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周益
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- 所属机构:上海市第一人民医院
- 所在地区:上海市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 袁伟杰
- 作品数：692被引量：2,899H指数：23
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- 王玲
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- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x基因（HBX）转染人近端肾小管上皮细胞（HK-2）后对其凋亡及免疫指标的影响。方法体外培养HK-2。用分子克隆的方法构建pcDNA3．1-myc-HBX质粒，采用脂质体转染法瞬时转染HK-2细胞。实时定量PCR和Western印迹法检测细胞中Toll样受体4（TLR4）的变化，流式细胞术检测细胞凋亡情况及细胞表面人组织相容复合物（MHC）-Ⅱ、CD40的变化；ELISA法检测细胞培养上清中IL-4、IFN-γ水平。结果与对照组相比，转染pcDNA3．1-myc-HBX质粒组凋亡细胞数量显著增多（P〈0．05）；TLR4的表达及其表面MHC-Ⅱ、CD40表达均显著上调（均P〈0．05）；其上清液中IFN-γ水平增加（P〈0．05），但IL-4水平降低（P〈0．05）。结论HBX质粒转染HK-2细胞后可引起细胞凋亡增加，促进细胞表面免疫分子的表达，最终导致细胞损伤及免疫微环境紊乱。
- 王轩周益袁伟杰朱楠
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- Notchl受体在乙型肝炎病毒X基因介导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡中的作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x基因（HBx）转染人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞株后对其表达Notchl受体的影响，并观察Notchl受体在HBx介导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡中的作用。方法用分子克隆的方法构建pcDNA3．1／myc—HBx质粒及pcDNA3．1／myc—Notchl质粒，转染HK-2细胞建立转染株，并应用短发夹RNA（shRNA）干扰技术沉默Notchl基因表达。将细胞分为7组：①正常培养组；②转染HBx空载质粒组；③转染HBx质粒组；④转染HBx质粒＋Notchl空载质粒组；⑤转染HBx质粒＋Notchl质粒组；⑥转染HBx质粒＋NotchlshRNA空载质粒组；⑦转染HBx质粒＋NotchlshRNA沉默质粒组。实时定量PCR和Western印迹法验证HBx转染成功，检测细胞中Notchl受体的变化，四甲基偶氮唑盐（MTT）检测各组细胞的生长抑制率，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果HK-2细胞经转染HBx基因后可高表达HBx，NotchlshRNA在HK-2细胞中的转染效率也高达70％，基因沉默有效；转染HBx基因组细胞Notchl水平明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组，且该组细胞凋亡率亦明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组，差异均有统计学意义（14．94％4-0．32％比13．86％±0．18％、13．67％±0．54％，均P〈0．05）。转染HBx质粒＋Notchl质粒组细胞凋亡率明显低于HBx质粒＋Notchl空载质粒组，差异有统计学意义（10．10％±0．26％比14．79％±0．02％，P〈0．05），其细胞增殖抑制率亦低于HBx质粒＋Notchl空载质粒组。而转染HBx质粒＋NotchlshRNA沉默质粒组细胞凋亡率及细胞增殖抑制率均高于HBx质粒＋NotchlshRNA空载质粒组（均P〈0．05）。结论构建pcDNA3．1／myc—HBx质粒并转染肾小管上皮细胞可成功制备乙型肝炎病毒细胞感染模型，由此导致的肾小管上皮细胞生长抑制及凋亡增加可能与Notchl受体异常活化有关。
- 王轩周益袁伟杰朱楠尚明花
- 关键词：肝炎病毒乙型肾小管受体NOTCHL
- 乙型肝炎病毒相关性肾炎患者肾组织Notch1受体表达与临床病理的相关性被引量：5
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- 目的观察Notchl受体在乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV．GN）患者肾组织中的表达分布特点，探讨其与肾组织病理及临床表现的相关性。方法以2008年至2010年经肾活检确诊的HBV．GN患者48例为研究对象。用免疫组化方法观察HBV-GN肾组织中Notchl受体的分布特征；免疫荧光双标观察Notchl受体与HBsAg的分布关系；分析其与病理类型、肾小球病变、肾小管病变及临床指标的关系。结果Notchl受体主要分布在肾小管上皮细胞及间质区域，呈棕红色颗粒状，肾小球内也有少量表达。HBV。GN组患者肾组织Notchl受体阳性积分显著高于血清HBsAg阳性或阴性的原发性肾小球肾炎患者及正常肾组织对照。系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）组和膜增生性肾小球肾炎（MPGN）组Notchl受体阳性积分较高，但各病理类型组间Notchl积分差异无统计学意义。Notch1受体分布与HBsAg分布一致，其强度与肾间质纤维化（r=0．473，P=0．001）、小管萎缩（r=0．690，P=0．000）、炎细胞浸润（r=0．616，P=0．000）等肾小管间质病变呈正相关；患者肾功能与Notchl受体阳性积分呈负相关（r=-0．393，P=0．006）。结论HBV—GN患者肾组织Notchl受体的表达增强，主要分布在肾小管上皮细胞及间质，与HBsAg分布一致；其表达水平与肾间质病变和肾功能变化相关。Notchl受体表达异常可能参与了HBV-GN的肾脏病理的进展。
- 周益朱楠袁伟杰尚明花刘军王玲谷立杰
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- CAPD患者微炎症及营养状态与血清HMGB-1水平的相关性
- 目的:高迁移率族蛋白-1 (HMGB-1)是一种具有多种生物学功能的核内蛋白,因其在细胞外可发生强大的致炎效应,从而被认为是一种新型的炎性细胞因子.CAPD患者常合并全身慢性微炎性反应状态.近年来,微炎性反应状态与透析患...
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- 周益袁伟杰王玲朱楠黄洁波
- 乙型肝炎病毒x基因转染肾小管上皮细胞导致细胞凋亡的机制探讨被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨乙型肝炎病毒x基因(HBx)转染人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)后对其凋亡及细胞因子分泌的影响及可能机制。方法:体外培养HK-2细胞,用分子克隆法构建pcDNA3.1/myc-HBX质粒,采用脂质体转染法瞬时转染HK-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白印迹法验证HBx在HK-2细胞中的表达。以未转染质粒组和转染空载质粒pcDNA3.1/myc组作为对照,显微镜观察转染HBx基因后HK-2细胞形态,RT-PCR检测各组细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA水平,蛋白印迹法检测各组细胞TLR4的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,ELISA检测细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)水平。结果:转染pcDNA3.1/myc-HBx质粒后的HK-2细胞中HBxmRNA和蛋白表达水平明显增加,证实转染成功;转染HBx基因组细胞形态不规则,细胞状态受损;与对照组相比,转染HBx基因组TLR4的表达水平明显上调(P<0.05),凋亡细胞数量明显增多(P<0.05),细胞上清液中IFN-γ水平增加,但IL-4水平降低。结论:经构建pcDNA/myc-HBx质粒并转染肾小管上皮细胞可成功制备乙肝病毒细胞感染模型,由此导致的肾小管上皮细胞凋亡可能与HBx引起肾小管上皮细胞TLR4的表达上调有关,HBx亦能导致细胞因子分泌紊乱。
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- 周益袁伟杰
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