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LTB基因的狂犬病病毒口服疫苗株的构建与小鼠免疫研究
狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)引起的具有高度神经嗜性的烈性人兽共患传染病,致死率达 100%,已成为一个重大的公共卫生问题。该病目前无特效疗法,而通过暴露前预防(PrEP)或及...
曾小玲
关键词:LTB基因狂犬病病毒免疫原性
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空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因融合基因的构建、表达及鉴定
2015年
目的采用重叠PCR方法将大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位ltB基因和空肠弯曲菌外膜蛋白peb1A基因进行连接,构建ltB-peb1A融合基因原核表达系统,对其进行诱导表达与鉴定。方法利用PCR技术扩增ltB与peb1A基因,用重叠PCR法将ltB与peb1A基因进行融合,然后插入pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A。用重组体转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白LTB-PEB1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,ELISA法鉴定其与牛Gm1活性,Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果 PCR及测序证实ltB-peb1A融合基因原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A构建成功,SDS-PAGE分析目的蛋白最高表达量占全菌总蛋白的28%左右,其分子质量单位为40.7ku。ELISA法鉴定纯化的重组蛋白与牛Gm1有结合活性,Western blot分析重组蛋白能被兔抗空肠弯曲菌识别。结论成功构建了ltB-peb1A融合基因原核表达载体,并获得高效表达的目的蛋白,为空肠弯曲菌黏膜免疫疫苗的研制奠定了基础。
杜联峰夏墙余妍杨瑞宋明英孙万邦
关键词:LTB基因黏膜佐剂基因融合
猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因的克隆及原核表达被引量:3
2011年
从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据GenBank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)基因序列,设计了1对引物,采用PCR技术扩增LTB的编码基因,得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体中,经酶切、PCR及序列测定法进行鉴定。测序正确后,将该基因插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,将此重组质粒转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中,并用IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot进行分析。结果显示,LTB基因可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为14ku,与预计的蛋白分子质量大小一致。Western-blot分析表明,该蛋白可以与大肠杆菌免疫血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为大肠杆菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。
刘媛左玉柱范京惠
关键词:不耐热肠毒素LTB基因原核表达
猪传染性胃肠炎病毒S蛋白A、D基因与猪大肠杆菌LTB基因的重组、克隆及原核表达
猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of swine,TGE)是由冠状病毒科冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus ...
刘媛
关键词:TGEVETECLTB基因原核表达
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猪传染性胃肠炎病毒S蛋白A、D基因与猪大肠肝菌LTB基因的重组、克隆及原核表达
猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of swine,TGE)是由冠状病毒科冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus ...
刘媛
关键词:LTB基因猪传染性胃肠炎原核表达
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轮状病毒VP7基因LTB基因融合表达及其免疫原性
2010年
根据GenBank已发表的牛轮状病毒VP7基因核苷酸序列(DQ195152),成功克隆了牛轮状病毒野毒株CHLY VP7基因的3个主要抗原簇并在大肠杆菌中进行了高效表达,然后与LTB(大肠杆菌不耐热性肠毒素)基因融合后再一次成功表达,表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,得到了高纯度的目的蛋白。动物试验表明,该抗原蛋白可在小鼠体内诱导产生一定水平的抗体。
王延东杨少华高运东王洪梅郭学军刘晓杨宏军胡国良仲跻峰何洪彬
关键词:牛轮状病毒VP7
牛轮状病毒VP4基因LTB基因的融合表达及免疫原性研究被引量:1
2010年
PCR扩增轮状病毒VP4基因和大肠杆菌LTB基因编码区,将其克隆至pET32a载体上,构建pET32a-VP4-LTB质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR、酶切鉴定后进一步测序,测序结果表明融合基因片段由2637 bp组成,为编码879个氨基酸残基的多肽。经IPTG诱导和SDS-PAGE检测发现表达产物分子量约为118.9 KD,以包涵体的形式存在。融合蛋白经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫小鼠,结果所产生的抗体效价高于单独VP4蛋白的免疫结果但差异不显著(P>0.5),但与对照组相比差异显著。表明所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,为研制牛轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。
南晓伟杨少华高运东王长法杨宏军刘晓何洪彬申之义仲跻峰
关键词:牛轮状病毒融合基因免疫原性
猪肺炎支原体p97 R1区基因和大肠杆菌LTB基因的重组和表达被引量:7
2010年
本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB)基因重组表达,并且单独表达了R1区基因。将扩增的目的片段插入到表达载体pET-28a(+)中,分别构建了两个原核表达质粒pET28a(+)-rLTBR1和pET28a(+)-rR1,诱导表达了两个融合蛋白rLTBR1和rR1。对表达的目的蛋白进行了SDS-PAGE和Western blot检测,结果表明,表达的蛋白为特异的蛋白。本试验为进一步的研究rLTBR1融合蛋白在黏膜免疫方面的作用打下了基础。
卢会英沈青春宁宜宝
关键词:猪肺炎支原体
猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因的克隆及原核表达
从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据Genbank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)基因序列,设计一对引物,采用PCR技术扩增LTB的编码基因,得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体上,经酶...
刘媛左玉柱范京惠
关键词:不耐热肠毒素LTB基因原核表达
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猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因的克隆及原核表达
从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据Genbank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)基因序列,设计一对引物,采用PCR技术扩增LTB的编码基因,得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体上,经酶...
刘媛左玉柱范京惠
关键词:不耐热肠毒素LTB基因原核表达
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许崇波
作品数:198被引量:659H指数:15
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研究主题:大肠杆菌 Α毒素 产气荚膜梭菌 基因表达 基因克隆
严杰
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刘媛
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研究主题:原核表达 钠离子电池 马铃薯 LTB基因 克隆及原核表达
毛亚飞
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研究主题:问号钩端螺旋体 原核表达系统 幽门螺杆菌 钩端螺旋体 J774A.1细胞
卫广森
作品数:118被引量:258H指数:9
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研究主题:LT 融合蛋白 大肠杆菌 融合基因 新生仔猪