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上海市自然科学基金(034119807)

作品数：2 被引量：2H指数：1
相关作者：郭文毅方媛莫晓芬田洁马端更多>>
相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学更多>>
发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇营养因子
  • 2篇荧光
  • 2篇神经营养
  • 2篇神经营养因子
  • 2篇细胞
  • 2篇绿色荧光
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质类
  • 1篇电穿孔
  • 1篇电穿孔转染
  • 1篇动物
  • 1篇动物实验
  • 1篇雪旺细胞
  • 1篇荧光蛋白
  • 1篇源性
  • 1篇源性神经营养...
  • 1篇融合表达载体
  • 1篇神经节
  • 1篇神经节细胞

机构

  • 2篇复旦大学
  • 2篇复旦大学上海...

作者

  • 2篇孔德升
  • 2篇孙兴怀
  • 2篇马端
  • 2篇田洁
  • 2篇莫晓芬
  • 2篇方媛
  • 2篇郭文毅
  • 1篇张萌
  • 1篇樊嘉雯

传媒

  • 1篇中华眼科杂志
  • 1篇中华眼底病杂...

年份

  • 2篇2009
共 2 条 记 录，以下是 1-2
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排序方式：
脑源性神经营养因子-绿色荧光蛋白融合基因载体的构建、鉴定及初步应用研究
2009年
目的构建脑源性神经营养因子（BDNF）绿色荧光蛋白（GFP）融合表达质粒，观察其融合蛋白的特性。方法将BDNFcDNA片段插入pcDNA3．1／NT-GFP—TOPO真核表达质粒，使其与GFP同处一个阅读框架中，测序鉴定后，转染培养的雪旺细胞，用免疫组织化学和蛋白质印迹（Western botting）观察外源性目的蛋白的表达情况，并用该质粒活体转染视神经切断的大鼠模型，观察所表达外源性蛋白的神经保护作用。结果测序证实质粒构建成功。Westernbotting结果显示，BDNF—GFP融合蛋白表达一相对分子质量为41×10^3。大小条带。荧光显微镜下可见BDNF～GFP转染的细胞发出绿色荧光，免疫组织化学染色后，可见绿色荧光与红色荧光完全重合。转染BDNF—GFP质粒和GFP质粒的大鼠视神经切断术后7d存活视网膜神经节细胞（RGC）分别为（1201±286）、（482±151）个／mm^2，存活百分比分别为（51．39±12．24）％和（20．62±6．46）％；28d时存活的RGC分别为（715±71）、（112±24）个／mm^2，存活百分比分别为（30．59±3．04）％和（4．79±1．03）％。两组存活百分比比较，差异有统计学意义（t=3．144，11．378；P〈0．01）。结论BDNF-GFP融合表达载体可以转录翻译为一融合蛋白，该蛋白可自发绿色荧光，并具有BDNF的生物学活性。
方媛樊嘉雯莫晓芬孙兴怀郭文毅孔德升马端田洁
关键词：基因疗法动物实验
构建睫状神经营养因子绿色荧光蛋白融合表达载体电穿孔转染雪旺细胞的研究被引量：2
2009年
目的构建睫状神经营养因子-绿色荧光蛋白（CNTF-GFP）融合表达质粒，以电穿孔法辅助转染培养的雪旺细胞，为优化细胞移植、促进视神经再生提供效果更好且便于观察的方法。方法实验研究。构建重组质粒pcDNA3．1／CNTF-GFP；经测序鉴定后，电穿孔法辅助转染培养的雪旺细胞；荧光显微镜下动态观察转染效果，流式细胞计数；转染24h后，用RT—PCR及免疫组化法检测基因转染及蛋白表达情况。结果重组质粒经测序鉴定无误；在3h即可见部分荧光，12h逐渐增多，24—72h到达高峰，持续至7d仍有表达；流式细胞计数得转染率为44．93％±12．92％，转染24h后，RT-PCR示目的基因有较高转录，免疫组化示有CNTF蛋白的高表达，并与GFP蛋白表达部位完全重合。结论成功构建了CNTF-GFP融合表达质粒；电穿孔法转染雪旺细胞后，表达良好，为制备转基因的种子细胞从而促进视神经再生的研究奠定了基础。
方媛莫晓芬孙兴怀郭文毅田洁孔德升马端张萌
关键词：睫状神经营养因子绿色荧光蛋白质类电穿孔
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