质粒转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中,并用IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot进行分析。结果显示,LTB 基因 可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为14ku,与预计的蛋白分子质量大小一致。Western-blot分析表明,该蛋白可以与大肠杆菌免疫血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为大肠杆菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。 刘媛 左玉柱 范京惠关键词:不耐热肠毒素 LTB基因 原核表达 猪传染性胃肠炎病毒S蛋白A、D基因 与猪大肠杆菌LTB 基因 的重组、克隆及原核表达 猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of swine,TGE)是由冠状病毒科冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus ... 刘媛关键词:TGEV ETEC LTB基因 原核表达 文献传递 猪传染性胃肠炎病毒S蛋白A、D基因 与猪大肠肝菌LTB 基因 的重组、克隆及原核表达 猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of swine,TGE)是由冠状病毒科冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus ... 刘媛关键词:LTB基因 猪传染性胃肠炎 原核表达 文献传递 轮状病毒VP7基因 与LTB 基因 融合表达及其免疫原性 2010年 根据GenBank已发表的牛轮状病毒VP7基因 核苷酸序列(DQ195152),成功克隆了牛轮状病毒野毒株CHLY VP7基因 的3个主要抗原簇并在大肠杆菌中进行了高效表达,然后与LTB (大肠杆菌不耐热性肠毒素)基因 融合后再一次成功表达,表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,得到了高纯度的目的蛋白。动物试验表明,该抗原蛋白可在小鼠体内诱导产生一定水平的抗体。 王延东 杨少华 高运东 王洪梅 郭学军 刘晓 杨宏军 胡国良 仲跻峰 何洪彬关键词:牛轮状病毒 VP7 牛轮状病毒VP4基因 与LTB 基因 的融合表达及免疫原性研究 被引量:1 2010年 PCR扩增轮状病毒VP4基因 和大肠杆菌LTB 基因 编码区,将其克隆至pET32a载体上,构建pET32a-VP4-LTB 质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR、酶切鉴定后进一步测序,测序结果表明融合基因 片段由2637 bp组成,为编码879个氨基酸残基的多肽。经IPTG诱导和SDS-PAGE检测发现表达产物分子量约为118.9 KD,以包涵体的形式存在。融合蛋白经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫小鼠,结果所产生的抗体效价高于单独VP4蛋白的免疫结果但差异不显著(P>0.5),但与对照组相比差异显著。表明所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,为研制牛轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。 南晓伟 杨少华 高运东 王长法 杨宏军 刘晓 何洪彬 申之义 仲跻峰关键词:牛轮状病毒 融合基因 免疫原性 猪肺炎支原体p97 R1区基因 和大肠杆菌LTB 基因 的重组和表达 被引量:7 2010年 本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因 和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB )基因 重组表达,并且单独表达了R1区基因 。将扩增的目的片段插入到表达载体pET-28a(+)中,分别构建了两个原核表达质粒pET28a(+)-rLTB R1和pET28a(+)-rR1,诱导表达了两个融合蛋白rLTB R1和rR1。对表达的目的蛋白进行了SDS-PAGE和Western blot检测,结果表明,表达的蛋白为特异的蛋白。本试验为进一步的研究rLTB R1融合蛋白在黏膜免疫方面的作用打下了基础。 卢会英 沈青春 宁宜宝关键词:猪肺炎支原体 猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB 基因 的克隆及原核表达 从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据Genbank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB )基因 序列,设计一对引物,采用PCR技术扩增LTB 的编码基因 ,得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体上,经酶... 刘媛 左玉柱 范京惠关键词:不耐热肠毒素 LTB基因 原核表达 文献传递 猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB 基因 的克隆及原核表达 从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据Genbank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB )基因 序列,设计一对引物,采用PCR技术扩增LTB 的编码基因 ,得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体上,经酶... 刘媛 左玉柱 范京惠关键词:不耐热肠毒素 LTB基因 原核表达 文献传递
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许崇波 作品数:198 被引量:659 H指数:15 供职机构:韶关学院 研究主题:大肠杆菌 Α毒素 产气荚膜梭菌 基因表达 基因克隆 严杰 作品数:357 被引量:1,072 H指数:14 供职机构:杭州医学院 研究主题:问号钩端螺旋体 钩端螺旋体 幽门螺杆菌 原核表达系统 外膜蛋白 刘媛 作品数:116 被引量:306 H指数:9 供职机构:河北北方学院农林科技学院 研究主题:原核表达 钠离子电池 马铃薯 LTB基因 克隆及原核表达 毛亚飞 作品数:62 被引量:191 H指数:9 供职机构:浙江省舟山市妇幼保健院 研究主题:问号钩端螺旋体 原核表达系统 幽门螺杆菌 钩端螺旋体 J774A.1细胞 卫广森 作品数:118 被引量:258 H指数:9 供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所 研究主题:LT 融合蛋白 大肠杆菌 融合基因 新生仔猪