浙江省自然科学基金(Y306179)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：浙江省农业科学院新疆农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭瘟病毒强弱毒株TK基因的克隆及序列比较分析被引量：4
- 2007年
- 根据GenBank中已发表的鸭瘟病毒TK基因序列,设计一对引物,对1株鸭瘟病毒强毒和1株鸭瘟病毒疫苗毒进行PCR扩增。将扩增的目的片段分别克隆到pMD18-T载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,获得阳性重组质粒,然后对阳性重组质粒进行序列测定及分析。结果表明,本实验所扩增的鸭瘟病毒TK基因及侧翼UL24基因大小为1 995 bp,鸭瘟强、弱毒株TK基因及侧翼UL24基因序列完全相同,该病毒TK基因与鸭瘟病毒其它毒株AY911509与AY963569,四川株DQ640611,AV1221株EF173464,sd-01株EF417996同源性分别为99.5%,99.9%,100%,99.9%,100%,而该病毒UL24基因与鸭瘟病毒其它毒株AY911511,DQ227739,EF417996同源性为99.9%,99.8%,99.9%,表明鸭瘟病毒强弱毒株TK基因及侧翼UL24基因高度保守。为构建鸭瘟病毒TK基因缺失的转移载体奠定了基础。
- 张馨月张存冉多良
- 关键词：鸭瘟病毒TK基因克隆
- 鸭瘟病毒转移质粒的构建被引量：2
- 2010年
- 为了建立重组鸭瘟病毒技术,构建了鸭瘟病毒转移质粒。在对鸭瘟强毒和弱毒株TK基因进行测序分析后,将鸭瘟病毒TK-UL24DNA片段克隆于pUC18载体中,构建了质粒pTK;将PCR扩增的GFP真核表达盒插入pTK质粒的TK基因内部,获得转移载体质粒pTK-GFP。鸭瘟病毒TK-UL24测序分析表明鸭瘟强、弱毒株TK基因序列完全相同;转移载体携带Pcmv-GFP-SV40pA表达盒,测序验证其序列与源序列一致。pTK-GFP在脂质体介导下,转染鸭胚成纤维细胞和鸭肾细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。质粒转染细胞后,绿色荧光蛋白得到了有效的表达,为进一步开展重组鸭瘟病毒的研究和构建具有遗传标记的鸭瘟疫苗奠定了基础。
- 张馨月冉多良叶伟成袁秀芳王一成刘蔓雯张存
- 关键词：鸭瘟病毒TK基因
- 鸭瘟病毒囊膜糖蛋白gH的原核表达和免疫印迹被引量：5
- 2008年
- 根据鸭瘟病毒包膜糖蛋白H(gH)基因序列设计3对引物,PCR扩增的基因片段分别定向插入到原核表达载体pET28,构建了3种原核表达质粒pET-gH、pET-gH1347和pET-gH1707,并转化宿主菌BL21(DE3)。结果显示,去除了gH跨膜区和信号肽的gH基因片段(pET-gH1347和pET-gH1707)获得了表达,而全基因片段(pET-gH)未获得表达。Western-blot表明2种表达产物均能与鸭瘟病毒阳性血清发生特异性反应。鸭瘟病毒gH蛋白的成功表达,将有助于开展该基因功能的研究和血清学检测方法的建立。
- 金映红冉多良叶伟成王一成袁秀芳卢立志陈方华张存
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达
- 重组禽α疱疹病毒研究进展被引量：2
- 2007年
- 禽α疱疹病毒可以引起多种家禽重要传染病,重组病毒是研究其基因组结构功能和新型基因工程疫苗的有效手段。文章综述了禽α疱疹病毒转移载体的构建和同源重组方法、感染性细菌人工染色体系统、基因缺失疫苗和重组活载体疫苗的最新进展。
- 张馨月张存冉多良
- 关键词：病毒载体重组疫苗
