公共文化服务平台

作品数： 7被引量：120H指数：6

相关作者

季明杰: 作品数：19被引量：118H指数：6; 供职机构：山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室; 研究主题：乳酸菌微生态制剂变性梯度凝胶电泳微生物多样性 PCR-DGGE

作品列表

一种适于微生物多样性分析的青贮饲料总DNA的提取方法被引量：2: 2009年; 目的:提出一种适于微生物多样性分析的青贮饲料中微生物总DNA的提取方法,并评价其效果。方法:间接法抽提样本的总DNA,通过琼脂糖电泳、紫外吸收及PCR分析DNA质量,DGGE评价提取效果,用PCR扩增目的菌株的特定片段来检测提取方法的灵敏度。结果:两个样本DNA的A260/A280值分别为1.99和1.93,A260/A230值分别为2.19和1.90,提取的DNA不需纯化便可直接用于16S rRNA基因的扩增,提取方法灵敏度为3cfu/g,DGGE结果表明提取方法可以涵盖样品中的所有微生物。结论:提取的DNA纯度较高,可直接用于下游分子操作,提取方法灵敏度较高,能全面反映样品中的微生物原貌,可用于免培养法研究青贮饲料中的微生物菌群组成。; 马俊孝孔健季明杰; 关键词：青贮饲料 DNA提取 DGGE 微生物多样性

利用PCR-DGGE技术分析微生态制剂在传代过程中的菌群变化被引量：6: 2008年; 利用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术,结合传统平板培养法对实验室研制的1种由乳酸菌和芽孢杆菌组成的微生态菌剂WS-401及其在连续转接培养过程中细菌种群组成的动态变化进行分析。WS-401原液的活菌数为2×107cfu/mL,且细胞个体形态多样。将分离自原液的3株细菌进行DGGE分析,出现2种指纹谱带,对照标准的DGGE指纹图谱库和序列分析,分别被鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)。将该菌剂分别在LB和MRS两种培养基中30℃或37℃连续转接5次,DGGE分析每次转接后培养物的菌群组成,结果发现,随着转接次数的增加,微生物菌群的种类减少,在LB培养基中转接5次后优势菌群只有蜡状芽胞杆菌,而在MRS培养基中转接后优势菌群为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。由此说明,微生物的营养基质和培养条件对微生态制剂在传代过程中的菌群组成和动态变化有重要影响。; 马俊孝孔健季明杰; 关键词：微生态制剂变性梯度凝胶电泳传代培养

PCR-DGGE技术在微生物物种多样性研究中的局限性及其解决措施被引量：41: 2008年; 变性梯度凝胶电泳(denaturing gradientg elelectrophoresis,DGGE)技术目前已经成为研究微生物物种多样性和动态变化的分子检测工具之一。该技术不依赖于微生物的分离培养,便能快速、准确地获取复杂样品中微生物的菌群组成及其遗传信息,因此被广泛应用于微生物生态学、食品微生物学等领域。但DGGE技术存在一定的局限性,有时会造成分析结果的偏差。本文简单概述了DGGE技术的基本原理及其在微生物群落分析中的应用,重点对造成DGGE结果偏差的因素,如DNA提取、PCR扩增、DGGE条件以及DGGE图谱分析等进行讨论,并提出相应的解决措施,旨在对DGGE检测结果的分析提供参考。; 马俊孝季明杰孔健; 关键词：变性梯度凝胶电泳微生物多样性微生物生态学 PCR

利用PCR-DGGE技术分析乳制品中的乳酸菌(英文)被引量：8: 2009年; 在食品发酵行业,需要一种简捷有效的方法检测发酵产品中的有益微生物.聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(Ploymerase chain reaction and denaturing gredient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术广泛应用于微生物生态学的研究.采用PCR-DGGE对5种含有乳酸菌的乳制品进行了菌群组成分析,并通过传统培养方法和核酸序列分析进行了验证.结果表明,所有测试样品中的活菌数量都在106～109 cfu/mL之间,通过平板培养法分离出了形态明显的杆状菌和链球状菌,对其进行16S rDNA核酸序列测定及同源性分析,将其鉴定为德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus).建立了由已知乳酸菌组成的DGGE参考阶梯(Reference ladder),可用其对相应菌株进行DGGE鉴定.用两对不同引物进行PCR-DGGE分析,除样品1外,试样中均检测到德氏乳杆菌和嗜热链球菌.对DGGE参考阶梯未能直接鉴定的样品1的电泳条带进行回收、序列分析,分别鉴定为卷曲乳杆菌(L.crispatus)和鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus).同时发现,引物R518-F357对嗜热链球菌模板的识别效率高于引物Lac1GC-HDA2.以上结果表明,RCR-DGGE技术可以对样品中的乳酸菌进行快速的分析和鉴定.; 马俊孝孔健季明杰; 关键词：乳酸菌酸奶益生菌发酵乳制品

微生物青贮剂在玉米秸秆黄贮中的作用被引量：48: 2004年; 玉米秸秆黄贮过程中接种乳酸菌可以迅速降低原料的pH值 ,有效抑制腐败菌生长 ;添加纤维素酶 ,可以使秸秆的纤维含量由原来的 35 .3%降低到 2 5 .3% ,并增加可溶性碳水化合物含量 ;同时使用酵母菌 ,可使粗蛋白含量提高 10 % .所以 ,微生物青贮剂的使用 ,能有效改善黄贮秸秆的品质和营养价值 .; 王富生马俊孝任红卫孔健; 关键词：微生物青贮剂乳酸菌纤维素酶玉米秸秆青贮

利用PCR-DGGE技术检测、鉴定乳酸菌: 乳酸菌广泛存在于人和动物肠道、植物表面等生境中。作为最具代表性的益生菌，乳酸菌在食品发酵、饮品和饲料等领域有着悠久的应用历史。将分子生物学方法引入微生物生态学领域，研究乳酸菌制品中不同乳酸菌及其菌群组成，可以获得发酵过程...; 马俊孝; 关键词：变性梯度凝胶电泳乳酸菌 DNA提取聚合酶链式反应; 文献传递

PCR-DGGE技术在乳酸菌检测中的条件研究被引量：7: 2008年; 变性梯度凝胶电泳技术广泛应用于微生物生态学的研究,最近也渗透到食品微生物学领域。为了检测发酵乳制品中乳酸菌的组成及动态变化,本实验对PCR-DGGE技术在乳酸菌检测中所需要的条件如变性剂梯度、电泳时间进行研究。结果表明,变性剂梯度在30%～55%,电泳时间为200min时,能够有效分离乳酸菌的16SrRNA基因的V3区域。在此基础上,就PCR技术对染色体DNA混合模板的扩增效率进行分析,结果发现,常规PCR技术与降落PCR技术对乳酸菌16SrRNA基因V3区域的扩增没有差异,而细菌通用引物对乳酸菌模板DNA的识别和扩增具有优先和偏爱性,预示PCR-DGGE技术用于微生物群体检测时还应选用乳酸菌引物进行佐证。; 马俊孝孔健; 关键词：变性梯度凝胶电泳聚合酶链式反应乳酸菌