国家自然科学基金(30171103)
- 作品数：21 被引量：94H指数：8
- 相关作者：吴梧桐李谦叶波平吕正兵王颖更多>>
- 相关机构：中国药科大学《药物生物技术》编辑部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用被引量：18
- 2004年
- 目的 :探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT PCR中的应用。方法 :提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA ,逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板进行PCR扩增 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系。结果 :PCR扩增反应在第 2 0～ 2 5个循环 ,起始模板量为 0 8～ 2 4 μg时 ,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系。 结论 :通过控制起始模板量 ,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术 。
- 边杉王颖于涛丁选胜吴梧桐叶波平奚涛
- 关键词：聚丙烯酰胺凝胶电泳半定量RT-PCR
- 鲨肝活性肽S-8300免疫调节作用的研究被引量：4
- 2005年
- 目的 :研究鲨肝活性肽S-830 0对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。方法 :观察鲨肝活性肽S-830 0对环磷酰胺致免疫抑制小鼠血清溶血素、溶血空斑形成及血清IL-2含量的影响。结果 :鲨肝活性肽S-830 0可显著促进免疫抑制小鼠溶血素、溶血空斑形成及血清IL-2水平增高。结论 :鲨肝活性肽S-830
- 黄凤杰吴梧桐
- 关键词：免疫调节溶血素溶血空斑IL-2环磷酰胺动物药
- 源于鲨鱼肝的一种新基因的克隆表达及其对肝肿瘤细胞的抑制作用(英文)
- 2009年
- 目的:从鲨鱼肝脏中克隆表达一种新基因psl12,纯化该基因的表达产物,研究其对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法与结果:我们前面已报道发现了鲨肝细胞再生刺激因子(sHRSF),根据sHRSF的N端氨基酸序列设计了引物,并利用RT-PCR方法从鲨鱼再生肝组织的总RNA中扩增到大小约为350bp的cDNA片段,序列分析表明350bp的片段含有一个开放阅读框(ORF),含有333个碱基,编码111个氨基酸残基,其编码的N端氨基酸序列与天然sHRSF的前7个氨基酸一致。该肽被命名为PSL12(来源于鲨肝的分子量约为12kD的肽)。该cDNA被连接到质粒pGEM-T-Easy,获得重组质粒pGEM-T-psl12。根据cDNA序列分析和质粒pET-32a的多克隆位点(BamHⅠ和SalⅠ)的序列,设计并合成了psl12基因的特异性引物,质粒pGEM-T-psl12作为模板,进行了PCR扩增。将此PCR产物插入pET-32a得到表达质粒pET-32a-psl12,并将它转化入E.coli的BL21菌株。经IPTG诱导,带有组氨酸标签的融合蛋白的表达量约为40%。用金属螯合层析纯化融合蛋白后,再用FXa切割融合蛋白,经Resource Q和Mono Q柱层析得到PSL12纯品,它可抑制肝肿瘤细胞株SMMC-7721和HepG2的增殖。结论:从鲨鱼肝脏中获得了一种新基因psl12。该基因的表达产物PSL12能显著抑制体外培养的肝肿瘤细胞的增殖。
- 欧瑜廖高勇吴梧桐
- 关键词：克隆表达
- 鲨肝活性肽对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用被引量：14
- 2004年
- 目的 探讨鲨肝活性肽 (sHSS)对对乙酰氨基酚 (AAP)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 用AAP( 2 0 0mg·kg- 1 ,ip)诱导小鼠急性肝损伤 ,用改良赖氏法测血清ALT和AST ,通过光镜和电镜观察肝细胞显微和亚显微结构的变化 ,用流式细胞仪分析肝细胞凋亡 ,同时用RT PCR方法分析FasmRNA表达水平。结果 sHSS 3 0和 1 5mg·kg- 1 可显著降低肝损伤小鼠血清ALT和AST的水平 ;改善模型鼠肝组织细胞坏死及炎症反应 ;高剂量sHSS( 3mg·kg- 1 )对肝线粒体具有保护作用 ,下调FasmRNA的表达水平 ,并具有抗凋亡作用。结论 sHSS对AAP诱导的肝损伤具有明显的保护作用 ,其机制可能与保护肝线粒体、抑制Fas基因表达及肝细胞凋亡有关。
- 吕正兵李谦叶波平边杉王颖阮期平吴梧桐
- 关键词：对乙酰氨基酚小鼠急性肝损伤肝细胞凋亡
- 一种鲨肝再生因子类似物的克隆表达及纯化被引量：1
- 2006年
- 获得可溶性表达的鲨肝再生因子类似物，初步研究性质与活性。构建含有鲨肝再生因子类似物片段的原核表达载体pET32a-S；转化BL21，IPTG诱导表达融合蛋白，表达产物经过分离纯化-FXa酶切-分离纯化，得到鲨肝再生因子类似物；利用MTT比色法研究该重组产物对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖活性。结果 原核表达的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶的形式存在，表达量为40％，分子质量为30ku，去除融合子后的鲨肝再生因子类似物分子质量为12ku，PI=4．7。活性研究显示在6．25-50μg／ml浓度范围内，类似物与天然产物均有相似的刺激SMMC-7721细胞株增殖的活性，但是在高浓度下却表现出了抑制活性。
- 李丽欧瑜吴梧桐
- 关键词：可溶性表达
- 鲨肝刺激物质类似物基因在大肠杆菌中的表达与产物活性分析被引量：5
- 2004年
- 构建了鲨肝刺激物质类似物基因片段的原核表达载体质粒 (pET-sHSS) ,转化大肠杆菌后通过IPTG诱导获得原核表达产物 ,并利用凝胶层析方法对表达产物进行了分离纯化 ;进一步利用MTT比色法研究了该重组产物对肝癌细胞株SMMC -7721的增殖影响。结果表明 ,在1mmol/L的IPTG的诱导下 ,鲨肝刺激物质类似物基因片段在大肠杆菌BL21菌株中获得表达 ,表达产物的相对分子质量大小约为17500u,占菌体可溶性蛋白总量的38%左右 ;纯化后的产物在低浓度下 (<50ng/L)具有明显刺激SMMC7721细胞株增殖的活性 ,高浓度下 (>100ng/L)则明显抑制该肿瘤细胞株的生长 。
- 王颖边杉张婷婷赵艳景吴梧桐叶波平王旻
- 关键词：原核表达CDNA克隆生物活性
- 一种新的鲨鱼肝刺激多肽(sHSP)刺激肝细胞增殖和保护受损β细胞作用(英文)被引量：3
- 2007年
- 目的:从鲨鱼肝脏中分离纯化得到了一种鲨鱼肝刺激多肽(sHSP)。方法:将天然健康的条纹斑竹鲨鱼肝脏经过粗提,超滤,柱层析得到sHSP。通过采用MTT法,利用人肝癌SMMC-7721细胞和STZ损伤的小鼠胰岛β细胞瘤细胞来检测其生物活性。结果:通过MALDI-TOF-MS检测,sHSP的分子量为4 899 .715 Da ,其紫外特征吸收波长为273.1 nm。通过MTT法检测sHSP的刺激肝细胞再生的生物活性,结果显示,sHSP剂量为100μg.mL-1时,刺激指数为3.85 ,并且具有热稳定性和耐酸碱性。对STZ损伤的NIT-1β细胞,sHSP具有保护细胞完整性和修复细胞形态的作用。结论:我们从鲨鱼肝脏中分离纯化得到了一种能够显著刺激人肝癌细胞SMMC-7721再生,并且可以部分对抗STZ导致的NIT-1β细胞毒性损伤的活性肽。
- 宋丽娜黄晓东雷红李谦欧瑜黄凤杰吴梧桐
- 关键词：纯化MTT法
- 鲨鱼肝再生因子对大鼠酒精性肝损伤的保护作用被引量：3
- 2008年
- 为探索鲨鱼肝再生因子(sHRF)对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用,采用白酒灌胃法建立大鼠酒精性肝病模型,给药5周后取血清及肝组织测定各项肝指标,结果表明sHRF能显著降低酒精所致的大鼠血清ALT、AST的异常升高,也能抑制酒精损伤后大鼠肝组织中甘油三酯含量的升高,此外,sHRF能在一定程度上增加白蛋白含量,但对总蛋白含量无明显影响,sHRF给药治疗组还可明显提高SOD活性,降低MDA含量,提高大鼠清除体内氧自由基能力,减少过氧化脂质对组织器官的损伤,组织切片发现各给药组肝脏总体病变程度较模型组轻,说明sHRF对大鼠慢性酒精性肝损伤有一定的防护作用。
- 李谦袁述马迅任焕杨磊吴梧桐
- 关键词：酒精性肝损伤肝保护作用
- 系统生物学与药物发现研究被引量：4
- 2006年
- 系统生物学是假说驱动的科学,是21世纪医学与生物学的核心驱动力。近代药物发现研究主要基于药物新靶点的发现,但是在疾病生物学模型中,化合物的有效性与安全性并不全决定于靶点的选择,系统生物学为药物发现提供了一个全新的研究模式,能明显降低新药研究开发的时间与费用。
- 吴梧桐
- 关键词：系统生物学药物发现
- 口服鲨鱼肝再生因子脂质体对小鼠急性肝损伤的保护作用被引量：3
- 2007年
- 为研究口服鲨鱼肝再生因子脂质体对四氯化碳(CCl4)和硫代乙酰胺(TAA)对小鼠急性肝损伤的保护作用,采用CCl4和TAA致小鼠肝损伤,观察肝组织切片,测定生化指标,检测小鼠给药后血清谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)活力。结果口服鲨鱼肝再生因子脂质体能明显减轻CCl4和TAA所致小鼠急性肝损伤模型的肝组织损伤作用,降低ALT、AST活力。因此口服鲨鱼肝再生因子脂质体对急性肝损伤也有明显的保护作用。
- 李谦叶波平戎晶晶庞太宇马迅吴梧桐
- 关键词：脂质体四氯化碳硫代乙酰胺口服给药
