国家自然科学基金(81170656)
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 相关作者：陈晓岚范亚平曹英杰徐玉音马雯更多>>
- 相关机构：南通大学南通市第一人民医院更多>>
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- 小鼠肾小球系膜细胞的分离、原代培养及鉴定被引量：7
- 2013年
- 目的建立小鼠系膜细胞(MC)的分离、培养及鉴定的方法。方法采用分样筛法分离出肾小球、通过优生选择法进行系膜细胞原代培养。相差显微镜、HE染色、扫描电镜、透射电镜观察小鼠系膜细胞的结构,免疫荧光细胞化学技术鉴定原代系膜细胞,血管紧张素Ⅱ刺激MC观察生物学特性。CCK-8法确定细胞生长曲线。结果原代培养的肾小球经20～30 d系膜细胞逐渐铺满皿底。传代后MC一般6～10 h贴壁,第2～3天进入指数增殖期,第3～5天进入平台期。α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体免疫荧光染色阳性,nephrin抗体间接免疫荧光阴性。血管紧张素Ⅱ刺激15 min后,系膜细胞明显收缩。结论成功建立了小鼠系膜细胞的分离、培养及鉴定的方法体系。
- 曹英杰郭乃凤吕莹施辉陈晓岚
- 关键词：系膜细胞原代培养细胞鉴定
- 前列腺素E2受体1亚型激活P38MAPK通路介导阿霉素诱导的足细胞损伤
- 目的探讨前列腺素E2受体1亚型(EP1)对阿霉素(ADR)诱导的肾小球足细胞的影响及可能机制。方法体内实验1.动物分组:(1)对照组;(2)ADR组;(3)EP1激动剂17-phenyl PGE2+ADR组;(4)EP1...
- 朱雪玲
- 关键词：足细胞P38MAPK
- 文献传递
- EP1受体通过激活p38 MAPK通路介导阿霉素诱导的足细胞损伤被引量：3
- 2018年
- 目的探讨前列腺素E2受体1亚型（EP1）在阿霉素（ADR）诱导的足细胞损伤中的作用及其可能机制。方法（1）动物实验：6-8周龄雄性Balb／c小鼠被随机分为4组：对照组；ADR组；EP1激动剂（17-phenyl PGE2）＋ADR组；EP1拮抗剂（SC-19220）＋ADR组。尾静脉注射ADR（10mg／kg）构建小鼠肾病综合征模型，分别给予EP1激动剂（1μg-g）和拮抗剂（25μg/g）。检测小鼠尿蛋白量、血生化、肾脏病理改变、电镜下足细胞改变以及足细胞相关蛋白的表达变化。（2）细胞实验：体外培养足细胞，分为4组：对照组；ADR组；EP1激动剂＋ADR组；EP1拮抗剂＋ADR组。CCK-8法检测足细胞增殖情况；ELISA法检测足细胞前列腺素E2（PGE2）含量；间接免疫荧光法检测足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP在足细胞中的定位；实时定量PCR法及Western印迹法检测足细胞相关蛋白mRNA及蛋白的表达；Western印迹法检测p38MAPK活性变化；流式细胞术检测细胞凋亡。结果（1）动物实验结果：与对照组相比，ADR组小鼠出现明显蛋白尿、血生化及肾脏病理改变；与ADR组相比，EP1激动剂＋ADR组尿蛋白量增多、血生化异常及肾脏病理改变加重，拮抗剂＋ADR组上述改变减轻。免疫组化结果显示，ADR组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达与对照组相比显著降低，EP1激动剂可进一步抑制其表达，拮抗剂干预后上述改变得到改善（均P〈0．05）。电镜下观察ADR组足细胞足突增宽、融合，激动剂组足细胞损伤进一步加重，拮抗剂干预后足细胞损伤减轻。（2）细胞实验结果：与对照组相比，ADR组足细胞中PGE2含量、环氧合酶2（COX2）mRNA及蛋白表达增加，nephrin、podocin、CD2APmRNA及蛋白表达下降，p3gMAPK活性增加，足细胞凋亡显著增多（均P〈0．05）。EP1激动剂干预后上述改变加重（均P〈0．05）；拈抗剂可下渊PGE2及COX2mRNA及�
- 朱雪玲曹英杰曹英杰刘静杨璐璐陈晓岚
- 关键词：足细胞地诺前列酮阿霉素P38
- AT1受体自身抗体调控肾组织内质网应激在糖尿病肾病发病中的机制研究被引量：6
- 2019年
- 目的研究AT1受体自身抗体(AT1-AA)调控肾组织内质网应激诱导大鼠糖尿病肾病的机制。方法构建糖尿病肾病模型大鼠为实验组,以正常大鼠为阳性对照组,以正常大鼠静脉注射AT1-AA作为AT1-AA处理组。使用ELISA法检测大鼠血清中AT1-AA表达变化;进一步使用HE染色法观察3组大鼠肾组织变化;使用Western blot检测各组大鼠肾组织葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达水平。结果实验组大鼠血清中空腹血糖(FBG)、肾脏肥大指数(KHI)、转化生长因子β1(TGF-β1)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达水平均高于正常大鼠(P<0.01),糖尿病肾病大鼠造模成功。与阳性对照组相比,实验组大鼠血清FBG、KHI、TGF-β1、IGF-1表达增加(P<0.01)。实验组和AT1-AA处理组肾组织中GRP78、CHOP蛋白表达水平均高于阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论糖尿病个体中AT1-AA通过调节GRP78、CHOP信号通路,增加肾组织内质网应激,从而诱导糖尿病肾病的发生、发展。
- 郭乃凤陈晓岚曹英杰袁莉范亚平
- 关键词：糖尿病肾病内质网应激
- 前列腺素E2受体1亚型拮抗剂通过抑制ERK通路减轻转化生长因子β1诱导的小鼠系膜细胞损伤被引量：1
- 2014年
- 目的探讨前列腺素E2（PGE2）受体1亚型（EP1）拮抗剂（SC-19220）对转化生长因子（TGF）B1诱导的小鼠肾小球系膜细胞增殖、前列腺素合酶表达、细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响及可能机制。方法小鼠肾小球系膜细胞分组：对照组；TGF-β1（10μg/L）组；药物干预组：不同浓度（0．1、0．5、1.0μmol／L）SC-19220＋TGF-β1（10μg／L）组。CCK-8法检测细胞增殖；ELISA法检测细胞上清中PGE2的表达；实时荧光定量PCR法检测细胞结缔组织生长因子（CTGF）、层粘连蛋白（LN）、环氧化酶2（COX2）、膜结合型前列腺素E2合酶1（mPGESl）mRNA的表达。Western印迹法检测CTGF、LN、COX2、mPGESl及ERKl／2活性变化。结果与对照组比，TGF．131组系膜细胞增殖增加（P＜0．05），PGE：表达增加（P＜0．05），CTGF、LN、COX2、mPGESlmRNA及蛋白表达增加（P＜0．05），ERKl／2活性增加（P＜0．05）。SC-19220干预后呈剂量依赖性抑制系膜细胞增殖（P＜O．05），下调PGE2的表达（P＜0．05），抑制CTGF、LN、COX2、mPGESlmRNA及蛋白表达（P＜0．05），抑制ERKl／2活性（P＜0．05）。结论SC-19220可能通过抑制ERKl／2活性，反馈抑制COX2、mPGESl及PGE2的表达，从而下调CTGF、LN的表达，减轻TGF-131诱导的系膜细胞损伤。
- 仇芝陈晓岚徐玉音潘天昳马雯范亚平
- 关键词：受体转化生长因子Β1系膜细胞拮抗剂细胞外信号
- 维持性血液透析患者成纤维细胞生长因子-23的表达及其与感染发生率的关系
- 2019年
- 目的探讨维持性血液透析患者血清中成纤维细胞生长因子-23(FGF-23)水平与感染发生率的关系。方法选取行维持性血液透析治疗12个月以上、病例资料完整的患者60例,根据血清FGF-23的水平从低到高将患者分为A、B、C 3组。A组:FGF-23水平为50~150 ng/L(n=19);B组:FGF-23水平为151~300 ng/L(n=23);C组:FGF-23水平为301~450 ng/L(n=18)。另选取18例(D组)患者,在维持性血液透析基础上每月行2次血液滤过治疗。抽取患者2年观察期内首次血液透析治疗前及末次治疗后静脉血液标本,分别检测血清25-羟维生素D、FGF-23和抗菌肽LL-37水平。记录各组患者在2年内因感染第1次住院治疗的发生率。结果定期加行血液滤过的患者血清FGF-23水平低于常规血液透析患者(P<0.05)。感染发生率与FGF-23水平呈正相关,与25-羟维生素D、LL-37的水平呈负相关。结论血液FGF-23的升高增加了血液透析患者的感染发生率,其机制可能与下调25-羟维生素D、LL-37的水平有关。血液滤过有助于FGF-23的清除。
- 曹英杰陈晓岚范亚平施辉
- 关键词：成纤维细胞生长因子-23感染率25-羟维生素D抗菌肽血液滤过
- 前列腺素E2受体激动剂对转化生长因子β1诱导的小鼠系膜细胞损伤的保护作用被引量：4
- 2013年
- 目的探讨前列腺素E2受体2亚型（EP2）激动剂（Butaprost）对转化生长因子B1（TGF—B1）诱导的小鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞周期、细胞外基质的影响及可能机制。方法实验分组：（1）对照组；（2）TGF-β1（10rig／m1）组；（3）～（5）Butaprost干预组：不同浓度Butaprost（10、1、0．1μmol／L）＋TGF-β1。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术测定细胞周期；ELISA法检测细胞上清中环磷酸腺苷（cAMP）及前列腺激素E2（PGE2）的水平；实时定量PCR法检测细胞层黏连蛋白（LN）、纤连蛋白（FN）、结缔组织生长因子（CTGF）、环氧化酶1、2（COX1、COX2）、周期素激酶抑制剂p27KiplmRNA的表达。Western印迹法检测LN、FN、CTGF、COX2、p27Kipl蛋白及p38丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）活性变化。结果与对照组相比，TGF—B1组系膜细胞增殖及c2＋s期细胞比例明显增加；cAMP、PGE2表达增加；p27KiplmRNA及蛋白表达降低；FN、LN、CTGF、COX2mRNA及蛋白表达升高；p38MAPK活性增加（均P〈0．05）。Butaprost干预后呈剂量依赖性抑制系膜细胞增殖，下调G2＋S期细胞比例，上调cAMP及p27KiplmRNA及蛋白的表达，抑制FN、LN、CTGF、COX2mRNA及蛋白表达及上清中PGE2的表达，抑制p38MAPK活性（均P〈0．05）。结论Butaprost可能通过增加cAMP的表达，抑制p38MAPK活性，反馈抑制COX2及PGE2的表达，从而下调FN、LN、CTGF的表达，减轻TGF-β1导致的系膜细胞损伤。
- 奚培培徐玉音黄新忠陈晓岚范亚平李娜娜潘天昳徐小林
- 关键词：系膜细胞转化生长因子Β1P38CAMP
- 前列腺素E2受体3亚型siRNA通过抑制MAPK信号通路减轻TGF-β1诱导的小鼠系膜细胞损伤被引量：1
- 2015年
- 目的探讨前列腺素E2（PGE2）受体3亚型（EP3）对转化生长因子-B1（TGF—β1）诱导的小鼠肾小球系膜细胞的损伤及可能机制。方法体外培养原代野生型系膜细胞，采用脂质体Lipofectamine^TM 2000化学合成法将siRNA转染至系膜细胞中沉默EP3受体，筛选干扰效率最大的EP3-siRNA片段。实验分组：（1）正常对照组；（2）TGF-β1（10μg/L）组；（3）NC-siRNA＋TGF-β1（10μg／L）组；（4）EP3-siRNA组；（5）EP3-siRNA＋TGF—β1（10μg/L）组。CCK-8法检测TGF—β1对细胞增殖的影响；ELISA法检测细胞PGE2和cAMP的表达；实时荧光定量PCR法检测纤维连接蛋白（FN）、结缔组织生长因子（CTGF）、环氧化酶2（COX2）、膜结合型前列腺素E2合酶1（mPGES1）mRNA的表达；Western印迹检测FN、CTGF、COX2、mPGES1蛋白表达及ERK1／2、p38MAPK活性的变化。结果与正常对照组相比，TGF-β1组系膜细胞增殖明显增加（P〈0．05），PGE2和cAMP表达增加（均P〈0．05），FN、CTGF、COX2、mPGES1的mRNA和蛋白的表达均上调（均P〈0．05）；与TGF—β1组相比，EP3-siRNA＋TGF-β1组系膜细胞增殖减少（P〈0．05），FN、CTGF、COX2、mPGES1的mRNA和蛋白的表达均下调（均P〈0．05）。与正常组比较，TGF-β1组ERK1／2、p38MAPK磷酸化水平明显增强（均P〈0．05）；而EP3-siRNA＋TGF—β1组的ERK1／2、p38MAPK磷酸化水平较TGF—β1组明显下调（均P〈0．05）。结论EP3-siRNA可能通过增加cAMP的产生，抑制ERK1／2、p38MAPK磷酸化，反馈抑制COX2及PGE2，从而下调FN、CTGF的表达，减轻TGF-β1诱导的小鼠系膜细胞损伤。
- 马雯陈晓岚徐玉音陆飞范亚平
- 关键词：受体小分子干扰肾小球系膜细胞MAP激酶信号系统
- 前列腺素E2受体1亚型在转化生长因子β1诱导小鼠系膜细胞损伤中的作用机制被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨前列腺素E2受体1亚型(EP1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖、细胞外基质的影响及可能机制。方法:体外原代培养MCs。采用脂质体Lipofectamine TM 2000化学合成法将siRNA转染至MCs中沉默EP1受体,筛选干扰效率最大的EP1-siRNA片段。实验分组:(1)正常对照组;(2)TGF-β1(10 ng/ml)组;(3)NC-siRNA+TGF-β1(10 ng/ml)组;(4)EP1-siRNA+TGF-β1(10 ng/ml)组;(5)EP1-siRNA组。ELISA法检测各组细胞上清中前列腺素E2(PGE2)的表达,实时荧光定量PCR方法检测各组细胞纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、环氧化酶2(COX2)、膜结合型前列腺素E2合酶1(m PGES-1)mRNA的表达。Western blot法检测FN、CTGF、COX2、m PGES-1蛋白及p38MAPK、ERK活性的变化。结果:与正常对照组相比,TGF-β1组FN、CTGF、COX2、m PGES-1的mRNA和蛋白的表达上调(P<0.05);与TGF-β1组相比,EP1-siRNA+TGF-β1组FN、CTGF、COX2、m PGES-1的mRNA和蛋白的表达下调(P<0.05);TGF-β1刺激后,p38MAPK、ERK磷酸化水平明显增强(P<0.05),EP1-siRNA+TGF-β1组,p38MAPK、ERK磷酸化水平较对照组明显下调(P<0.05)。结论:EP1-siRNA可能通过抑制ERK和p38MAPK磷酸化减轻TGF-β1诱导的小鼠系膜细胞损伤。
- 马雯徐玉音仇芝范亚平陈晓岚
- 关键词：SIRNA转化生长因子Β1系膜细胞信号通路
