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国家重点基础研究发展计划(2004CB720100): 作品数：25 被引量：110H指数：5; 相关作者：曾耀英黄秀艳杨志宋兵滕菲更多>>; 相关机构：暨南大学佛山市第一人民医院中山大学附属第一医院更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划广州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响被引量：1: 2008年; 目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果MTT法检测淫羊藿提取物在50mg/L时细胞存活率达52.36%。ConA作用6h后,对照组CD69+表达率为(4.61±0.85)%,ConA组CD69+T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L时均抑制ConA诱导的CD3+T淋巴细胞CD69的表达(P<0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%。培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01),48h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01。结论淫羊藿提取物能明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性。; 滕菲曾耀英黄秀艳杨志姚满林宋兵李林; 关键词：淫羊藿提取物 T淋巴细胞活化增殖

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响被引量：4: 2008年; 目的研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法以MTT法检测T细胞药物毒性;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol·L-1时对于CD69的表达以及淋巴细胞48和72h增殖,均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论ICA能抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性,即在最高浓度3.0μmol·L-1时抑制率最强。; 滕菲曾耀英黄秀艳杨志姚满林宋兵李林; 关键词：淫羊藿甙 T淋巴细胞活化增殖流式细胞术

红车轴草提取物对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞分泌NO的影响(英文)被引量：1: 2008年; 探讨红车轴草提取物(RCE)在体外对小鼠T淋巴细胞和巨噬细胞的影响。MTT法检测RCE对细胞的毒性作用。荧光抗体染色结合流式细胞术检测RCE对T淋巴细胞在Con A的刺激下表达活化抗原CD69、CD25、CD71的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术分析RCE对T淋巴细胞在Con A诱导下增殖情况的影响。Griess法检测RCE对小鼠巨噬细胞在LPS刺激24 h后分泌NO的影响。RCE对小鼠有潜在的抗炎作用。RCE对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的细胞毒作用很小。不同质量浓度的RCE能够很好的抑制过量的炎症相关信号分子表达,如NO,CD69,CD25,CD71,且呈剂量依赖性。RCE能够抑制T淋巴细胞的增殖。数据显示RCE可能通过对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞NO分泌的抑制展示其抗炎效应。; 杨志黄秀艳曾耀英; 关键词：红车轴草提取物淋巴细胞巨噬细胞一氧化氮

流式细胞术微球阵列法检测急性白血病血清IL-6、IL-10和TNF水平被引量：14: 2008年; 目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞术检测29例急性白血病患者和20例正常人血清样本中3种细胞因子水平。结果:AL患者IL-6、IL-10和TNF水平显著高于正常对照组,急性淋巴细胞白血病(ALL)的IL-10和TNF水平较急性非淋巴细胞白血病(ANLL)有显著性提高(P<0.05)。在ANLL亚型中,M1型IL-6水平最高。结论:CBA法能快速、准确地定量检测细胞因子;AL血清中IL-6、IL-10和TNF水平升高,可能与疾病的发生发展存在相关性。; 肖平曾耀英林蔚; 关键词：急性白血病

清开灵注射液体外抑制HIV-1作用被引量：2: 2009年; 目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响。结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75。结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制。; 赵令斋曾耀英黄秀艳曾祥凤林长乐唐先高; 关键词：清开灵注射液细胞融合

适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术: 2008年; 【目的】建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析。【方法】利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白、固相pH梯度胶条进行双向电泳、PDQuest7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点。【结果】成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术,获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱。人表皮组织的蛋白质在pH5～8范围内分布均匀,分子量集中在15～100ku之间。银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14;对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析,结果表明Neuhoff胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析,其在上样量为350μg时蛋白斑点数达394±9,匹配率为85.53%。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱,并鉴定为Caspase14前体和27ku热激蛋白1。【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考,为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础。; 聂燕芳曾耀英吴晓萍刘钧澄黄秀艳; 关键词：双向电泳蛋白质组肽质量指纹图谱

CD4^+CD25^+调节性T细胞的发育与胸腺CD4^-CD25^+细胞关联性的探讨被引量：5: 2005年; 目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatoryTcells,CD4+CD25+Tr)的发育及其与胸腺CD4-CD25+细胞的关系。方法:以流式细胞术检测小鼠从出生至发育成熟过程中,胸腺、脾脏、淋巴结和外周血中CD4+CD25+Tr比例变化,以及胸腺CD4-CD25+细胞比例变化;通过磁激活细胞分选(MACS)从小鼠淋巴结纯化CD4+CD25+T和CD4+CD25-T细胞,经CFDA-SE标记,以多种刺激形式诱导增殖。结果:小鼠出生1d到10周的发育过程中,胸腺CD4+CD25+Tr比例一直比较恒定,但在脾脏、淋巴结和外周血,随鼠龄增加而不断升高,从1d龄到1周时升高最迅速,其后的升高速度逐渐减慢,10周龄时达平台期。胸腺中CD4-CD25+细胞在出生1d的小鼠比例非常高,1d龄到1周龄期间迅速下降,10周龄时达平台期。ConA不能诱导CD4+CD25+Tr和CD4+CD25-T细胞增殖,但CD4+CD25+Tr出现一过性细胞增大;佛波醇酯加离子霉素能诱导CD4+CD25+Tr和CD4+CD25-T细胞增殖;包被的抗CD3抗体加可溶性抗CD28抗体能刺激CD4+CD25-T细胞增殖,但CD4+CD25+Tr不增殖,加入高浓度IL-2,CD4+CD25-T细胞增殖更强,CD4+CD25+Tr出现增殖。结论:胸腺CD4-CD25+细胞很有可能是CD4+CD25+Tr的前体。; 肇静娴曾耀英; 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞胸腺

灭活HIV-1颗粒对人CD4^+T细胞活化标记分子CD25、CD71和HLA-DR表达的作用被引量：1: 2009年; 目的通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)来源的CD4+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(CD71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理机制。方法AT-2灭活HIV-1IIIB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量,调整p24抗原含量为50 ng/mL;然后按照p24抗原量为0.1 ng/mL(记作HIV-1 1/500组)、1 ng/mL(记作HIV-1 1/50组)和10 ng/mL(记作HIV-11/5组)的浓度加入到PBMCs中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照,24 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD25的表达百分率;48 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD71和HLA-DR的表达百分率。结果24 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD25的表达百分率为(9.46±2.12)%,PHA组为(79.45±3.72)%,HIV-1 1/500组为(14.89±2.53)%,HIV-1 1/50组为(19.04±2.41)%,HIV-11/5组为(23.50±2.21)%;48 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD71的表达百分率为(3.39±1.40)%,PHA组为(75.52±5.14)%,HIV-1 1/500组为(11.70±2.34)%,HIV-1 1/50组为(18.45±3.19)%,HIV-1 1/5组为(22.59±2.96)%;CD4+T细胞HLA-DR的表达百分率为(8.11±2.13)%,PHA组为(66.48±6.81)%,HIV-1 1/500组为(14.52±1.68)%,HIV-1 1/50组为(19.94±2.38)%,HIV-1 1/5组为(23.74±2.30)%。结论AT-2灭活的HIV-1IIIB颗粒能够明显的诱导PBMCs中CD4+T细胞活化,并可能引起CD4+T细胞增殖,从而为HIV-1感染提供更多的"燃料细胞"。; 黄秀艳曾耀英王辉; 关键词：CD25 CD71 HLA-DR

凋亡细胞线粒体膜电势与物理参数变化的可视化研究被引量：2: 2008年; 目的:通过放线菌酮(CHX)诱导HL-60细胞凋亡模型,探讨线粒体膜电势与细胞物理参数的变化。方法:建立CHX诱导HL-60细胞凋亡模型。于6和18 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡和晚期凋亡细胞及坏死细胞比率;利用JC-1染色流式细胞术,通过对对照组和CHX组FL1/FL2散点图上具有不同荧光强度的细胞群划分为R2,R3,R4 3个细胞群,并分别对这些细胞群在FSC/SSC二维散点图上进行反向设门,分析细胞凋亡过程中线粒体膜电势变化与细胞物理参数间的关系。通过透射电镜观察凋亡细胞形态结构改变。结果:CHX可引起HL-60细胞凋亡;与对照组相比,CHX组R2和R3细胞群物理参数为FSC和SSC均显著增高,但线粒体膜电势无显著性差异,P>0.05;R4细胞群则为FSC降低,SSC增高,P<0.05,且线粒体膜电势降低。CHX可诱导HL-60细胞体积变小,皱缩,并出现凋亡特征,如核固缩形成新月体和质膜"出芽"现象。结论:流式细胞仪FSC/SSC图可视为细胞指纹图谱。本模型中线粒体膜电势降低的细胞变小,且颗粒程度增加,可能与细胞凋亡过程中的结构改变有关。; 梁佩燕曾耀英王通楼湘莹; 关键词：放线菌酮 HL-60细胞

人表皮组织蛋白质组双向电泳技术的建立被引量：5: 2007年; 目的：建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术，为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础。方法：组织匀浆法制备表皮组织总蛋白，采用固相pH梯度胶条进行双向电泳，凝胶银染后用PDQuest7．4软件对电泳图谱进行分析。结果：人表皮组织蛋白质组在7cm pH5～8 IPG胶条的最佳上样量为200μg，平均蛋白斑点数为414±19，平均匹配斑点数为346±31，匹配率达83．6％。结论：通过优化双向电泳条件，获得了分辨率高、重复性好的人表皮组织蛋白质组双向电泳图谱。; 聂燕芳曾耀英刘钧澄吴晓萍; 关键词：双向电泳蛋白质组

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