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王晶
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- 所属机构:河北农业大学
- 所在地区:河北省 保定市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家现代农业产业技术体系建设项目
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- 首先利用间接免疫荧光方法、Western blot及Image J灰度值分析,研究猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染细胞后及通过紫外线灭活后的病毒对自噬相关蛋白LC3的蛋白表达及转化水平的影响;其次利用自噬促进剂雷帕霉素及自噬抑制剂3-MA对PK-15细胞进行处理,通过qRT-PCR及病毒滴度测定研究细胞自噬在其病毒增殖过程中所产生的影响;最后通过qRT-PCR对自噬关键基因在病毒感染细胞时的动态变化及影响进行分析。结果显示,随着病毒感染时间的增加,细胞内的LC3-Ⅰ逐渐向LC3-Ⅱ转化,其LC3-Ⅱ/β-actin的比值明显增加;结合雷帕霉素作用后,细胞自噬极显著上调了TGEV mRNA转录水平及病毒滴度(P<0.01);与自噬抑制剂3-MA结合后,随病毒感染时间的不同,极显著下调了其病毒的mRNA转录量及病毒滴度(P<0.01)。而TGEV在感染细胞后极显著诱导了自噬关键基因(ATG-5及Beclin-1)mRNA转录水平的提升(P<0.01),并结合病毒增殖情况印证了细胞在受到TGEV感染后,其病毒增殖与自噬程度呈正向作用,说明病毒感染可诱导细胞自噬,促进细胞自噬会增加分离株的病毒滴度。结果表明,TGEV感染PK-15细胞后可诱导细胞自噬,并确定了自噬在TGEV感染中的重要作用。
- 刘莹袁广富张增贤张毅王晶郭禹赵云环范京惠左玉柱
- 关键词：细胞自噬TGEV病毒增殖自噬相关基因
- 河北省塞内卡病毒A VP2基因克隆和序列分析被引量：1
- 2022年
- 为了解河北省塞内卡病毒A(SVA)VP2基因的变异及分子进化情况,试验设计了一对VP2基因扩增引物,通过RT-PCR方法扩增和克隆测序,利用MEGA 7.0软件对测序获得的VP2基因序列和GenBank上的参考序列进行遗传进化分析,运用MegAlign 5.0软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析。结果表明:成功扩增并测序得到VP2基因序列,将该序列上传至GenBank,获得基因登录号为MZ031967,命名为SVA HB-BD株。该毒株与中国毒株核苷酸序列相似性为95.9%~99.6%;与原型毒株SVV-001(DQ64125-7核苷酸)相似性较低,为94.6%;与其他美国毒株(MN812946、MN812947、KC667560、MH704432、MN812938、MN812937、KU954086、NC011349)核苷酸相似性为93.0%~94.6%。SVA HB-BD株与2015—2016年分离毒株亲缘关系较近,处于同一分支,而与2017—2018年分离毒株亲缘关系较远。SVA HB-BD株与广东省分离毒株氨基酸序列相似性较高,并且在VP2蛋白中和表位位点高度保守。说明HB-BD株与中国毒株具有相同起源,并且在不断演变。
- 王晶郭禹赵云环顾文源刘涛翟刚张帅王丙雷左玉柱范京惠
- 关键词：VP2基因PCR扩增遗传进化
- 潮褐土区蔬菜硝酸盐和重金属污染特点及其控制技术
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- 关键词：绿色蔬菜
- 1,25(OH)2D3对猪伪狂犬病病毒诱导小鼠流产的影响
- 2020年
- 旨在探明1,25(OH)2D3对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)诱导小鼠流产的影响。采用颈背部皮下注射不同剂量PRV建立PRV诱导小鼠流产模型;通过实时荧光定量PCR检测不同剂量1,25(OH)2D3预处理组和生理盐水预处理组小鼠卵巢和子宫内VDR mRNA的水平及PRV量;利用组织学病理切片技术观察PRV引起的1,25(OH)2D3预处理组和生理盐水处理组小鼠子宫和卵巢的病理变化。结果显示,成功建立了小鼠流产模型,确定了引起小鼠流产的PRV最佳接种剂量为0.35 mL 1 000 TCID50 PRV;用300μg/kg 1,25(OH)2D3预处理,小鼠VDR表达水平最高,能有效抑制病毒的增殖,对PRV感染小鼠流产的抑制作用最强。组织病理学检查发现,相较于生理盐水预处理的PRV感染组,1,25(OH)2D3预处理组小鼠卵泡腔内颗粒细胞增多、红细胞量减少;子宫腔内红细胞数量减少或消失,子宫内膜皱褶增多。结果表明,1,25(OH)2D3能有效抑制PRV增殖,降低PRV诱导的小鼠流产。
- 左玉柱韩磊王晶袁广富张建楼范京惠仲飞
- 关键词：1,25(OH)2D3猪伪狂犬病病毒妊娠小鼠流产
- 猪蓝耳病的发生与防治
- 2020年
- 经过专家多年研究发现,猪蓝耳病属于一类免疫抑制性疾病,目前临床上并没有针对该病的有效诊断措施和治疗方法。本文以探讨这类疾病的发病原因为基础,总结这类疾病的临床表现特点,以此提出有利于治疗这一类疾病的措施,帮助医生和研究人员做进一步分析诊断。1猪蓝耳病病因1.1饲养管理不善从分析现有的临床诊治案例可以知晓.
- 王晶王明慧李健壮
- 关键词：猪蓝耳病免疫抑制性疾病临床表现特点管理不善发病原因临床诊治
- 基于多年降雨资料的灌溉制度多目标优化
- 我国水资源分布不均匀，而且水资源严重不足，作为一个农业大国，如何在农业中提高水的利用率，达到节水高产的目的对缓解我国水资源供需矛盾具有战略性意义。在灌区用水规划中，如何制定合理的灌溉制度是关键问题。
本文在讨论节水...
- 王晶
- 关键词：灌溉制度多目标优化农田水量平衡遗传算法
- 猪星状病毒4型SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：4
- 2020年
- 为建立一种快速检测猪星状病毒4型(PAstV4)的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,根据已知的猪星状病毒4型序列的ORF1a基因设计了特异性引物,并将扩增片段克隆到pMD19-T载体上;将构建的重组质粒作为标准品建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法,并对建立方法的灵敏性、特异性及重复性进行验证。结果显示,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法最低检测量为50.3拷贝·μL-1,其灵敏度是普通PCR的100倍;与CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、PDCoV无交叉反应,特异性较好;建立的标准曲线呈良好的线性关系,相关系数R2=1.00。应用该方法检测了2018-2019年收集的43份临床样品,阳性率为18.6%。本研究为猪星状病毒4型的临床检测建立了一种快速、灵敏、特异性强的方法。
- 陈少杰刘立辉吴志勇肖娜袁广富王晶邢亚茹刘如月范京惠左玉柱
- 关键词：荧光定量SYBR
- 基于多年降雨资料的作物灌溉制度多目标优化被引量：12
- 2013年
- 在非充分灌溉制度条件下,基于农田水量平衡模拟模型和作物产量计算模型并考虑随机降雨的影响,以灌溉日期和灌溉水量为决策变量,将多年作物相对产量均值最大、多年作物相对产量方差最小以及作物全生育期的总灌溉水量最小作为优化目标,建立了能够同时对灌溉日期和灌溉水量进行优化的多目标优化模型。以玉米的非充分灌溉制度优化为例用上述模型及算法进行了计算分析,并与典型年法得到的优化结果进行了对比,结果表明:基于多年降雨资料的优化灌溉制度具有较强的适应性和鲁棒性,可以避免由于灌溉日期安排不合理而导致的减产或绝收问题。
- 吴鑫淼王晶郄志红
- 关键词：玉米灌溉制度典型年法
- A型塞内卡病毒VP2蛋白抗原区的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：1
- 2023年
- 为建立高效的A型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在42 ku处出现特异性条带,表明r VP2可以与SVA阳性血清特异性反应。以r VP2为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL,5%脱脂乳的PBST作为封闭液37℃孵育1 h,待检血清的最适稀释度为1∶500,兔抗猪Ig G-HRP稀释度为1∶10000,最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时,样品检测结果为阴性;当检测样品的S/P值≥0.201时,结果为阳性。利用该方法检测SVA,猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)等阳性血清,结果显示,除SVA检测为阳性外,其他病毒均为阴性,特异性较强。将SVA阳性血清2倍倍比稀释(1∶50,1∶100,1∶200,1∶400,1∶800,1∶1600)后经该间接ELISA方法检测,评估其敏感性,结果显示,SVA阳性小鼠血清在1∶800稀释后检测结果仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r VP2包被ELISA板,按照该ELISA方法检测8份猪SVA阳性血清,评估该方法的重复性。结果显示,批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,该方法重复性好。利用本实验建立的间接ELISA方法与血清中和试验同时对266份临床血清样品检测,结果显示,本研究建立方法检测的样品阳性率为19.1%,中和试验检测的样品阳性率为19.55%,两种方法检测结果符合率为97.7%。本研究首次基于SVA r VP2建立的间接ELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,为SVA的检测和其感染的防控提供了可靠的技术支持。
- 翟刚顾文源王晶刘莹赵云环刘涛刘涛张帅左玉柱
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- 一种旋流式太极八卦鱼道
- 本实用新型公开了一种旋流式太极八卦鱼道，包括多个依次连通的圆形池室，相邻的圆形池室之间通过收缩区连通，所述收缩区由反向圆弧平顺衔接，各所述圆形池室内设置有可转动的太极圆盘，所述太极圆盘包括由阳鱼部分和阴鱼部分构成的圆盘，...
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