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黄艳
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- 所属机构:中山大学
- 所在地区:广东省 广州市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
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- 2011年
- 目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。
- 邓传欢余新炳王乐旬黄灿黄艳李文芳李然徐劲
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- 重组GCRV-VP6枯草杆菌芽孢口服免疫对草鱼肝肠功能影响被引量：2
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- 目的检测重组表达草鱼呼肠孤病毒(GCRV)结构蛋白VP6(GCRV-VP6)的枯草杆菌芽孢(Bacillus subtilis)口服免疫对草鱼肝肠功能影响,以初步评价其作为草鱼出血病候选疫苗的安全性。方法将前期研究获得的衣壳表达GCRV-VP6的重组枯草杆菌(B.s-CotC-GCRV-VP6)诱导形成芽孢连续口服免疫草鱼6周,在第8周搜集样品,HE染色检测B.s-CotC-GCRV-VP6芽孢口服免疫对肠道组织的病理改变及肠绒毛的影响;扫描电镜观察其对草鱼后肠表面微绒毛及黏膜表面分泌的影响;qRT-PCR检测其对肠道组织紧密连接蛋白(Claudin b、Claudin 3、Claudin 12、Claudin C、ZO-1、Occludin)转录水平的影响;HE染色检测草鱼肝组织病理改变,微板法检测血清转氨酶(AST/GOT,ALT/GPT)活性。结果HE染色结果显示口服免疫B.s-CotC-GCRV-VP6芽孢后草鱼肠道无坏死,无炎症细胞浸润等病理改变,可促进肠绒毛的生长(与对照组比较P<0.05);电镜扫描也显示口服重组芽孢可促进肠道黏膜表面微绒毛的生长和分泌孔的增加;q RT-PCR结果显示6种紧密连接蛋白在B.s-CotC-GCRV-VP6组草鱼肠道组织中转录增加,且差异有统计学意义(P<0.05);HE染色显示,重组芽孢免疫组后草鱼肝组织未见病理性改变;实验组血清转氨酶活性相对降低。结论重组B.s-CotC-GCRV-VP6芽孢口服免疫草鱼后,其肝肠不产生明显的病理性改变,对肝功能未见明显影响,并可促进其肠道绒毛和微绒毛生长及紧密连接蛋白的表达,可能有利于其肠道的消化吸收和黏膜屏障功能的提高,提示该重组芽孢作为预防草鱼出血病候选口服疫苗对肝肠无副作用。
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- 华支睾吸虫溶血磷脂酶对肝星状细胞体外作用的研究被引量：4
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- 侯珠秀黄艳黄艳
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- 余新炳周心怡姜红烨唐泽丽孙恒昌黄艳陈庭金林志鹏任鹏丽
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- 唐泽丽唐泽丽余新炳黄艳
- 关键词：华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶口服疫苗
