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带Myc、His标签的SPAG4L真核表达载体的构建与表达被引量：4: 2013年; 为了获得带有His、Myc双标签的SPAG4L蛋白,建立能够稳定表达该蛋白的细胞系,本研究利用PCR技术从人睾丸cDNA中扩增SPAG4L开放阅读框,构建到pcDNA3.1(+)myc-his真核表达载体中进行测序和双酶切验证。将pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L质粒和空白载体分别转染HeLa细胞,G418筛选后建立稳定转染细胞系。用Western blotting和免疫荧光技术对新建立的稳定转染细胞系进行检测。结果表明,成功扩增了SPAG4L基因,构建到pcDNA3.1/myc-His(-)A真核表达载体后,经酶切和测序验证所插入的SPAG4L序列完全正确;pcDNA3.1/myc-His(-)A/SPAG4L转染HeLa细胞后,经G418筛选后建立了稳定转染细胞系。Western blotting检测后发现,新建立的细胞系能够正确表达SPAG4L及其标签蛋白,进一步的免疫荧光实验发现,SPAG4L能够和内质网标签蛋白PDI共定位。研究结果所提供的稳定转染细胞系将为下一步进行免疫共沉淀和pull-down实验提供了有力的工具。; 陈颜亮郑治王剑龙周晓哲李艳杨梦黄利华邢晓为; 关键词：标签转染真核表达蛋白功能

人睾丸蛋白SPAG4L与KASH结构域蛋白Nesprin-3的相互作用: 2017年; 目的探讨含SUN(Sad,UNC-84)结构域的人睾丸蛋白SPAG4L(sperm-associated antigen 4 like)与具有KASH(Klarsicht,ANC-1 and Syne homology)结构域的核膜血影重复蛋白3(nuclear envelop spectrin repeat proteins 3,Nesprin-3)之间的相互作用。方法用生物信息学方法对SPAG4L蛋白进行分析,通过体外转染实验,观察SPAG4L的亚细胞定位;并用免疫荧光技术、免疫共沉淀和双分子荧光互补实验检测SPAG4L是否与KASH结构域蛋白Nesprin-3存在相互作用。结果生物信息学分析结果表明,SPAG4L蛋白具有跨膜结构;亚细胞定位结果发现,SPAG4L蛋白定位于核膜和胞浆;免疫荧光、免疫共沉淀和双分子荧光互补实验结果表明,SPAG4L蛋白与Nesprin-3蛋白质相互作用,形成LINC(linkers of the nucleoskeleton to the cytoskeleton)复合物。结论 SPAG4L与Nesprin-3能够相互作用,形成LINC复合物,对了解SPAG4L蛋白在精子发生中的作用具有重要的意义。; 任瑶伍勇黄利华邢晓为; 关键词：相互作用精子发生

精子相关抗原4的功能及其在疾病中的作用: 2017年; 精子相关抗原4(sperm associated antigen 4,SPAG4)是SUN(Sad-1,UNC-84)蛋白家族成员。近年来的研究发现,SPAG4可以维持精子头部结构的完整性,参与精子尾部发育,其功能异常可导致雄性不育。此外,SPAG4 mRNA在多种肿瘤细胞中表达,是一种潜在的肿瘤标志物。对肾透明细胞癌的最新研究发现,SPAG4表达增高将促进肿瘤细胞的增殖和侵袭,其表达受缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1,HIF-1)调控。对SPAG4功能的深入研究,将有助于阐明男性不育的分子机制并为研究肿瘤的发生发展提供新的候选靶标。; 马殊伦唐莉莎李恺璇邢晓为; 关键词：精子发生雄性不育肿瘤

一种小鼠睾丸细胞涂片的快速制备方法被引量：2: 2014年; 目的建立一种用于免疫荧光实验的小鼠睾丸细胞涂片的快速制备新方法。方法分别给出生后16、21、28 d和120 d的小鼠腹腔注射秋水仙素,3 h后取睾丸组织剔除白膜,分离曲精小管进行剪碎,加入冷PBS重悬细胞,过滤,并用冷PBS洗涤细胞3次,然后低渗处理,最后经多聚甲醛固定后铺片。对细胞核进行DAPI染色,并以21 d小鼠睾丸涂片为例进行免疫荧光实验,检测所制备的细胞涂片的质量。结果所制备的小鼠睾丸细胞涂片经DAPI染色,每张细胞涂片均分布大量生殖细胞,背景清晰,根据细胞核的大小与着色,可初步判断生殖细胞类型;用不同发育阶段小鼠所制备的睾丸细胞涂片,细胞分布类型有很大差异,其中28 d小鼠制备的睾丸细胞涂片中生殖细胞类型最多;以21 d小鼠睾丸细胞涂片为例进行免疫荧光实验,红色和绿色荧光标记的目标蛋白在精母细胞中表达清晰,背景干净,说明所制备的细胞涂片适合于免疫荧光检测。结论成功建立了一种快速制备小鼠睾丸细胞涂片的新方法。; 杨梦左笑丛李艳黄利华邢晓为; 关键词：小鼠睾丸细胞涂片免疫荧光技术精子发生

分子实验技能课程教学模式初探被引量：3: 2015年; 目的:探索适合临床研究生的分子实验技能课教学模式,提高研究生科研思维能力和实验技能。方法:根据临床研究生的特点,以学生为主体,注重学生科研思维的培养,运用多样化的教学手段,对研究生临床分子实验技能课程的教学方法进行探索。结果:通过实验技能课的学习与培训,临床研究生科研思维能力得到很大的提升,对医学实验研究兴趣增加,取得了很好的教学效果。结论:多元化教学模式比较适合临床研究生实验技能课的教学。; 邢晓为邓昊; 关键词：教学

SUN5特异性抗体的制备及其应用被引量：1: 2016年; 目的制备可检测全长SUN5的特异性抗体,并用该抗体检测SUN5蛋白在人类生殖细胞中的表达。方法通过生物信息学比较SUN5与新剪切体SUN5β之间的差异,在差异区域设计合成短肽,制备SUN5多克隆抗体并纯化。用新制备的SUN5抗体对Ntera-2细胞中的SUN5蛋白进行Western blotting和免疫荧光检测,验证抗体的特异性;最后,用该抗体对人睾丸细胞涂片进行检测,观察SUN5蛋白在人生殖细胞中的表达。结果成功合成了SUN5短肽,而且用该短肽制备了SUN5多克隆抗体。Western blot结果显示,新制备的SUN5特异性抗体可检测到全长SUN5蛋白。免疫荧光实验结果表明,在Ntera-2细胞中SUN5蛋白定位在核膜和胞浆。通过对人睾丸细胞涂片的检测发现,SUN5在睾丸精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达。结论成功制备了SUN5特异性抗体,该特异性抗体的制备对于深入研究SUN5的功能具有重要的意义。此外,发现SUN5蛋白在精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达,提示SUN5蛋白可能在精子发生中发挥着重要的生理功能。; 王静芳黄利华伍勇杨林飞任瑶邢晓为; 关键词：抗体 WESTERN BLOT 免疫荧光生殖细胞

Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中的表达及其原核表达与纯化被引量：1: 2015年; 目的:研究Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中的表达变化,并对Nesprin2进行原核表达和纯化,为进一步研究该蛋白在精子发生中的作用奠定基础。方法:制备小鼠睾丸细胞涂片,用Nesprin2特异性抗体进行细胞免疫荧光染色,观察Nesprin2在各级生精细胞中的表达;应用RT-PCR技术扩增Nesprin2 C端包含KASH domain的编码85个氨基酸的目的片段,将PCR产物插入到PUCm-T载体中测序,将测序验证后的目的片段亚克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。对GST-Nesprin2 C85融合蛋白进行纯化,Western blot进行验证。结果:免疫荧光检测结果发现,Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中均有表达,主要分布在核膜及其周围,在减数分裂过程中Nesprin2可能参与核膜重塑。构建了PGEX-4T-1-Nesprin2 C85重组质粒,经IPTG诱导后成功表达了GST-Nesprin2 C85融合蛋白。对GST-Nesprin2 C85融合蛋白进行纯化后,Western blot进行检测,结果发现,原核诱导表达的融合蛋白为GST-Nesprin2 C85融合蛋白。结论:Nesprin2在小鼠各级生精细胞中均有表达,在减数分裂过程中可能参与核膜的重塑。; 曾娇辉伍勇蒋金泉王静芳邢晓为; 关键词：免疫荧光减数分裂精子发生

八年制医学生临床诊断学见习课教学模式初探被引量：4: 2013年; 目的:探索适合八年制医学生教育特点的临床诊断见习教学模式,提高八年制医学生临床思维能力。方法:根据八年制医学生的特点,以学生为主体,采用多元化教学方法,如:分时段讲解式授课、以典型病例为核心的CBL教学法及临床实践等,运用多样化的教学手段,对八年制医学生的临床诊断学见习课教学方法进行改革探索。结果:八年制医学生的临床思维能力得到了全面提高,取得较好的教学效果。结论:多元化教学模式适合八年制医学生临床诊断见习教学。; 杨幼波胡平安谢艳红王成红陈科莫朝晖; 关键词：临床诊断学八年制医学教育见习教学临床思维能力

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国家自然科学基金(81170615)

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