安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2008A085)
- 作品数：5 被引量：21H指数：2
- 相关作者：王明丽陈伟汤仁树赵俊俞海洋更多>>
- 相关机构：安徽医科大学哥伦比亚大学安徽省功能性分子固体重点实验室更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目教育部科学技术研究重点项目芜湖市科技计划重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术化学工程更多>>
- 猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定被引量：11
- 2009年
- 目的构建稳定、高效表达的重组猪α干扰素(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的蛋白,进行生物学活性检测。方法提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coliBL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价。结果重组质粒pGEX-5X-1/poIFN-α经过EcoRⅠ和XhoⅠ限制性酶切后可见501bp的目的片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致。转化入E.coliBL21中32℃条件下经IPTG诱导5h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带。效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg。结论成功克隆了poIFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α。
- 夏俊保赵俊汤仁树崔寰陈伟王明丽
- 重组人IFN-α联合顺铂对MG-63细胞凋亡及侵袭转移潜能的影响
- 2009年
- 目的研究重组人IF-α（rhIFN-α）以及联合应用顺铂对骨肉瘤细胞（MG-63）凋亡和侵袭能力的影响。方法将不同剂量rhIFN-α以及顺铂分别作用于MG-63细胞，光镜和Hoe—chesd3258染色观察细胞形态学改变，用MTT法检测MG-63细胞增殖抑制情况，采用流式细胞仪检测MG-63细胞凋亡率，用TransweH小室测定MG-63细胞侵袭力。结果光镜和Hoechest33258染色法发现，与对照组相比，10000IU／ml rhiFN-α组、单独应用顺铂组和顺铂联合应用rhIFN-d组均出现典型凋亡特征。MTT和流式细胞仪检测结果发现，与对照组相比，100iu／mlrhIFN-α组未出现明显的细胞凋亡情况（P〉0．05）；10000IU／ml rhIFN-α组细胞凋亡情况较明显，凋亡率达到32．12％±0．34％（P〈0．05）；单独应用顺铂组细胞凋亡率达到25，35％±0．46％（P〈0．05）；顺铂联合应用rhIFN-α组对细胞凋亡率最高（P〈0．05）。Transwell小室测定MG-63细胞侵袭力结果表明，与对照组相比，rhIFN-α均可显著降低MG-63细胞的体外侵袭能力（P〈0．05）。结论rhIFN-α对MG-63细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点，且不同剂量rhIFN-α均能促进MG-63细胞对顺铂的敏感性并可抑制MG-63细胞的侵袭转移。
- 丁婷婷赵俊陈敬贤尹宗生陈国富王明丽
- 关键词：干扰素骨肉瘤细胞细胞凋亡
- 肠道病毒71型六安地区分离株VP1基因的生物信息学分析及B细胞表位预测被引量：10
- 2012年
- 目的对肠道病毒71型(EV71)VP1基因编码衣壳蛋白进行系统结构与功能预测,为制备EV71疫苗和诊断抗原的研究提供理论基础。方法基于编号为1404-Luan(CHN)-08的EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白的氨基酸序列,应用ProtParam、SigalP、TMPRED、Sosui、SOPMA、Phyre、Bepipred等生物信息学方法预测其信号肽、跨膜区、疏水性、二级结构、三级结构等性质和潜在的B细胞表位。结果 EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白没有信号肽,无跨膜区,是一个亲水性蛋白;VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,含有少量的α-螺旋,少见β-转角;VP1的三级结构中4～121氨基酸部分在蛋白表面形成一环状结构(VPl GH loop);EV71 VP1潜在的B细胞表位共有6个可能的抗原表位。其中,预测分值最高的线性表位区域位于157～177位氨基酸残基。结论成功预测了EV71六安地区分离株VP1二级结构、三级结构和B细胞表位,为制备EV71基因工程疫苗和诊断抗原的开发提供了理论基础。
- 俞海洋陈伟倪德群常宏伟王林定汤仁树陈灵芝丁晓娟陈敬贤王明丽
- 关键词：肠道病毒71型VP1B细胞表位
- 两种细胞株检测重组犬α-干扰素效价的比较被引量：1
- 2009年
- 本研究采用人羊膜细胞WISH株和人喉癌上皮细胞Hep-2株,以微量细胞病变抑制法(CPE抑制法)对同批次的8组重组犬α干扰素样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所使用的标化重组人α干扰素为标准,将在两株细胞上所测结果进行比较。其检测的结果具有很好的相关性(r=0.9976,p>0.05),并且重复性较好。用结晶紫染色法评价干扰素效价能够准确地反应细胞的状态,所得结果准确、客观。表明Hep-2与WISH细胞测定结果没有差异,该方法可用于重组犬干扰素制品的效价测定。此外本研究还测定了最适试验条件如细胞浓度、接种用病毒滴度、加样方法等。
- 胡勇俞海洋刘伯玉赵俊汤仁树陈伟沈杭梅杨王明丽
- 关键词：效价HEP-2细胞
- 神经网络用于ABS树脂表面金属化研究
- 2009年
- 用金属盐和ABS树脂进行充分混合，得到有机金属的复合材料。再用NaBH4水溶液对其进行还原可得到表面金属化材料。这种材料具有较好的导电性。采用均匀设计法安排实验，分析各个因素对材料导电性能的影响作用。运用人工神经网络（ANN）对其进行系统辨识预报，ANN的计算结果与实验数据吻合。对影响其导电性的各个因素进行了研究，包括添加金属的质量，还原温度和还原时间。
- 张大华孙益民孙若琼耿济华
- 关键词：神经网络均匀设计法ABS树脂表面金属化
