广东省科技计划工业攻关项目(2006B20301028)
- 作品数：4 被引量：26H指数：3
- 相关作者：石存斌吴淑勤王英英曾伟伟李莹莹更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所大连水产学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 锦鲤疱疹病毒(KHV)保存方法的筛选与比较
- 探讨合适的锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus KHV)保存方法，促进KHV流行病学调查与防控以及疫苗开发等相关工作的开展.方法 比较了5 种不同保存条件对锦鲤疱疹病毒的影响，包括1)：-80℃超低温保存； 2)...
- 李莹莹郑树城曾伟伟王英英潘厚军刘春石存斌吴淑勤王庆
- DNA不同提取方法对养殖池塘底泥细菌多样性PCR-DGGE检测的影响被引量：8
- 2009年
- 应用PCR-DGGE技术研究了养殖池塘底泥中细菌DNA 5种提取方法对细菌多样性检测的影响。结果显示:(1)DNA粗提液中腐殖酸与蛋白的纯度无正相关;(2)5种方法提取的DNA粗提液经过纯化后进行PCR均取得良好结果;(3)采用复合破壁方法提取养殖池塘底泥细菌DNA有利于显示细菌多样性;(4)DNA提取方法是影响池塘底泥细菌多样性PCR-DGGE结果的关键因素,与DNA的产量、纯度关系甚微;(5)5种方法相似性高达0.79,在对养殖池塘底泥细菌多样性进行粗略分析时均可使用;(6)本试验中,基于改进的Martin-Laurent法是用于养殖池塘底泥细菌多样性PCR-DGGE研究的较好的总DNA提取方法。
- 王宇林文辉王亚军毕晔石存斌吴淑勤
- 关键词：细菌多样性DNA提取PCR-DGGE优势种群
- 虎纹蛙蝌蚪致病菌株鉴定及药物敏感性分析被引量：4
- 2012年
- 从患病虎纹蛙蝌蚪体内分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,采用浸泡方式感染蝌蚪。结果表明:该菌株能感染蝌蚪,且具有较强的毒力,可导致受试蝌蚪100%死亡;受试蝌蚪出现与自然感染相似的症状。对该菌进行形态特征和主要理化特性分析,鉴定为豚鼠气单胞菌。药敏试验结果显示:该菌对链霉素、卡那霉素、新霉素、恩诺沙星、培氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星等药物高度敏感;对复方新诺明、强力霉素药物等表现中度敏感;对试验的4种中草药表现耐药性。
- 郭秀平林明辉何有根彭勇鳌曹少卫石存斌黄志斌
- 关键词：豚鼠气单胞菌药物敏感性
- 锦鲤疱疹病毒(KHV)保存方法的筛选与比较
- 探讨合适的锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus KHV)保存方法,促进KHV流行病学调查与防控以及疫苗开发等相关工作的开展。方法比较了5种不同保存条件对锦鲤疱疹病毒的影响,包括1):-80℃超低温保存;2):液氮...
- 李莹莹郑树城曾伟伟王英英潘厚军刘春石存斌吴淑勤王庆
- 锦鲤疱疹病毒保存方法的筛选及比较被引量：2
- 2016年
- 目的筛选并比较锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的保存方法。方法将患锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)的患病鱼组织分别采用-80℃超低温保存法、液氮超低温保存法、50%磷酸甘油缓冲液保存法、乙醇保存法及异丙醇保存法保存90 d,进行PCR鉴定,同时检测不同方法保存的患病组织对感染健康鱼及CCB细胞的影响。用KHV感染CCB细胞后,收集病毒液,分别于4、-20、-80℃及液氮中存放90 d,检测病毒感染力(TCID50)。结果 5种方法保存的患病鱼组织经PCR检测均为KHV阳性。于50%磷酸甘油缓冲液、乙醇及异丙醇中保存的患病鱼组织失去了感染健康鱼的能力,而于-80℃及液氮中保存的患病鱼组织均可使健康锦鲤感染KHV;仅保存于50%磷酸甘油缓冲液中的患病鱼组织可感染CCB细胞。于4及-20℃保存的CCB细胞病毒液的病毒感染力分别下降61%和50%,而于-80℃及液氮中保存的CCB细胞病毒液的病毒感染力仅下降7%。结论利用-80℃及液氮超低温保存法可长期保存患病组织病料和细胞病毒液,于50%磷酸甘油缓冲液保存的组织病料有利于进行病毒的细胞分离。
- 李莹莹曾伟伟王英英潘厚军刘春石存斌吴淑勤王庆
- 关键词：锦鲤疱疹病毒
- 锦鲤疱疹病毒GZ1301株的分离与鉴定被引量：12
- 2014年
- 2013年4月,广东省一锦鲤养殖场暴发不明病因疾病,濒死锦鲤在塘边游动缓慢直至死亡,死亡率高达100%。现场采样发现,发病锦鲤体长25 cm,眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑点,解剖发现内脏器官包括肝、脾、肾肿大。细菌分离结果显示,内脏器官肝脏和肾脏中未分离到细菌。提取自然发病鱼的肝、脾、肾、鳃组织DNA作为模板,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的锦鲤疱疹病毒(KHV)检测引物进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的特异性产物。NCBI的Blast搜索结果显示,扩增序列与KHV胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因核苷酸序列同源性为99%。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾锦鲤,可复制出与自然发病相似的症状,并于7 d内全部死亡。取病鱼的鳃和肾脏研磨过滤除菌后进行细胞感染实验,结果显示,组织滤液感染CCB细胞后,盲传5代可以观察到典型的细胞病变效应(CPE)。将出现典型CPE的CCB细胞进行超薄切片制备和电镜观察,电镜下病毒呈对称20面体,直径约100 nm。将出现典型CPE的细胞进行间接免疫荧光实验,可以观察到特异性荧光。根据TK基因全长序列建立系统进化树,证实该毒株为KHV亚洲型毒株,暂命名为KHV-GZ1301株。研究结果可为KHV起源进化、分类以及疾病防控提供重要材料。
- 李莹莹王庆曾伟伟潘厚军王英英刘春梁红茹石存斌吴淑勤
- 关键词：锦鲤锦鲤疱疹病毒TK基因病毒鉴定
