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呼吸道合胞病毒NS1蛋白鼠单克隆抗体的制备被引量：1: 2024年; 本研究旨在制备抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,{1}1)单克隆抗体,以分析在转染和感染过程中{1}1蛋白的表达和分布情况,并评估其在免疫沉淀反应中的应用价值。将{1}1基因片段构建至原核表达质粒,经大肠杆菌表达、亲和层析纯化后得到{1}1蛋白,将纯化的蛋白免疫小鼠后,通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)技术筛选能稳定分泌{1}1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并将该单抗用于间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)与免疫印迹(Western blotting)检测,分析RSV {1}1在过表达细胞和病毒感染细胞中的表达与分布情况,评估该单抗在免疫沉淀反应中的应用价值。结果发现,RSV {1}1蛋白在大肠杆菌中成功表达及纯化,免疫小鼠后,获得了一株特异性强、反应性好的RSV {1}1单抗,其亚型为IgG1,且抗体效价可达1:15360000;使用该单抗鉴定出RSV {1}1蛋白在转染和感染细胞中正常表达,IFA结果表明,{1}1主要分布在细胞质与细胞核;并验证该单抗在免疫沉淀反应中作为捕获抗体能够特异性结合细胞中表达的{1}1蛋白。本研究经原核表达系统成功获得RSV {1}1蛋白,成功制备出抗RSV {1}1单抗,该抗体能特异性识别{1}1蛋白,可被应用于免疫沉淀方法,为{1}1蛋白的功能研究奠定了基础。; 陈娇王亚娟陈志华茹毅郑海学裴晶晶; 关键词：呼吸道合胞病毒 NS1蛋白原核表达单克隆抗体免疫沉淀

非洲马瘟病毒NS1蛋白在昆虫细胞中的表达及抗原性分析: 2024年; 非洲马瘟(African horse sickness,AHS)是一种由媒介昆虫传播感染马属动物的病毒性疾病,为了在杆状病毒表达系统中表达AHSVNS1蛋白并评估其作为亚单位疫苗组分的抗原性,本研究参考GenBank上公布的AHSV基因序列,人工合成NS1全长基因序列,利用PCR方法扩增完整的开放阅读框后将其克隆到转座载体pFastBacTMHTb上,将成功构建的重组质粒pFastBac-AHSVNS1转化到DH10Bac感受态细胞中,获得了含有AHSVNS1基因的重组杆粒Bacmid-AHSVNS1,将其转染到Sf9昆虫细胞内获得了表达AHSVNS1蛋白的重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组AHSV NS1蛋白大小为65 ku,且获得了纯化的重组AHSV NS1蛋白。将其免疫BALB/c小鼠,细胞免疫荧光和Western-blot试验显示获得了特异性的抗AHSV NS1蛋白多克隆抗体,其效价达1∶51 200。流式细胞分析显示,AHSV NS1蛋白免疫小鼠能够刺激CD4+和CD8+T淋巴细胞的增加。上述研究结果表明,AHSV NS1蛋白作为AHSV亚单位疫苗的组成成分具有一定应用前景。本试验实现了AHSV NS1蛋白在昆虫细胞中成功表达并验证其具有良好的抗原性,这为进一步研究AHSV NS1蛋白的生物学功能和亚单位疫苗开发奠定了基础。; 户鑫兵王轩莹宋昱庆田占成关贵全苟惠天罗建勋殷宏独军政; 关键词：非洲马瘟病毒抗原性

基于蛋白质芯片技术筛选与甲型流感病毒NS1蛋白互作的宿主因子及通路分析: 2024年; 目的筛选出与流感病毒Non-structural protein 1(NS1)蛋白结合的人类宿主蛋白并加以分析,确定这些结合蛋白富集的方向及关键蛋白,为抗流感病毒的新药研发提供思路。方法将NS1样本、Biotin样本分别与HuProt^(TM)人类蛋白质组芯片进行杂交孵育,以两重复均满足Z-Score≥3为筛选条件对与NS1蛋白有结合的宿主蛋白进行筛选得到特异性检出蛋白,实验组(NS1蛋白)与对照组(Biotin)比值I Mean_Ratio≥1.4为条件筛选出显著特异性检出蛋白。用检出的195个蛋白进行GO(Biological Process,Molecular Function,Cellular Component)和KEGG_PATHWAY分析,通过蛋白-蛋白相互作用(PPI)及MCODE分析得到关键蛋白。结果获得显著特异性检出蛋白195个,GO分析结果显示这些蛋白主要参与了mRNA加工、RNA结合、蛋白结合,KEGG分析主要富集到RNA降解、氨基酸的生物合成等通路。得到的4个关键蛋白DDX6、HSPD1、PKLR、MTHFD1中DDX6与RNA的合成、翻译等过程相关,而NS1蛋白可以通过调控流感病毒RNA和宿主RNA促进病毒的感染,推测DDX6可能在该过程发挥作用;其他3个蛋白目前虽然没有明确的研究指明其与流感病毒有关系,但是能在其他RNA病毒的感染过程中发挥作用。结论与NS1结合的人类蛋白主要富集到RNA合成、加工、转录等过程中,MCODE分析得到的关键蛋白有潜力成为抗流感病毒新的靶点,但作用机制需要后续实验进行进一步验证。; 张宇张薇高双荣陈梦苹王雅欣徐英莉曹姗赵荣华包蕾李舒冉孙静鲍岩岩耿子涵郭姗姗冀祖恩崔晓兰; 关键词：甲型流感病毒 NS1蛋白蛋白质芯片通路

寨卡病毒E蛋白和NS1蛋白关键氨基酸突变可促进病毒在小鼠睾丸中的复制: 2024年; 寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种蚊媒黄病毒,也可通过性传播,同时还能感染睾丸组织并导致损伤.探究寨卡病毒在睾丸内持续复制过程中病毒基因的变化规律,发现潜在的睾丸适应性突变位点,可为寨卡病毒变异的风险评估提供重要参考.为此,本研究以寨卡病毒株FSS13025为研究对象,通过将其在A129小鼠睾丸中连续传代10轮后获得适应性传代毒株,将原始株(WT)、第5代(P5)和第10代(P10)病毒经腹腔接种A129小鼠后发现,睾丸中P5和P10的RNA载量较WT分别提高4.6和3.8倍;进一步通过深度测序分析P5和P10的基因组变异情况,结果显示二者的包膜蛋白(envelope,E)和非结构蛋白1(nonstructural protein 1,{1}1)分别出现H401Y和K146E突变.在此基础上,以寨卡病毒FSS13025株为基因骨架,利用反向遗传学技术构建拯救携带上述突变的重组病毒H401Y+K146E,并评价其在细胞和小鼠体内的复制能力,结果显示病毒感染睾丸细胞15P-1和TM3后第48 h,细胞培养上清中的重组病毒RNA含量分别是WT的5.2和2.1倍;经腹腔途径感染A129小鼠后的第3和6天,睾丸中重组病毒RNA载量较WT分别提高97.5和58.4倍.上述结果表明,H401Y+K146E联合突变显著增强了寨卡病毒在睾丸细胞中的复制能力,同时明显提升了其对睾丸的嗜性和侵袭力,上述位点可作为寨卡病毒变异风险预警的监测靶点.; 李凯闫秀丽贺梦娇娄雅楠黄星耀孙梦许李晓峰; 关键词：睾丸包膜蛋白

2群坦布苏病毒NS1蛋白抑制鸭Ⅰ型干扰素产生的机制研究: 2024年; 【目的】坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)病是重要的水禽传染病,研究发现TMUV感染鸭早期,2群TMUV在肝、肾、脑等组织中的病毒拷贝数显著高于3群TMUV。研究2群TMUV非结构蛋白(Non-structural protein,NS protein)和3群TMUV NS蛋白对鸭天然免疫反应是否存在差异。【方法】以2群TMUV-JM株和3群TMUV-GX株为研究对象,构建两种毒株NS蛋白真核表达质粒,通过双荧光素酶报告系统研究NS蛋白对视黄酸诱导基因蛋白I(Retinoic acid-inducible gene protein I,RIG-I)诱导的β干扰素(βinterferon,IFN-β,为I型)启动子活性的影响。构建重组嵌合NS1蛋白真核表达质粒,通过激光共聚焦、免疫共沉淀、Western Blotting技术研究NS1与RIG-I信号通路中关键分子的互作区域。利用反向遗传操作系统构建NS1重组嵌合病毒,研究NS1在TMUV感染DEF细胞后对IFN-β产生的抑制作用。【结果】TMUV-JM株NS1能抑制RIG-I诱导的IFN-β启动子活性,而TMUV-GX株NS1对其无抑制作用。进一步研究发现,TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)为TMUV-JM NS1蛋白抑制RIG-I介导的I型IFN表达的作用节点分子,且NS1蛋白255~352 aa为发挥抑制作用的功能区域。TMUV-JM NS1与TBK1不存在直接相互作用,是间接降低TBK1磷酸化水平从而降低I型IFN的表达量。【结论】2群TMUV NS1具有抑制RIG-I信号通路的活性,并鉴定出其抑制功能的关键活性区域及作用的通路节点分子,明确2群TMUV NS1通过间接抑制TBK1磷酸化而影响鸭I型IFN产生。; 黄允真张俊勤李林林董嘉文向勇廖明孙敏华; 关键词：非结构蛋白 I型干扰素

乙型脑炎病毒部分NS1基因假病毒的构建: 2024年; 目的构建耐核酸酶的含乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)部分非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)基因的假病毒,为JEV的实验室核酸检测提供质控品,提高检测质量。方法将JEV部分NS1基因、蚊18S RNA基因和人GAPDH基因片段次序连接克隆到该质粒上,构建重组载体pET-MS2-JEV;转化大肠杆菌后表达纯化假病毒,并对其进行耐受性和稳定性评估。结果构建了重组载体pET-MS2-JEV,表达获得的假病毒具有耐核酸酶、耐物理化学因子的特性,可在4℃和-20℃条件下稳定保存。结论本研究获得了稳定性好的含JEV部分NS1基因的假病毒,可作为JEV实验室核酸检测的质控品。; 龙彩韵王瑞晨姚晓慧武婕慧付士红李樊殷启凯崔倩倩许松涛聂凯王环宇; 关键词：乙型脑炎病毒 MS2噬菌体假病毒

一株用绿色荧光蛋白标记NS1蛋白的重组蓝舌病毒: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一株用绿色荧光蛋白标记NS1蛋白的重组蓝舌病毒。本发明通过在野生型蓝舌病毒非结构蛋白NS1的156位和157位氨基酸之间插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluores...; 独军政宋昱庆刘学春田占成关贵全罗建勋殷宏

一种登革病毒NS1基因片段裸眼检测平台及制备方法: 本发明涉及一种登革病毒NS1基因片段裸眼检测平台及制备方法，所述裸眼检测平台包括杂交液与AuNRs溶液；所述杂交液是通过采用DNA探针H1和H2对DENV‑NS1序列进行杂交链式反应得到杂交反应液；向杂交反应液加入捕获探...; 邬强王媛媛陈倩赵宣姜成龙乔斌

一种登革热NS1抗原及IgG/IgM抗体联合检测试条及其应用: 本发明公开了一种登革热NS1抗原及IgG/IgM抗体联合检测试条及其应用，包括登革热NS1抗原检测试条和登革热IgG/IgM抗体检测试条。本发明灵敏度高，特异性好，跑样均一，层析背景清晰，样本用量少，检测快速，可一步检测...; 王琴秋秦荣林奕婷彭燕金

一种抗DENV NS1蛋白的单克隆抗体8C3及其应用: 本发明提供一种抗DENVNS1蛋白单克隆抗体8C3及其应用，所述抗DENVNS1蛋白单克隆抗体8C3的重链的CDR氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，轻链的CDR氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。本发明还提供上...; 余健海赵卫王琳清黎卓韵张宝沈晨光吴清华肖维威

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