-
周建光
-
-
- 所属机构:军事医学科学院生物工程研究所
- 所在地区:北京市
- 研究方向:生物学
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 李山虎
- 作品数：47被引量：60H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题：前列腺癌 疫苗株 布鲁氏菌 减毒疫苗 毒力基因
- 王健
- 作品数：84被引量：232H指数：8
- 供职机构：中国人民解放军
- 研究主题：前列腺癌 PC-1基因 胃癌 锁孔入路 鞍区肿瘤
- 黄翠芬
- 作品数：337被引量：973H指数：14
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题：大肠杆菌 T-PA 基因表达 相互作用 克隆
- 施庆国
- 作品数：21被引量：9H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所
- 研究主题：前列腺癌 前列腺癌细胞 LNCAP PC-1基因 分泌蛋白
- 钱晓龙
- 作品数：27被引量：67H指数：5
- 供职机构：天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室
- 研究主题：前列腺癌 乳腺癌 乳腺浸润性微乳头状癌 前列腺癌细胞 分泌蛋白
- PC-1解除S6K对AKT信号通路的负反馈抑制
- 2014年
- 目的:通过建立过表达PC-1的前列腺癌LNCaP细胞系及敲低PC-1表达的C4-2细胞系,探究PC-1激活AKT信号通路的分子机制。方法:将PC-1基因及针对PC-1的siRNA序列,分别克隆至慢病毒表达载体pCDH-EF1-Myc-MCS-T2A-Puro及干扰载体pSIH1-H1-Puro,包装成慢病毒后分别感染前列腺癌LNCaP及C4-2细胞,通过Western印迹鉴定PC-1过表达及敲低效果,并检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白S6K、AKT的磷酸化水平。结果:PC-1过表达时,S6K磷酸化水平下降,而AKT的磷酸化水平上升。结论:PC-1可以通过抑制S6K激酶活性,解除其对AKT的负反馈抑制作用,从而激活AKT激酶的活性。
- 张晓清王健王洪涛李山虎王芃黄芳洪鎏邓楚中周建光
- 关键词：前列腺癌AKT信号通路
- 一种重组质粒及应用其制备的重组溶瘤腺病毒
- 本发明公开了一种重组质粒及应用其制备的重组溶瘤腺病毒。本发明中，将DNA片段甲(自上游至下游包括两个元件：U6启动子元件、1504-siRNA编码元件)和DNA片段乙(TERTp启动子元件、E1A基因元件、E1B55K-...
- 周建光赵亚丽
- 文献传递
- EphA3受体截短突变体variant b在前列腺癌细胞中的分泌表达
- 2010年
- 目的:验证EphA3受体截短突变体variant b是否是一种分泌蛋白,并探索其内源分泌的特点,在细胞水平看其是否有作为前列腺癌血清标志物的潜质。方法:构建EphA3 variant b真核表达载体,应用标签抗体、特异性抗体和Western印迹检测前列腺癌细胞培养液中EphA3 variant b的表达,用RT-PCR方法分析EphA3 variant b在8种细胞系中的表达谱和对雄激素刺激的应答。结果:验证了EphA3 variant b是一种分泌蛋白,在雄激素受体阳性的前列腺癌细胞系中特异性表达,雄激素以剂量依赖方式诱导EphA3 variant b表达。结论:EphA3 variant b是一种分泌蛋白,其表达与雄激素受体信号通路相关,有作为前列腺癌血清标志物的潜质。
- 钱晓龙庞博施庆国武瑞琴俞岚李山虎周建光
- 关键词：前列腺癌血清标志物分泌蛋白
- 前列腺特异启动子和部分靶基因在转基因模型中的应用进展
- 2006年
- 遗传工程小鼠模型已被大量用于前列腺癌发生、发展、恶化和转移的研究。构建小鼠模型的途径主要包括转基因的过表达、基因敲除或敲入,以及使用Cre/lox技术进行条件调控。本文综述了目前构建的有明显遗传表型的转基因小鼠模型所用到的前列腺特异的启动子,以及所用到的靶基因。
- 梁瑞霞姜飞周建光黄翠芬
- 关键词：前列腺癌启动子靶基因
- 用Red介导的同源重组结合酶切改构质粒DNA
- 2005年
- 目的:用Red介导的单链寡核苷酸体内同源重组结合限制酶切方法对pBR322-Red质粒中的DNA序列进行精确的缺失突变。方法:用合成的单链寡核苷酸打靶分子电击转化W3110(pBR322Red)宿主菌,利用Red提供的同源重组功能敲除从kil基因至N基因长约2100bp的DNA序列,并用kilN序列中含有的单一酶切位点XhoⅠ对混合质粒进行酶切,取酶切产物转化W3110感受态细胞,菌落PCR方法筛选重组阳性克隆。结果:在没有任何筛选标记的情况下,用菌落PCR方法从10个菌落中成功挑选出1个重组阳性克隆。结论:该方法操作简单、精确,能够避免引入新突变,为DNA序列的缺失突变提供了一种新方法。
- 于梅李山虎陈伟周建光
- 关键词：同源重组缺失突变寡核苷酸类
- 真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B的改构与应用被引量：6
- 2010年
- 目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A、胆绿素还原酶B和过氧化氢酶基因的重组真核表达载体,瞬时转染293T细胞后,用His标签抗体验证其表达。结果:测序结果证实已将预想的序列替换至pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中相应位置,改构为质粒pcDNA3.1(-)reconstruct;利用改构的真核表达载体表达了相应的目的基因。结论:改构的真核表达载体pcDNA3.1(-)reconstruct可以简化融合myc和His标签的目的基因克隆的过程,并且增加了限制性位点的可选择性。
- 钱晓龙周建光
- 关键词：改构
- 4E-BP1、4E-BP1-4A重组慢病毒载体的构建及对胃癌细胞HGC27生长的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:构建4E-BP1及其T37A、T46A、S65A、T70A突变体4E-BP1-4A基因表达的重组慢病毒载体,研究其对胃癌HGC27细胞生长的影响。方法:PCR扩增4E-BP1基因及其突变体4E-BP1-4A基因并克隆到pCDH载体,构建成pCDH-4E-BP1、pCDH-4E-BP1-4A,将其与包装载体共转染293T细胞,包装成Lenti-4E-BP1及Lenti-4E-BP1-4A重组慢病毒载体,将此慢病毒感染胃癌HGC27细胞,Western印迹鉴定病毒载体介导的4E-BP1、4E-BP1-4A蛋白的表达,MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E-BP1、4E-BP1-4A对胃癌HGC27细胞生长的影响。结果:包装成Lenti-4E-BP1及Lenti-4E-BP1-4A重组慢病毒载体,并将此慢病毒载体感染胃癌HGC27细胞;MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E-BP1可抑制胃癌HGC27细胞的生长,过量表达4E-BP1-4A时抑制效果更明显。结论:构建了4E-BP1、4E-BP1-4A的重组慢病毒表达载体,在胃癌HGC27细胞中过量表达4E-BP1可抑制细胞生长,过量表达4E-BP1-4A的抑制效果更明显。
- 罗国兰王洪涛伍飞马李海量张晓清薛萌王健李山虎赵亚丽刘萱周建光
- 关键词：慢病毒载体胃癌细胞生长
- 布鲁氏菌104M疫苗株敲除Omp25基因的重组菌及应用
- 本发明公开了一种布鲁氏菌104M疫苗株敲除Omp25基因的重组菌及应用。本发明提供了重组菌，为降低和/或抑制布鲁氏菌104M中Omp25蛋白活性得到的菌。上述重组菌中，所述降低和/或抑制布鲁氏菌104M中Omp25蛋白活...
- 李山虎王秉翔周建光王莹
- 文献传递
- 重组酶Exo、Beta和Gam在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:构建exo、beta和gam基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达、制备重组酶Exo、Beta和Gam。方法:将exo、beta和gam基因分别构建在原核表达载体pEGKG和pET28a上,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中获得可溶性表达蛋白,用柱层析方法纯化蛋白。结果:构建了原核表达质粒pET28a-exo、pET28a-beta、pET28a-gam和pEGKG-exo、pEGKG-beta、pEGKG-gam;SDS-PAGE结果表明重组酶融合蛋白His-Exo、GST-Exo、His-Beta、GST-Beta、His-Gam、GST-Gam得到可溶性表达;用His标签抗体和GST标签抗体通过Western印迹方法检测到纯化后的融合蛋白。结论:在大肠杆菌中诱导表达了λ噬菌体重组酶,并纯化获得了一定量的纯度较好的蛋白,为下一步制备检测用多克隆抗体奠定了基础。
- 施庆国李山虎钱晓龙周建光
- 关键词：重组酶BETAGAM纯化
- Red体内同源重组介导的egfp、kan基因融合和重组质粒构建
- 2007年
- 重组工程是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术,可应用于靶DNA序列的敲入、敲除和基因克隆等。在应用重组工程技术进行基因亚克隆时发现,体外重叠PCR法难以获得高质量的目的DNA打靶片段,严重影响重组效率。为了解决上述问题,根据Red重组酶介导的体内同源重组工作原理进行了技术改进。先用PCR方法合成egfp和kan两条末端互补的线性DNA片段,然后将其电击共转化进入携带Red重组酶和pcDNA3.1载体DNA的大肠杆菌DY331菌株内,经体内同源重组直接产生的pcDNA3.1-egfp-kan环状重组质粒DNA分子可通过抗生素标记筛选获得,阳性率可达到45%,瞬时转染pcDNA3.1-egfp-kan可获得绿色荧光蛋白在293细胞中的表达。
- 吴洋李山虎施庆国刘党生周建光
