国家自然科学基金(30270067)
- 作品数：7 被引量：67H指数：5
- 相关作者：钱渊陈冬梅张又邓莉贾立平更多>>
- 相关机构：首都儿科研究所首都儿科研究所附属儿童医院北京大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 北京地区不同基因型Noro病毒的主要衣壳蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的对北京地区的不同基因型Noro病毒的主要衣壳蛋白（VP1）进行表达，得到Noro病毒抗原，为对Noro病毒做进一步的深入研究打下基础。方法用PCR分别从先前研究得到的含北京Noro病毒主要衣壳蛋白VP1编码基因的重组质粒pBST-CR2987（GⅡ-3）及pBST-CR2932（GⅡ4）中扩增得到VP1全基因，然后将目的基因亚克隆到表达载体pET-30a（＋）中，得到重组质粒，转化BL21（DE3）感受态细胞，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的表达和抗原性，并对表达产物进行了纯化。结果（1）双酶切和测序证明得到了VP1的重组表达载体。CR2987 VP1基因全长1647 bp，含编码549个氨基酸的单一的开放读码框架（ORF）；CR2932 VP1基因全长1623 bp，含编码541个氨基酸的单一的ORF。（2）重组表达的VP1主要以包涵体的形式存在，在诱导后4—6h表达量最高。（3）重组表达的VP1能够被豚鼠抗Noro病毒VP1的特异性免疫血清及鼠抗His标签的抗体所识别。（4）纯化后的蛋白能够为人血清所识别。结论GⅡ-3型及GⅡ-4型Noro病毒北京地方株的VP1在原核体系中获得表达，表达的VP1可以被特异性免疫血清及人血清所识别，说明其具有抗原活性。
- 贾立平钱渊陈冬梅张又
- 关键词：原核表达抗原性
- 北京地区79例婴幼儿诺如病毒腹泻的临床特点分析被引量：8
- 2007年
- 目的分析婴幼儿诺如病毒腹泻的发病特点,为临床诊断提供依据。方法对2002年1月至2006年12月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊的318例急性腹泻患儿采集粪便标本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测粪便诺如病毒抗原,同时用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测轮状病毒。结果经检测的318份粪便标本中,诺如病毒阳性标本共79份,阳性检出率为24.8%(79/318)。其中有48例在10-12月份检出,占阳性标本的60.8%(48/79)。2岁以内患儿占91.2%。有16例同时合并轮状病毒感染。经统计学分析,轮状病毒混合感染组与单纯诺如病毒感染组在发热的严重程度上有差异,但是在腹泻严重程度上的差异无统计学意义。诺如病毒阳性患儿中有14例是以其他疾病住院,分别于住院1-11d出现腹泻。结论诺如病毒是引起婴幼儿急性腹泻的病原之一,也是医院内感染性腹泻的病因之一。
- 邓莉贾立英陈冬梅张又钱渊
- 关键词：诺如病毒轮状病毒婴幼儿急性腹泻
- 北京市某些医院内腹泻暴发与诺如病毒的相关性研究被引量：18
- 2007年
- 目的确定2006年11～12月北京市某些医院内发生的住院患者腹泻爆发性流行的病原及其分子生物学特点。方法首先检测腹泻标本中轮状病毒抗原并用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行轮状病毒核酸检测，然后用塑转录-聚合酶链反应进行诺如病毒核酸检测，对检测阳性标本进行诺如病毒VP1全基因的扩增；并对其中一例进行全基因克隆、测序和分析。另外对来自不同医院的2份阳性标本中的VP1的5＇端部分序列进行测序分析。结果30份腹泻患者粪便标本中共有17份检测为诺如病毒阳性，总阳性率为56．7％，每一家医院送检标本的阳性率都在42．9％以上。对其中一份标本的诺如病毒VP1全基因序列测定和分析显示为GⅡ-4型诺如病毒。另2份标本中的部分序列测定显示与全基因序列高度保守，只有1个核苷酸的差异，因此也提示为GⅡ-4型诺如病毒。结论诺如病毒是北京地区医院内腹泻暴发的重要病原，此次暴发极可能是由GⅡ-4型诺如病毒引起。
- 贾立平钱渊张又陈冬梅高燕徐潜
- 关键词：诺如病毒医院内感染逆转录-聚合酶链反应
- 医院内诺如病毒感染的三种病原学检测方法应用比较被引量：9
- 2007年
- 目的找到一种简便易行的检测感染性腹泻粪便标本中诺如病毒的方法。方法用两种酶免疫吸附试剂盒检测北京地区婴幼儿腹泻和综合医院内成人感染性腹泻粪便标本中的诺如病毒，并用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）作对照，评价这两种试剂盒。用两种试剂盒分别检测69份儿科病房标本和来自3家综合医院15份成人医院内感染性腹泻的粪便标本中诺如病毒；其中5份儿科病房和15份成人病房的粪便标本还同时进行了RT-PCR检测。结果84份粪便标本中，试剂盒甲的诺如病毒检出率为20．2％（17／84），试剂盒乙的诺如病毒检出率为36．9％（31／84）；两种试剂盒的符合率为73．8％（62／84），但试剂盒乙的检出率显著高于试剂盒甲（P〈0．01）。在应用了RT-PCR检测的20份标本中，阳性率为55．0％（11／20）。试剂盒甲与RT-PCR检测结果相比，检出率明显低于RT-PCR（P〈0．05），试剂盒乙与RT-PCR检测结果相比，检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。3家综合医院的成人标本中，每家医院都有2份或2份以上送检标本诺如病毒检测阳性，结合临床诊断可判定为诺如病毒医院内感染暴发。结论酶免疫吸附方法检测诺如病毒感染简便易行、利于推广，试剂盒乙可以替代RT-PCR方法应用于临床。3家综合医院都存在诺如病毒医院内感染的暴发。
- 陈冬梅贾立平张又钱渊邓莉贾莉英高燕
- 关键词：诺如病毒医院内感染
- 酶免疫吸附法检测北京地区婴幼儿腹泻标本中的Noro病毒被引量：13
- 2006年
- 目的用酶免疫吸附试验(EIA)法检测北京地区婴幼儿腹泻标本中的Noro病毒,试图找到一种简便易行的检测方法,以期应用于临床检测。方法2003年10月至2004年12月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊的腹泻患儿粪便标本中抽取167份应用EIA进行Noro病毒抗原检测,其中有61份同时进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测轮状病毒。结果167份粪便标本中,Noro病毒阳性46份,阳性率为27.5%。其中,GⅠ型阳性标本20份,占阳性标本总数的43.5%(20/46);GⅡ型阳性标本19份,占阳性标本总数的41.3%(19/46);另有7份标本为GⅠ和GⅡ型同时阳性,提示为混合感染,占阳性标本总数的15.2%(7/46)。发病年龄以2岁以下患儿为主,占总感染人数的93.5%(43/46)。本组Noro病毒感染性腹泻未见明显的季节性规律。在检测轮状病毒的61份标本中,轮状病毒阳性29份,阳性率为47.5%。在29份轮状病毒阳性标本中,11份(11/61,18.0%)标本检出Noro病毒阳性,提示存在Noro病毒和轮状病毒的混合感染。结论Noro病毒感染在北京地区婴幼儿腹泻中占有重要地位,仅次于轮状病毒。EIA检测Noro病毒简便易行、利于推广。
- 陈冬梅张又邓莉贾莉英钱渊
- 关键词：非细菌性腹泻轮状病毒婴幼儿腹泻酶免疫吸附法
- 北京地区Noro病毒主要衣壳蛋白编码基因的序列分析被引量：4
- 2007年
- 目的 确定从北京地区婴幼儿腹泻标本中检测到的3株Noro病毒的基因型别及主要衣壳蛋白（VP1）编码基因的特点。方法 从经酶免疫分析法筛选到的Noro病毒阳性的粪便标本中应用RT-PCR方法扩增Noro病毒VP1全基因，克隆到pBS-T载体中并测定核苷酸序列，与GenBank中的其他Noro病毒VP1基因序列进行比较和分析。结果 经过扩增和测序，标本CR2905、CR2932和CR2987的VP1基因全长分别为1620bp、1623bp和1647bp，编码不同大小的蛋白。CR2905和CR2932与GⅡ-4型的氨基酸同源性在80％以上，属于Noro病毒GⅡ基因组（Genogroup）的GⅡ-4型（Geno．type）；CR2987与GⅡ-3型的氨基酸同源性在80％以上，属于Noro病毒GⅡ基因组的GⅡ-3型。CR2905、CR2932与其他GⅡ-4型的变异性在9．1％至12．5％之间，提示为新的变异株。结论 北京地区婴幼儿中存在不同基因型别的Noro病毒的感染，根据基因的同源性分析，CR2905、CR2932可能为GⅡ-4型的新的变异株。
- 贾立平钱渊张又陈冬梅赵林清朱汝南
- 关键词：VP1基因
- 北京地区婴幼儿诺如病毒与轮状病毒所致腹泻的临床比较分析被引量：20
- 2009年
- 目的在病原学检测的基础上分析、比较婴幼儿诺如病毒腹泻与轮状病毒腹泻的临床特点。方法对2002年1月至2006年12月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊的779例急性腹泻患儿收集粪便标本，用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）方法检测轮状病毒基因，同时用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其中318份标本检测诺如病毒抗原。结果779份标本检出轮状病毒阳性263例，阳性检出率为33．8％；318份标本巾诺如病毒阳性79例，阳性检出率为24．8％；其中16例为轮状病毒和诺如病毒混合感染。诺如病毒组在发热程度上与轮状病毒组差异有统计学意义，其他临床表现如发病年龄、日平均腹泻次数、疾病病程等均相似，而混合感染组与其他两组临床表现的差异均无统计学意义；但流行季节有所不同，轮状病毒腹泻更集中于寒冷季节，始于10月，直至次年4月，而于10月至次年1月的检出阳性率最高；诺如病毒的检出没有明显的季节性，一年四季均可检出，但是冬季的检出率略高于其他季节。结论轮状病毒仍是秋冬季婴幼儿急性腹泻的主要病原，诺如病毒也是引起婴幼儿急性腹泻的重要病原之一，两者也是引起院内急性病毒性腹泻的主要病原，但两者的临床表现没有差异。
- 邓莉贾立英钱渊陈冬梅张又张艳玲
- 关键词：诺如病毒轮状病毒婴幼儿急性腹泻
