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牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪瘟病毒野毒株和猪瘟病毒疫苗株多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法的建立: 为建立可同时检测牛病毒性腹泻病毒-1型(BVDV-1)、猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与CSFV野毒株的快速检测方法。根据GenBank中登录的上述3种病毒的全基因组序列,设计3对特异性多重引物,建立了同时检测...; 王伟符芳陈欣李雪松郎越坤田华彬张兴娟李曦; 关键词：猪瘟病毒野毒株猪瘟兔化弱毒疫苗株; 文献传递

猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR方法的建立被引量：4: 2011年; 为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法。试验结果表明,本方法最低可检测到的Shimen病毒cDNA含量为100拷贝/μL,敏感度至少是普通PCR的100倍;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、牛流行腹泻病毒Ⅰ型(BVDV-1)和猪瘟病毒C株均无特异性扩增,证明本方法具有很强的特异性;通过批内和批间重复试验,其变异系数<0.7%,结果显示本方法具有很好的重复性。本研究建立了猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法,为猪瘟的预防与控制提供了有效的技术手段,并为猪瘟强毒试剂盒的研发奠定了基础。; 王伟邹月红李雪松陈欣郎越坤田华斌符芳李曦李集临; 关键词：猪瘟病毒

猪生殖与呼吸综合征病毒的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR检测被引量：3: 2008年; 根据猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白基因核酸序列设计引物,经BLAST比较发现,该引物既可以扩增较早发现的PRRSV毒株,也可以扩增近期发现的在Nsp2基因上有较大变异的PRRSV毒株,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为标准品建立了检测PRRSV的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR方法。结果表明,该方法标准曲线的相关系数大于0.99,敏感性可以达到1×101拷贝/μL,约为普通PCR的100倍;用该方法检测人工感染PRRSV的猪全血,结果阳性检出率为100%。敏感性、特异性和稳定性试验表明,该方法具有很高的敏感性、特异性和稳定性,可以用来快速检测PRRSV。; 王小武符芳许红喜周艳君童光志李曦; 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 SYBR 荧光定量PCR

PRRSV高致病性毒株和经典毒株SYBR GreenⅠ实时荧光PCR鉴别方法的建立被引量：11: 2009年; 根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性。应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、142、1 d分别采集全血,检测结果均为阳性。证实,本试验所建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株。; 柴政李曦王小武符芳张永欣肖晶蔡雪辉周艳君宋淑萍; 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 SYBR

PRRSV和PCV-2以及PRV多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立被引量：23: 2008年; 根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法。敏感性试验结果显示,PRRSV、PCV-2的敏感性可达250拷贝/μL,PRV的敏感性可达500拷贝/μL。表明,该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性,可以用于PRRSV、PCV-2和PRV的快速检测。; 王小武符芳柴政孔令达蔡雪辉宋淑萍许红喜李曦; 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒

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