黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12521021)
- 作品数：7 被引量：27H指数：3
- 相关作者：李海涛高继国刘荣梅张金波张圆更多>>
- 相关机构：东北农业大学中国农业科学院植物保护研究所更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目转基因生物新品种培育专项国家基础科学人才培养基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- Vip3A杀虫蛋白随机重组文库的构建与分析
- 2013年
- 营养期杀虫蛋白(Vegetative Insecticidal Proteins,VIPs)作为苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)一类新型杀虫蛋白,丰富了Bt的杀虫谱,是一种用于植物保护的重要杀虫蛋白。为了提高VIPs蛋白的杀虫活性,扩展其杀虫谱,利用Gateway技术对vip3Aa39和vip3Aa11基因进行同源重组突变,并克隆到入门载体pDONR221中,构建了重组文库。结果显示,得到了42个基因型不同的重组质粒,其中有22个蛋白序列不同的突变体。
- 张宁刘荣梅束长龙张杰李海涛高继国
- 关键词：苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白GATEWAY技术
- 苏云金芽孢杆菌BJH705菌株cry7Ab基因的克隆及表达
- 2017年
- 从海南地区土壤中分离得到1株苏云金芽孢杆菌(Bt)BJH705。经PCR鉴定结果显示,该菌中含有cry7Ab类基因,其晶体形态为双锥形;以全长引物对其进行扩增,得到大小为3 417 bp的片段;通过SDS-PAGE结果显示,此菌株Cry7Ab杀虫晶体蛋白分子量约为130 ku,编码1 139个氨基酸残基,等电点为4.83;序列已提交Gen Bank注册,登录号为KX010669;对Cry7Ab蛋白的跨膜区域进行分析,得到此蛋白由亲水域和疏水域形成跨膜区,其跨膜区大约由19个疏水氨基酸组成,经Cry7Ab蛋白保守结构域分析含有3个结构域。
- 韩超王丽娟李海涛刘荣梅高继国张月
- 关键词：苏云金芽孢杆菌克隆杀虫晶体蛋白
- 苏云金芽胞杆菌cry2Ab34基因的克隆、表达和杀虫活性分析被引量：1
- 2017年
- 旨在对苏云金芽胞杆菌cry2Ab34基因进行分子鉴定和生物活测定,从杀虫活性高的Bt BJH500菌株中提取基因组DNA,通过PCR法克隆得到cry2Ab34基因(Gen Bank登录号为KX357382)。这个基因序列已被国际Bt基因命名委员会正式命名为cry2Ab34,结果显示,对cry2Ab34基因进行表达,获得大小约70 k D的表达产物,将该基因在大肠杆菌E.coli BL21中表达之后进行生物活性测定,结果表明对鳞翅目害虫小菜蛾(Plutella xyllostella)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)都具有一定的杀虫活性,其校正死亡率10μg/m L为31.25%,100μg/m L为62.5%和校正死亡率10μg/m L为29.4%,100μg/m L为52.9%。
- 张月李海涛刘荣梅高继国
- 关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白杀虫活性小菜蛾棉铃虫
- 苏云金芽胞杆菌chiA73基因的克隆、表达和酶活性分析被引量：2
- 2015年
- 旨在对苏云金芽胞杆菌几丁质酶基因进行分子鉴定和酶活测定,从产几丁质酶活力高的Bt DLD171菌株中提取基因组DNA,通过PCR法克隆得到几丁质酶chi A73基因(Gen Bank登录号为KJ508093)。结果显示,对chi A73基因进行表达,获得大小约74 k D的表达产物。用荧光底物对表达产物进行酶活测定,发现表达产物只能水解荧光底物4-甲基伞形酮几丁三糖[4-MU-(Glc NAc)3],而不能水解4-甲基伞形酮几丁单糖(4-MU-Glc NAc)。结果表明,Chi A73为一种内切几丁质酶,在p H值为8、温度为40℃时酶活性最高。
- 张圆周国旺李海涛刘荣梅赵一夔高继国
- 关键词：苏云金芽胞杆菌几丁质酶酶活性
- 苏云金芽胞杆菌LTS290菌株抑制镰孢菌的作用被引量：6
- 2015年
- 旨在扩大苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的生防范围,通过对Bt LTS290菌株的对峙培养和菌株无菌发酵液对镰孢菌的抑制作用进行研究。结果表明,Bt LTS290菌株可抑制6种马铃薯致病镰孢菌的生长,并且Bt LTS290无菌发酵液的抑菌效果显著。抑菌物质对温度不敏感,经过121℃处理20 min后仍然具有抑菌活性。在p H3-11范围内存放12 h后,抑菌活性变幅不大,并且用蛋白酶K处理后其抑菌活性依然存在。实验证明苏云金芽胞杆菌Bt LTS290是一株可以高效抑制马铃薯致病镰孢菌的生防菌株。
- 周国旺李玉红张圆李海涛刘荣梅高继国
- 关键词：苏云金芽胞杆菌马铃薯干腐病镰孢菌抑菌活性生防菌株
- Bt菌株DQ89的sip基因的克隆、表达及杀虫活性分析被引量：5
- 2015年
- 苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringicnsis(Bt)是一种广泛存在于自然界中的生防微生物,其杀虫活性主要来源于杀虫基因编码的内毒素(insecticidal crystal proteins,ICPs)、营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal protein,VIP)和分泌期杀虫蛋白(secreted insecticidal protein,Sip),相比于以上2种杀虫蛋白,Sip的研究相对较少。本研究从实验室中的Bt野生菌株中克隆sip基因,其中编号为DQ89的Bt菌株成功克隆得到1188 bp大小的sip基因,编码395个氨基酸,与已知的Sip1A蛋白的相似性为87%,序列提交到Gen Bank并获得登录号KP114614。将该基因在大肠杆菌中表达的蛋白进行生物活性测定,结果显示其对大猿叶甲Colaphellus bowringi Baly具有一定的杀虫活性,其LC50为1.542μg/m L。
- 张金波李海涛刘荣梅束长龙高继国
- 关键词：苏云金芽胞杆菌生物活性
