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李刚
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- 所属机构:河北北方学院
- 所在地区:河北省 张家口市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项
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- 狂犬病病毒M蛋白的原核表达
- 目的狂犬病病毒(Rabies virus,RV)属弹状病毒科狂犬病毒属,基因组从3’端至5’端依次排列5种结构蛋白,即核蛋白(N)、基质蛋白(M)、磷酸蛋白(P)、糖蛋白(G)和转录酶蛋白(L)。RV的M蛋白在病毒的装配...
- 宫苗苗李刚
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- 四株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离鉴定及基因型分析被引量:3
- 2013年
- 为掌握安徽省鸽Ⅰ型副黏病毒病的流行特点及其与鸡新城疫各分离株的相互关系,对从安徽省不同鸽场鸽病料中分离的4株病毒(AH-2012、AH-2012-1、AH-2012-2、AH-2012-3),采用RT-PCR、血清学试验及基因序列测定等方法进行鉴定。结果显示,这些分离株均具有血凝性,并能使NDV标准阳性血清特异性抑制;PCR扩增出F基因特异性目的片段,其核苷酸序列与GenBank上登录的鸽Ⅰ型副黏病毒的同源性较高,相似性达94.8%;与传统的鸡源新城疫病毒标准株LaSota、F48E9的同源性较低,相似性约为80%;F基因编码蛋白的第112~117位氨基酸序列为R-R-Q-K-R-F。结果表明,这些毒株为鸽Ⅰ型副黏病毒,属于基因Ⅵ型。
- 隋修锟李刚李铁吴迪程朝飞陶春爱黄华欣
- 关键词:F基因
- TaqMan荧光定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立及应用被引量:3
- 2012年
- 根据GenBank公布的鸡产蛋下降综合征病毒六邻体蛋白基因的高度保守序列,设计了2对特异性引物和1条TaqMan探针。以构建的阳性重组质粒为标准品,绘制标准曲线,建立了一种快速检测鸡产蛋下降综合征病毒的TaqMan荧光实时定量PCR方法。该方法最小检出量达10copies.μL-1,在1.0×102~1.0×108copies.μL-1检测范围间有良好的线性关系,特异性、稳定性和重复性也较好。用建立的本方法检测感染鸡产蛋下降综合征病毒鸡群的产蛋分离物,与普通PCR相比,该荧光实时定量PCR方法具有更高的敏感性,可更好地用于鸡产蛋下降综合征病毒的临床检测。
- 马震原李刚李文超郭宇飞
- 关键词:TAQMAN探针荧光实时定量PCR
- 检测鸡产蛋下降综合征病毒的方法及其试剂盒
- 本发明提供了一种检测鸡产蛋下降综合征病毒的方法及其试剂盒。通过对鸡产蛋下降综合征病毒基因测序和比对,提供了用于检测鸡产蛋下降综合征病毒的遗传标记物、实时荧光定量PCR引物和探针,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1,...
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- 利用同源重组的方法成功构建了一株表达新城疫病毒HN基因的重组禽腺病毒(rFAdV-HN).用rFAdV-HN重组病毒感染CH-SAH细胞,运用Northern blot分子杂交及RT-PCR方法在感染12h后可检出HN信...
- 李刚张锦秀朱鸿飞Berhane YohannesBeata Stachowiack
- 关键词:重组禽腺病毒新城疫病毒HN基因同源重组
- 文献传递
- 基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法的建立及其初步应用
- 目的:原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立问接ELIsA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELIsA方法进行比较。方法:根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP—Flury...
- 程朝飞宫苗苗王勇田康乐赵占中李刚
- 关键词:狂犬病病毒基质蛋白原核表达
- 安徽省某鸭场鸭疫里氏杆菌的分离鉴定
- 2009年
- 对安徽省某鸭场病鸭的临床症状及剖检病变进行分析和细菌分离,并对分离的细菌进行形态培养、PCR检测和克隆测序,初步鉴定疑似为鸭疫里氏杆菌的有2株,分别命名为AH-1和AH-2,同时将测序结果与GenBank上公布的序列AY606207进行比对,结果发现AH-1和AH-2与其同源性分别为97.0%和100.0%。给健康鸭注射该分离菌可复制出心包炎、肝周炎、气囊炎等典型病理变化并引起死亡。药敏试验结果表明,这2株分离菌对头孢唑林、阿莫西林、氟苯尼考、氨苄青霉素高度敏感,对罗红霉素、利福平中度敏感,对庆大霉素、丁胺卡那、红霉素、氧氟沙星、强力霉素不敏感,对链霉素、恩诺沙星、环丙沙星完全耐药。
- 谢玉洁李刚李铁吴雨寒奚晓莉吴翠娟
- 关键词:鸭疫里氏杆菌
- 实时荧光定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立被引量:6
- 2016年
- 本试验旨在建立一种快速、灵敏的诊断小反刍兽疫的方法。本研究通过RT-PCR方法扩增小反刍兽疫病毒N基因,连接到pMD19-T克隆载体上,构建质粒标准品。根据GenBank中中国流行毒株及Nigeria 75/1疫苗株N基因保守序列设计引物,利用SYBR GreenⅠ法进行实时荧光定量PCR,建立标准曲线,并进行特异性试验、敏感性试验和重复性试验。结果表明,在2.82×100-2.82×10^7拷贝/μL范围内,Ct值与质粒拷贝数对数值呈良好的线性关系,标准曲线线性关系R2值为0.992;其他病毒无特异性扩增曲线,特异性良好;批内变异系数为0.27%-2.77%,批间变异系数为0.41%-3.39%,重复性较好;检测灵敏度可达2.82拷贝/μL,是普通PCR的1 000倍。用该方法对12份cDNA样品进行检测,9份为阳性,3份为阴性,而普通PCR检测,7份为阳性,5份为阴性,说明本方法比普通PCR灵敏度高。本检测方法的建立对快速、灵敏诊断小反刍兽疫,防止疫情的扩散具有重要意义。
- 赵玲娜金红岩梁琳李刚
- 关键词:小反刍兽疫病毒实时荧光定量RT-PCRSYBR
- 鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及进化树分析
- 从北京大兴区鸭场和安徽合肥肥西鸭场中分离感染菌株,通过对病鸭的临床症状和从病鸭及死鸭的剖检病变分析,疑似鸭疫里氏杆菌病例进行病料的细菌分离,并对分离的病菌进行形态培养、PCR检测、琼扩试验和外膜A蛋白的克隆,结果鉴定为鸭...
- 吴翠娟李福宝李刚张坤吴玉寒谢玉洁
- 关键词:鸭疫里氏杆菌临床症状
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