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王雅明
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- 所属机构:北京大学肿瘤医院
- 所在地区:北京市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家高技术研究发展计划
相关作者
- 徐建军
- 作品数:36被引量:196H指数:8
- 供职机构:北京大学肿瘤医院
- 研究主题:单克隆抗体 FAB段 肿瘤 HBSAG 单抗
- 张青云
- 作品数:75被引量:404H指数:9
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- 研究主题:LAPTM4B 肿瘤 单克隆抗体 血管内皮生长因子 乳腺癌
- 王琰
- 作品数:160被引量:557H指数:14
- 供职机构:中国人民解放军
- 研究主题:噬菌体抗体库 抗体 单链抗体 抗HBSAG 单克隆抗体
- 刘群英
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- 研究主题:表面抗原 抗HBSAG HBSAG FAB段 单链抗体
- 朱迎春
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- 研究主题:抗HBSAG HBSAG 表面抗原 单链抗体 乙型肝炎
- 人uPA基因克隆和单克隆抗体的制备及其在乳腺癌中表达的检测被引量:1
- 2009年
- 目的克隆人尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)基因,制备和鉴定针对人uPA的单克隆抗体,检测uPA在乳腺癌中的表达。方法利用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MDA231总RNA中扩增克隆uPA基因,构建可表达uPA蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达GST-His-uPA融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合及次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养,并进行三次亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,纯化单克隆抗体。用Western blot、免疫组织化学等方法检测了uPA在乳腺癌中的表达。结果克隆了1 227 bp的uPA基因片段,构建了可表达uPA蛋白的原核表达质粒pET-41b-uPA;获得了3株能稳定分泌针对uPA的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为IgG2a,它们均能特异识别uPA,与其它蛋白无交叉反应。Western blot结果显示,该抗uPA单抗与GST-His-uPA融合蛋白及细胞中的天然uPA蛋白均能结合。免疫组织化学显示,该单抗在乳腺癌低侵袭低转移细胞系MCF7中呈阴性表达,而在乳腺癌高侵袭高转移细胞系MDA231中呈阳性表达,并且能与乳腺癌组织结合,呈强阳性反应。结论克隆了人uPA基因,通过原核表达体系制备并纯化了针对uPA的单克隆抗体,初步检测了uPA在乳腺癌细胞和组织中的表达,为深入研究uPA的功能和检测临床肿瘤组织及体液中的uPA奠定了可靠的基础。
- 赵桂梅张青云王雅明徐建军
- 关键词:尿激酶型纤溶酶原激活物单克隆抗体乳腺癌免疫组织化学
- 人纤溶酶原激活物抑制物1基因克隆表达和单克隆抗体的制备及其初步应用被引量:4
- 2007年
- 目的克隆人纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)基因,制备和鉴定针对人 PAI1的单克隆抗体,以检测 PAI1在乳腺癌中的表达。方法利用逆转录(RT)-PCR 方法从人乳腺癌细胞株MDA231总 RNA 中扩增克隆 PAI1基因,构建其原核表达质粒,并表达 MS2-PAI1融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫 BALB/C 小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出单克隆细胞株,纯化单克隆抗体。利用蛋白印迹(Wb)、免疫组织化学法检测分析 PAI1在乳腺癌中的表达水平。结果克隆了1209 bp 的 PAI1基因全长片段。经 ELISA 双筛,获得2株能稳定分泌抗 PAI1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为 IgG1,且均能特异识别 PAI1,并与其他蛋白无交叉反应。Wb 结果显示,该抗 PAI1单抗与 MS2-PAI1融合蛋白以及细胞中的天然蛋白均能结合。免疫组织化学染色结果显示,该单抗与人乳腺癌细胞株 MDA231和乳腺癌组织结合后,呈阳性反应。结论克隆了人 PAI1基因,通过原核表达产物制备并纯化了针对 PAI1的单克隆抗体。初步检测 PAI1能在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中表达,这为深入研究 PAI1基因功能和检测临床肿瘤组织及体液中的 PAI1奠定了可靠基础。
- 任芳张青云王雅明徐建军
- 关键词:肿瘤
- 多聚腺苷酸信号缺陷病毒捕获宿主序列导致细胞转化
- 2001年
- 目的 :通过人工改变逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,检测病毒转录能否产生病毒 宿主融合转录产物及其是否具有转化细胞的能力 ,探讨病毒致癌的机制。方法 :用分子生物学技术人工定点突变鼠逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,使之产生多聚腺苷酸缺陷性病毒 ;用该病毒转染大鼠REF 1细胞 ,并用G418筛选抗性细胞。通过Northernblot方法检查通读RNA的表达 ;通过细胞形态和软琼脂集落形成实验检测细胞的转化。结果 :多聚腺苷酸化信号缺陷病毒PS可在CRIP包装细胞形成病毒 ;用该病毒感染大鼠REF 1细胞 ,可捕获下游宿主细胞序列 ;多聚腺苷酸化信号缺陷病毒感染的REF 1混合细胞中的部分细胞可使REF 1细胞集聚能力增强 ,在软琼脂中以集落式生长。结论 :多聚腺苷酸信号缺陷病毒感染REF 1细胞后可通过表达病毒 宿主通读RNA激活下游宿主序列使细胞发生转化 。
- 张青云李振甫王利民王雅明徐建军
- 关键词:逆转录病毒细胞转化病毒
- 胶体金免疫层析技术检测食管癌患者血清中生存素的表达被引量:1
- 2009年
- 目的探讨生存素(survivin)胶体金免疫层析试纸条作为食管癌血清筛选方法的可行性。方法用survivin胶体金免疫层析试纸条检测158例食管癌和146名健康对照者血清标本,并评价其检测性能。结果制备直径20nm的胶体金溶液后,用不同浓度的survivin多抗标记胶体金溶液,确定最佳标记浓度12μg/ml。组装后survivin胶体金免疫层析试纸条检测临床血清标本结果显示,survivin在食管癌患者组中阳性率为51.9%(82/158),在健康对照组阳性率为15.1%(22/146),两组差异有统计学意义(χ^2=45.7,P〈0.05)。survivin阳性率在患者不同年龄组(42~54岁组47.1%,55~68岁组40.9%,69~81岁组63.9%)、不同性别组(男性患者组50.4%,女性患者组58.1%)、不同原发部位组(食管上段组56.3%,中段组46.1%,下段组32.1%)、不同分化程度组(高分化组56.3%,中分化组43.2%,低分化组32.7%)和淋巴结有无转移组(淋巴结转移组43.3%,淋巴结未转移组43.4%)的各组内差异均无统计学意义(χ^2分别为1.11、0.59、2.64、1.63和0.00,P均〉0.05)。survivin胶体金免疫层析试纸条敏感度51.9%(82/158),特异度84.9%(124/146),准确性67.8%(206/304)。结论survivin胶体金免疫层析试纸条操作简单,结果容易判定,可作为食管癌高发人群的筛选方法之一。
- 宋燕张青云王雅明徐建军
- 关键词:生存素试纸条胶体金免疫层析食管癌
- 抗人肝癌相关基因LAPTM4β胞内肽段单克隆抗体的制备与鉴定及其表达的检测
- 2009年
- 目的制备和鉴定鼠抗人肝癌相关基因溶酶体相关四次跨膜蛋白β胞内99个氨基酸残基(LAPTM4β-IC-N1-99)的单克隆抗体,检测LAPTM4β在肝癌中的表达,为深入研究其结构和功能奠定基础。方法利用本实验室构建原核表达质粒pGEX-KG-LAPTM4β-IC-N1-99,在大肠杆菌中表达融合蛋白GST-LAPTM4β-IC-N1-99。用纯化的蛋白LAPTM4β-IC-N1-99免疫雌性BALB/C小鼠,以常规杂交瘤技术制备鼠抗人LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体(LAPTM4β-IC-N1-99McAb)。进行抗体亚类测定和免疫印迹法(WB)分析,然后用免疫化学技术检测LAPTM4β-IC-N1-99在肿瘤中的表达。结果诱导并纯化了重组GST-LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子质量约为32000;纯化得到LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子量约为10000。筛选出6株能稳定分泌抗LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体的杂交瘤细胞株(D7,B12,H2,H8,A9和A10),D7、H8、A10分泌抗体亚类为IgG1,B12、A9、H2为IgG2b。Western blotting鉴定显示,抗LAPTM4β-IC-N1-99单抗可与融合蛋白及细胞内LAPTM4β蛋白特异性结合,具有高度特异性。免疫细胞化学证明,所得抗体能检测到肿瘤细胞中LAPTM4β基因的表达。结论以纯化的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白免疫,获得了效价高、特异性好的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白的单克隆抗体,用其可检测到LAPTM4β肿瘤细胞中的表达,这为LAPTM4β蛋白的生物学功能研究奠定了基础。
- 张瑞娟李琦张青云王雅明徐建军赵桂梅
- 关键词:单克隆抗体杂交瘤
- 人神经元特异性烯醇化酶基因克隆及单克隆抗体的制备与鉴定被引量:5
- 2005年
- 目的研究建立克隆人神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因制备鼠抗人NSE单克隆抗体方法。方法用NSE特异引物,通过逆转录多聚酶链式反应从人肺癌细胞株A549中扩增NSE基因,构建重组质粒pGEMTNSE,并测序鉴定NSE基因序列。再将NSE基因定向克隆于原核高效表达载体pMS31b,当表达MS2NSE融合蛋白后,免疫BALB/C小鼠。并用常规杂交瘤技术,制备鼠抗人NSE单克隆抗体(NSEMcAb)。最后,采用免疫细胞化学(ICC)技术检测NSE在肿瘤细胞株中的表达。结果克隆岀全长1305bp的NSE基因,其表达的MS2NSE融合蛋白为57000,表达量142mg/L。获得2株能稳定分泌抗NSE单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经检测其分泌抗体的亚型分别为IgG1和IgG2a。ICC检测证明所得NSEMcAb能检测到肿瘤细胞中NSE的表达。结论成功克隆了NSE基因,并获得鼠抗人NSEMcAb,为深入研究NSE基因的表达提供了有力的工具。
- 朱爱萍张青云王雅明徐建军
- 关键词:NSE单克隆抗体神经元特异性烯醇化酶MS定向克隆克隆人
- 人抗-HBs Fab段基因的序列分析及表达被引量:34
- 1995年
- 对已建的噬菌体抗体库中分离的人抗-HBs克隆进行了序列分析和表达研究,发现19个克隆都具有相同的重链可变区基因,轻链可变区基因有4个相同,其余15个未进行序列测定。DNA序列分析表明VH、JH分属VHVHⅢ和JH6,D段为二个D基因的融合,VK,JK属于VKI和JK4。
- 王琰刘群英徐建军王雅明陈竞华
- 关键词:HBSAG噬菌体抗体
- 金属螯合亲和层析法对抗HBsAg Fab段的纯化被引量:1
- 1996年
- 为了对大肠杆菌表达的Fab段进行简便有效的纯化,我们在Fab段表达载体上插入了一段编码六个组氨酸的DNA片段,使所表达的Fab段在Fd段的羧基端带有六个连续的组氨酸,通过金属螯合亲和层析法对大肠杆菌表达的Fab段进行纯化,利用不同pH梯度缓冲液洗脱,一步即可达到95%以上纯度的纯化.
- 王琰刘群英化冰朱迎春王雅明徐建军
- 实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌患者外周血中uPA基因表达水平及其临床意义
- 2009年
- 目的探讨人外周血中尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)基因表达水平与乳腺癌临床分期和转移的关系,评价其对乳腺癌辅助诊断及判断预后的临床意义。方法采用实时荧光定量PCR方法检测71例正常人和90例乳腺癌患者外周血中uPA mRNA表达水平。结果97.8%的乳腺癌病人外周血中有uPA基因表达,在正常人外周血中的表达率为40.8%;基因表达水平与临床分期和肿物转移情况相关,P值均<0.05;在患者年龄、肿瘤组织学类型及肿瘤大小分组中,uPA基因表达未发现显著性差异。结论乳腺癌患者外周血中uPA基因表达水平明显增高,并且与肿瘤细胞的转移和病理分期有关。应用实时荧光定量PCR的方法检测外周血中uPA基因表达水平对乳腺癌的辅助诊断及判断预后具有一定的意义。
- 刘俊泽张青云王雅明徐建军
- 关键词:尿激酶型纤溶酶原激活物乳腺癌荧光定量PCR法
- 细胞因子Midkine融合蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与应用被引量:3
- 2005年
- 目的:克隆细胞因子midkine(MK)基因,表达其融合蛋白,制备抗MK单克隆抗体(mAb)并检测MK在肿瘤细胞中的表达。方法:利用MK基因的特异性引物,通过RT-PCR从人肾癌组织mRNA中扩增人MKcDNA分子。将其定向克隆于原核表达载体中,在大肠杆菌中表达MS2-MK融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用传统的杂交瘤技术,进行细胞融合、筛选、克隆化并制备mAb腹水。用ELISA法分析其Ig亚类,用免疫细胞化学染色法检测MK在肿瘤细胞中的表达。结果:成功地克隆出MK基因并表达了MS2-MK融合蛋白。通过免疫和筛选,获得2株分泌小鼠抗人MKmAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb的Ig亚类分别为IgG1和IgG2a。免疫细胞化学染色显示,2株mAb与人胃癌细胞株MGC803和胃癌组织呈强阳性反应。结论:在原核细胞中获得MS2-MK融合蛋白的表达,并制备出抗MK的mAb,为研究MK的生物学活性提供了条件。
- 张青云杨敏王雅明徐建军
- 关键词:RT-PCRMIDKINE单克隆抗体免疫细胞化学染色