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颜奇坡
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- 所属机构:军事医学科学院野战输血研究所
- 所在地区:北京市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 马玉媛

- 作品数:99被引量:141H指数:8
- 供职机构:军事医学科学院野战输血研究所
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- 章金刚

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- 吕茂民

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- 2010年
- 目的 分析嗜人性猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retroviruses,PERV)感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应机制.方法 嗜人性PERV感染性克隆感染HEK293细胞,采用PCR、实时定量RT-PCR、免疫荧光分析确认PERV感染,利用实时定量RT-PCR和免疫印迹法分析Stathmin蛋白表达差异.结果 嗜人性PERV感染性克隆成功感染HEK293细胞,实时定量RT-PCR和免疫印迹法检测结果表明,PERV感染后Stathmin蛋白与对照相比表达上调.结论 嗜人性PERV感染HEK293细胞后Stathmin表达上调,该研究结果为深入研究嗜人性PERV与人源细胞的相互作用及PERV感染后的分子效应等提供了线索,也提示了PERV感染后可能会对细胞的生长、生理功能等造成影响,甚至存在潜在的致病性.对探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的效应以及猪→人异种移植的病毒安全性评价也具有重要意义.
- 颜奇坡马玉媛吕茂民叶小丽郑霖吴健敏田克恭章金刚
- 关键词:猪内源性反转录病毒HEK293细胞STATHMIN
- 猪IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系的建立被引量:2
- 2011年
- 为了解猪体内细胞免疫应答机制,本研究建立猪细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的TaqMan实时定量RT-PCR检测体系。以五指山小型猪cDNA为模板,扩增IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的基因保守区,构建相应的重组质粒,并将其作为标准品构建标准曲线。结果显示,各标准曲线的相关系数r值均大于0.990,扩增效率为90%~105%;该检测方法的敏感性较高,IL-4检测下限为1copies/μL,IL-2、IL-10及IFN-γ检测下限达为102copies/μL;重复性较好,批内重复试验与批间重复试验变异系数均小于5%。本研究为病毒感染后猪体内免疫应答等研究提供方法。
- 马玉媛郭逸颜奇坡叶小丽张启模郑霖田克恭章金刚
- 关键词:实时定量RT-PCR
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- 猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retroviruses,PERV)是猪→人异种移植中倍受关注的病毒。PERV感染人源细胞后虽然没有细胞病变,但这种隐性感染是否会通过潜在的与宿主细胞相互作用引起...
- 颜奇坡马玉媛吕茂民叶小丽郑霖吴健敏田克恭章金刚
- 关键词:感染性克隆STATHMIN
- 猪内源性反转录病毒整合拷贝数检测方法的建立
- 本研究的目的是建立猪内源性反转录病毒(porcine endogenousretrovirus,PERV)在基因组中整合拷贝数的检测方法。设计并合成了检测PERV pol基因的引物,采用基于SYBR Green I的实时...
- 马玉媛杨勇贤吕茂民颜奇坡郑霖丁芳吴健敏田克恭章金刚
- 关键词:小型猪猪内源性反转录病毒拷贝数荧光定量PCR
- ELISPOT检测高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染后猪γ-干扰素的分泌情况被引量:2
- 2010年
- 目的:研究高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)感染后猪外周血单个核细胞(PBMC)特异性分泌γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应。方法:将仔猪接种PRRSV,于病毒接种前后各时间点分别采血并分离PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测PBMC分泌IFN-γ的情况。结果:猪感染高致病性PRRSV后,PBMC分泌IFN-γ的能力明显增强,对照组无明显变化。结论:该结果可为研究高致病性PRRSV致病机理提供参考,为评价PRRSV疫苗诱发的细胞免疫效应提供依据。
- 郑霖马玉媛颜奇坡叶小丽郭逸田克恭章金刚
- 关键词:酶联免疫斑点法猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒Γ-干扰素
- 嗜人性PERV感染性克隆感染人源细胞后Stathmin蛋白表达差异分析
- 目的分析嗜人性猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retroviruses,PERV)感染的人源细胞中Stathmin蛋白的差异表达情况,探索嗜人性PERV感染人源细胞后可能产生的分子效应。方法嗜人...
- 颜奇坡马玉媛吕茂民叶小丽郑霖吴健敏田克恭章金刚
- 关键词:STATHMIN
- 文献传递
- 原料血浆中人细小病毒B19的初步检测
- 目的血液与血液制品中人细小病毒B19(human parvovirus B19,HPV B19)的污染越来越受到人们的关注。B19病毒体积微小,没有囊膜,对各种理化条件抵抗力较强,不易去除或者灭活。因此,对B19病毒核酸...
- 颜奇坡赵雄章金刚
- 关键词:原料血浆人细小病毒B19实时定量PCR核酸检测
- 文献传递
- 五指山猪内源性反转录病毒前病毒全基N克隆与序列分析
- 目的:建立五指山猪内源性反转录病毒(PERV)前病毒全基因克隆,并进行序列分析。
方法:将PERV前病毒全基因分为两个大片段分别进行扩增,将两片段依次插入到低拷贝质粒载体pWSK29中,构建得到全基因克隆并测序...
- 马玉媛颜奇坡杨勇贤吕茂民吴健敏田克恭章金刚
- 关键词:五指山猪基因克隆
- 文献传递
- 中国特有小型猪内源性反转录病毒感染性克隆的构建与鉴定
- 异种移植,就是通过将动物器官、组织、细胞等移植到人体内,来解决机体组织器官功能障碍并达到治疗的目的。而人源供体器官的严重短缺,就需要通过异种移植作为替代途径解决。猪源器官的器官大小、生理学特点等都与人类相近,被认为是最合...
- 颜奇坡
- 关键词:中国小型猪感染性克隆异种移植分子机制
- 猪内源性反转录病毒囊膜基因env真核表达质粒的构建及鉴定
- 2011年
- 目的:构建猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因env的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法:用RT-PCR方法扩增五指山猪来源PERV的env基因,将其插入pGEM-T easy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env,酶切鉴定正确后,将pGEM-T-env与pHCMV-VSV-G表达质粒同时经EcoRⅠ酶切消化后连接,构建重组表达质粒pHCMV-env,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的质粒pHCMV-env转染HEK293T细胞,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况。结果:扩增得到五指山猪来源PERV的env基因,并构建了pHCMV-env真核表达质粒,转染HEK293T细胞系后,该细胞系中有目的基因的整合和转录。结论:构建了真核表达质粒pHCMV-env,并且在HEK293T细胞中能够整合并转录,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定了基础。
- 叶小丽吕茂民颜奇坡郭逸吴健敏田克恭马玉媛章金刚
- 关键词:猪内源性反转录病毒ENV基因真核表达