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国家自然科学基金(30270043)

作品数：4 被引量：30H指数：3
相关作者：姚冬生刘大岭谢春芳管敏胡熔更多>>
相关机构：暨南大学广东省生物工程药物重点实验室国家工程研究中心更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省科技攻关计划更多>>
相关领域：生物学更多>>

文献类型

  • 4篇期刊文章
  • 3篇会议论文

领域

  • 5篇生物学
  • 1篇医药卫生
  • 1篇农业科学

主题

  • 3篇酵母
  • 3篇黄曲霉毒素解...
  • 2篇真菌
  • 2篇克隆
  • 2篇毕赤酵母
  • 1篇毒素
  • 1篇英文
  • 1篇质谱鉴定
  • 1篇生物信息
  • 1篇生物信息学
  • 1篇生物信息学分...
  • 1篇糖苷酶
  • 1篇曲霉毒素
  • 1篇酶学性质
  • 1篇酶学性质分析
  • 1篇密码子
  • 1篇密码子优化
  • 1篇黄曲霉
  • 1篇黄曲霉毒素
  • 1篇黄曲霉毒素B...

机构

  • 7篇暨南大学
  • 1篇国家工程研究...
  • 1篇广东省生物工...

作者

  • 6篇姚冬生
  • 5篇刘大岭
  • 5篇谢春芳
  • 3篇管敏
  • 2篇赵龙
  • 1篇温思霞
  • 1篇胡亚冬
  • 1篇左振宇
  • 1篇周涛
  • 1篇黄辉
  • 1篇宋艳萍
  • 1篇胡熔
  • 1篇曹红
  • 1篇谭慧媚
  • 1篇郑嘉瑜
  • 1篇刘大玲

传媒

  • 1篇中国农业科技...
  • 1篇微生物学报
  • 1篇广东药学院学...
  • 1篇中国生物工程...
  • 1篇第四届中国酶...
  • 1篇中国科协第五...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2011
  • 1篇2007
  • 1篇2006
  • 2篇2004
  • 1篇2003
共 4 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
假蜜环菌黄曲霉毒素氧化酶的基因克隆、表达、纯化及酶学性质分析(英文)被引量：9
2011年
【目的】黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO)来源于假蜜环菌(Armillariella tabescens)的细胞内提取物,具有转化黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)的特性。为更进一步了解该酶的性质,我们克隆了AFO的基因,并进行了重组AFO蛋白的表达、纯化和酶学性质分析。【方法】本研究利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得的AFO短肽序列设计简并引物进行逆转录,再通过cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了AFO基因的全长cDNA序列。构建重组表达载体pPIC9-afo,在毕赤酵母中进行重组AFO(rAFO)的融合分泌表达,用Ni离子螯合层析进行rAFO的纯化,获得有活性的rAFO后,对其进行肽质量指纹(peptide mass fingerprinting,PMF)鉴定和酶学性质分析。【结果】黄曲霉毒素氧化酶(AFO)基因的开放阅读框为2088 bp,编码695个氨基酸;肽质量指纹鉴定结果显示重组AFO的肽片段序列覆盖率为63.2%。活性测定表明纯化后的重组AFO(rAFO)比活力为234 U/mg;对rAFO进行酶学性质分析表明,对于底物黄曲霉毒素B1,rAFO的Km值为3.93±0.20×10-6 mol/L;反应最适温度为30℃,最适pH为6.0;30℃放置90 min后酶活力下降50%;rAFO在pH5.5-7.0之间酶活力较稳定,相对活力维持在51%-65%之间。【结论】本文第一次成功克隆并重组表达了一种具有黄曲霉毒素B1转化功能的酶——黄曲霉毒素氧化酶(aflatoxin-oxidase,AFO),纯化后的重组AFO(rAFO)具有较好的黄曲霉毒素B1转化活性,为进一步研究和应用奠定了基础。
温思霞管敏周涛曹红谢春芳刘大玲姚冬生
关键词：CDNA末端快速扩增毕赤酵母
黄曲霉毒素B1分解酶的研究
＜正＞～～
姚冬生
文献传递
Aflatoxin-detoxifizyme的质谱鉴定及其cDNA的克隆与表达
黄曲霉毒素(Aflatoxins,AFT)被认为是潜在的对人类危害极为突出的强致癌诱变剂,世界卫生组织(WHO)在确定重点研究的毒物中,把黄曲霉毒素列在首位。AFT对人类的危害主要通过下面几方面:①污染AFT的食品食用前...
姚冬生刘大岭管敏谢春芳宋艳萍
关键词：AFLATOXIN-DETOXIFIZYMECDNA
文献传递
产黄曲霉毒素解毒酶真菌(E-20)cDNA文库的构建被引量：4
2004年
目的 :构建产黄曲霉毒素解毒酶 (ADTZ)真菌 (E - 2 0 )的cDNA文库 ,为进一步筛选和克隆 (E - 2 0 )菌的特异表达基因做准备。方法 :用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建 (E - 2 0 )菌的cDNA文库 ,检测未扩增文库滴度和重组率后 ,进行文库的扩增 ,并检测扩增文库的质量。随机挑取 1 0个阳性克隆进行测序。结果 :未扩增文库滴度达 1 .0× 1 0 6pfu/mL ,重组率约为 98.9% ,扩增后滴度为 3× 1 0 8pfu/mL ,容量约为 4× 1 0 1 0 。测序结果得到 9条新的表达序列标签 (EST) ,1个 (E - 2 0 )菌的NADH -辅酶Q氧化还原酶 (NuoC)基因。结论 :E - 2 0表达型λ噬菌体cDNA文库的成功建立 ,对于该菌种中有明确功能的特异基因如ADTZ基因的克隆 。
姚冬生管敏赵龙谢春芳刘大岭
关键词：CDNA文库真菌
密码子优化的重组黄曲霉毒素解毒酶(rADTZ)在毕氏酵母中组成型分泌表达的研究被引量：18
2007年
黄曲霉毒素解毒酶(ADTZ)来源于真菌Armillariella tabescens,它能够有效地分解黄曲霉毒素。为了使重组蛋白rADTZ能在毕氏酵母中高效分泌表达,根据毕氏酵母密码子的偏好性对rADTZ的5末端的编码区域进行了优化,利用two-step DNA synthsis技术合成出ADTZ优化的基因序列OPT-ADTZ,并与组成型表达载体pGAPZaA连接,构建重组质粒pNOA,线性化pNOA后转化至毕氏酵母GS115中,实现了密码子优化的rADTZ组成型分泌表达。
左振宇刘大岭胡亚冬胡熔姚冬生
关键词：SYNTHESIS
重组阿拉伯糖苷酶在毕赤酵母中的分泌表达及其活性分析被引量：2
2006年
假密环菌是一种果树腐病菌,具有较强的分解代谢纤维素的能力。根据已克隆出的阿拉伯糖苷酶基因序列(Accession Number AJ620046)设计引物从假密环菌的mRNA中克隆出阿拉伯糖苷酶的ORF片段,构建重组质粒pPIC9-AF,与组氨酸标签融合,电转化毕赤酵母菌GS115并进行诱导表达。所得到的重组阿拉伯糖苷酶在30-35℃时有较高的酶活,最适反应活性pH值在 6．0～8．0之间,而在pH4．0～8．0范围内酶活基本保持在80％以上,比大多已报道的阿拉伯糖苷酶最适pH范围宽。对于高效表达重组阿拉伯糖苷酶以及对其进一步的酶学性质研究提供了良好的基础。
姚冬生谭慧媚黄辉刘大岭谢春芳
产ADTZ真菌cDNA文库的构建及部分克隆的随机测序与生物信息学分析
＜正＞黄曲霉毒素（AFT）是某些黄曲霉属真菌的次级代谢产物,对人类和动物危害极大。AFT的生物去毒转化是该领域中倍受关注的热点。本研究组筛选到一株产AFT毒酶的菌株（E-20）,并从中分离出黄曲霉毒素解毒酶（ADTZ）。...
赵龙谢春芳郑嘉瑜刘大岭姚冬生
关键词：黄曲霉毒素解毒酶SMART克隆生物信息学
文献传递
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