-
尚克刚
-
-
- 所属机构:北京大学生命科学学院细胞生物学系
- 所在地区:北京市
- 研究方向:生物学
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 孟国良
- 作品数：13被引量：178H指数：8
- 供职机构：北京大学生命科学学院
- 研究主题：ES细胞 ES细胞系 小鼠胚胎干细胞系 小鼠胚胎干细胞 小鼠ES细胞
- 汤富酬
- 作品数：50被引量：198H指数：8
- 供职机构：北京大学
- 研究主题：单细胞 高通量测序 转录组 胚胎干细胞 甲基化
- 薛友纺
- 作品数：15被引量：185H指数：8
- 供职机构：北京大学生命科学学院
- 研究主题：双链RNA 小鼠胚胎干细胞系 ES细胞系 胚胎干细胞 小鼠ES细胞
- 韩嵘
- 作品数：11被引量：102H指数：7
- 供职机构：北京大学生命科学学院
- 研究主题：小鼠 ES细胞 ES细胞系 小鼠ES细胞 种系
- 童英
- 作品数：147被引量：2,171H指数：32
- 供职机构：中国地质科学院地质研究所
- 研究主题：花岗岩 中亚造山带 锆石U-PB年龄 花岗岩体 地壳生长
- 转基因动物育种的EK细胞途径被引量：6
- 1989年
- 将外源基因导入动物体中的途径目前主要是使用向受精卵中注射DNA的方法,这是一种可重复的有用的方法,但其成功率很低,外源基因的整合、表达和稳定的筛选工作是在个体水平上进行的,这对许多大家畜来说是难以实现的工作。近年来,经过人们计多年的努力,综合了分子遗传学、发育遗传学和体细胞遗传学的当代成果,一种新的哺乳动物遗传工程的方法日益成熟,这就是转基因动物育种的EK细胞途径。
- 尚克刚
- 关键词：转基因动物育种
- 从早期胚胎多能干细胞生成的嵌合鼠被引量：26
- 1993年
- 本文利用囊胚注射法将小鼠胚胎多能干细胞——CCE细胞注射到发育3天半的昆明和C,_(57)BL/6J小鼠受体囊胚腔内,经假孕鼠借腹怀胎,获3只CCE细胞毛色嵌合鼠。实验共注射胚胎654个,经培养其恢复成活率73.8%,胚胎移植后,假母受孕率及产仔率分别为32.9%和53%。在所获3只嵌合鼠中,2只为CCE-昆明毛色嵌合鼠,1只为CCE-C_5,BL/6J毛色嵌合鼠,这是国内首次利用胚胎多能干细胞获得嵌合鼠。 为检测注入CCE细胞在嵌合鼠内部组织嵌合程度,经磷酸葡萄糖同分异构酶(GPI-1)分析,仅在1只雌性CCE-昆明毛色嵌合鼠心脏中检测到嵌入的CCE细胞。3只嵌合鼠做繁育实验证明均为可育,但在后代中未检测到CCE细胞特征,说明该嵌合鼠没有发生种系嵌合。
- 宋震涛李秋棠尚克刚吴鹤龄
- 关键词：胚胎干细胞胚胎移植嵌合鼠
- 具高效种系嵌合能力的C57BL/6J小鼠ES细胞系的建立被引量：12
- 1999年
- 采用小鼠原代成纤维细胞作为饲养层，在含1×103单位白血病抑制因子（LIF）的DMEM高糖培养基中，建成了11个C57BL／6J小鼠的ES细胞系，成系率为9．6％。所建的11个ES细胞系中有5个核型正常率大于70％。这些细胞具早期胚胎细胞的特征，呈碱性磷酸酶阳性，具表达0014基因的特性5进行体内分化实验时能发生广泛的分化。通过嵌合体制作实验证明其中3个系具嵌合能力，并从中筛选出具高效种系嵌合能力的MESPU35细胞系，MESPU35细胞的克隆能达到种系传递，经过基因操作的细胞克隆，也保留了高效的嵌合能力。因此，MESPU35细胞可作为制作突变小鼠的有效载体。
- 童英韩嵘郑玉兰苏平尚克刚
- 关键词：ES细胞系
- 小鼠ES细胞种系嵌合体的获得被引量：35
- 1999年
- 种系嵌合体的获得是实现ＥＳ细胞介导的转基因途径的决定步骤。ＥＳ细胞种系分化能力的保持是决定种系嵌合的前提条件，而嵌合体的制作及种系嵌合体的获得则是判定ＥＳ细胞系是否具有种系分化能力的唯一方法。为考察本室新近建立的３种小鼠ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ２１、ＭＥＳＰＵ２２和ＭＥＳＰＵ２９的种系分化能力，选用近交系Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ及远交系ＫＭＷ和ＩＣＲ为受体胚胎提供者，分别通过囊胚注射法和８细胞期桑椹胚注射法进行了嵌合体构建实验。共获得嵌合体８１只，经毛色分析确定在进行测交的４２只嵌合体中有１９只是种系传递者，为国内小鼠ＥＳ细胞种系嵌合体的首例报道。在所考察的３种ＥＳ细胞系中，ＭＥＳＰＵ２ｌ和ＭＥＳＰＵ２２均能以较高效率获得种系嵌合体，并且多数种系嵌合体（１４／１９）可高效传递ＥＳ细胞来源的毛色性状，确凿证明两细胞系均具有较强的种系分化能力，可作为优良的细胞载体介导小鼠基因组进行的基因改造。
- 陈伟胜韩嵘尚克刚
- 关键词：ES细胞小鼠
- 5个品系小鼠胚胎干细胞系建立的方法学比较(英文)被引量：17
- 2003年
- 以 70 %的大鼠心脏细胞条件培养基 (RH CM)为培养液 ,以小鼠胚胎成纤维细胞 (PMEF)为饲养层 ,采用添加 1%鸡血清的消化液和“连续离散法”作为小鼠ES细胞建系的改进方法 ,比较了 5个品系小鼠ES细胞系建立的特点。与常规方法相比 ,3个近交系小鼠 12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c的ES细胞建系率分别由 11 8%、3 7%和 2 9%提高到 33 3%、13 3%和 19 4 % ,差异十分显著 ;直接采用改进的方法建立KM和ICR小鼠ES细胞系 ,建系率分别达 12 %和 4 2 1%。讨论了ICM增殖的时间 ,即离散时机对ES集落形成及建系率的影响 ,结果显示 :12 9 ter、C5 7BL 6J、BALB c、KM和ICR小鼠品系ICM适宜的离散时机分别为增殖 4～ 6d、3～ 3 5d、4d、4～ 5d和 4～ 5d ;同时 ,讨论了不同ES细胞建系所需最适宜的消化液浓度 ,其中BALB c小鼠的ES细胞对高浓度的消化液十分敏感 ,0 0 5 %Trypsin 0 0 0 8%EDTA是其比较理想的离散浓度。设计了两种离散方法 ,即“一次离散法”和“连续离散法” ,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落 ,结果表明 :后者在建系过程中的作用明显优于前者。RH CM与添加LIF的常规ES细胞培养基相比 ,不但具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型的作用 ,而且明显促进ES细胞的贴壁生长。
- 孟国良汤富酬尚克刚薛友纺
- 关键词：小鼠品系ES细胞系条件培养基
- ES细胞（MESPU13）嵌合体小鼠的GPI分析被引量：16
- 1995年
- 为了评判小鼠ＥＳ细胞系ＭＥＳＰＵ１３的分化潜能，我们对１９只嵌合小鼠的心、肝、脾、肺、肾、胰腺、生殖腺、肌肉和血液的ＧＰＩ（磷酸葡萄糖异构酶）进行了分析。在这些样品中，来源于ＥＳ细胞的Ａ型条带的检出情况和小鼠的毛色嵌合率成正比关系。当毛色嵌合率低于４０％时，除了少数小鼠的肾脏外，没有看到Ａ型的条带。当毛色嵌合率大于８５％时，几乎所有的器官组织都检测到Ａ型条带，显示了ＥＳ细胞在发育形成内、中、外胚层的细胞方面具有很高的分化潜能。另外，在毛色嵌合率大于８５％的其中的６只嵌合鼠的肌肉中，只观察到Ａ型的条带，表明这些肌肉只单独来源于ＥＳ细胞。
- 吴白燕冼美薇尚克刚吴鹤龄
- 关键词：ES细胞异构酶
- 兔ES样细胞系的建立及其特性分析被引量：10
- 1997年
- 报道从２３７枚家兔胚胎中建成７个可连续传代的ＥＳ样细胞系。建系条件为，使用小鼠原始胚胎成纤维细胞（ＭＥ）作饲养层，以含１０％胎牛血清和１０％兔血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２为培养基，添加白血病抑制因子（ＬＩＦ）或上皮生长因子（ＥＧＦ），胚龄为９０，９６ｈ。该细胞系的细胞，在许多方面类似于小鼠ＥＳ细胞：具干细胞的形态特征，呈集落型生长，可连续传代并保持其形态特征，具一定的自发分化和诱导分化的能力，悬浮培养可形成简单类胚，但皮下接种同种乳兔未获肿瘤。用所建的兔ＥＳ样细胞进行卵母细胞核移植时。
- 童英刘爱民尚克刚刘林
- 关键词：家兔ES细胞细胞分化核移植
- 转基因动物的基因定位整合被引量：5
- 1991年
- 一导言对哺乳动物基因组进行人为的改造,从而得到人们所期望的具有目的性状的新的种系,这是哺乳动物遗传工程学界长期为之努力的目标。目前,转基因动物的构建工作已取得很大的进展,但是要得到进一步的发展,有待于在两个环节上的突破。 首先,是如何得到基因操作的稳定结果。因为无论采用哪种基因导入方式,人们都无法控制外源DNA在进入受体细胞以后的行为。
- 刘爱民尚克刚
- 关键词：转基因动物
- DNA指纹图在小鼠ES细胞嵌合体鉴定中的应用被引量：3
- 2000年
- 尝试应用多位点DNA指纹技术 ,检测经过胚胎干细胞 (ES细胞 )途径所获得的嵌合体小鼠中ES细胞在各种脏器中的嵌合情况、检测ES细胞在嵌合体小鼠中是否实现种系传递。结果表明 :采用新型的人工合成的寡核苷酸多聚体探针 (JL 0 2探针 )的多位点DNA指纹图谱 ,具有足够的多态性和很好的稳定性。适用于鉴定ES细胞在嵌合体小鼠各种组织器官中的嵌合情况 ,也适用于鉴定ES细胞是否具有种系嵌合能力 ,尤其适用于在嵌合体研究中 ,最适宜的品种组合具有相同的毛色或相同的酶型。
- 汤富酬薛友纺李美琴尚克刚
- 关键词：小鼠DNA指纹图胚胎干细胞嵌合体RFLP分析
- 大鼠心脏细胞条件培养基对小鼠ES细胞特性的维持被引量：21
- 2001年
- 以C1 9- 2和MESPU - 1 3为供试细胞 ,用克隆测试、传代培养等方法对 1 7种细胞的条件培养基进行了筛选 ,结果表明 ,大鼠心脏细胞的条件培养基 (RH -CM)具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型、促进ES细胞贴壁生长的作用。经RH -CM培养 1 0代和 2 0代的小鼠ES细胞在体内外分化能力上仍保留了原ES细胞的多方向分化潜能和特征 ;RH -CM也可作为小鼠ES细胞培养基的添加物 ,用含 70 %RH -CM的ES细胞培养基和小鼠胚胎原代成纤维细胞饲养层 (PMEF)培养ES细胞 ,可长期有效地维持其未分化状态和二倍体核型。RT
- 孟国良滕路邹冀中薛友纺尚克刚
- 关键词：ES细胞系LIF嵌合鼠RT-PCR未分化
