江苏省卫生厅医学科技发展基金(H200115)
- 作品数：8 被引量：96H指数：6
- 相关作者：孟继鸿张兰芳丁福戴星赵宇更多>>
- 相关机构：东南大学中国医科大学中华人民共和国公安部更多>>
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- 一种新型戊型肝炎病毒样颗粒的表达、纯化及其免疫原性被引量：18
- 2006年
- 目的：以非包涵体形式表达含戊型肝炎病毒（HEV）中和抗原表位的新型HEV重组蛋白,并对其进行鉴定和分析.方法：将HEV开放阅读框架2（ORF2）编码452～617位氨基酸的基因片段连接到载体pET28a（＋）,转化大肠杆菌,获取表达克隆.以Ni-NTA层析柱纯化表达的蛋白,并用SDS-PAGE、Western blot和直接电镜负染等方法分析鉴定,最后免疫小鼠检测特异性抗体的产生水平.结果：表达的重组蛋白天然可溶,相对分子质量（Mr）约为22 000,并可形成直径为20 nm左右的病毒样颗粒,能与戊型肝炎患者血清发生Westem blot阳性反应,免疫小鼠后可诱导产生高滴度的特异性抗体.体外中和试验显示产生的抗体具有中和HEV的活性.结论：原核表达的、含HEV中和抗原表位的、长度仅166个氨基酸的HEV ORF2近3＇端编码蛋白能够形成病毒样颗粒,而且该新型病毒样颗粒具有良好的抗原性和免疫原性.
- 董晨孟继鸿
- 关键词：戊型肝炎病毒重组蛋白病毒样颗粒
- 与人类关系密切的7种动物对戊型肝炎病毒易感性的初步研究被引量：25
- 2004年
- 目的 用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法 用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并用于 5 91份猪、警犬、家犬、宠物犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等多种动物血清标本的HEV抗体检测 ;用HEV多基因型通用性引物RT -nPCR扩增 14 3份犬血清标本HEVRNA。结果 在猪、家犬和宠物犬血清标本中检测到HEV抗体 ,阳性率分别为 4 3 93%、15 19%和 4 6 5 % ,但在警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中未检测到HEV抗体 ;14 3份犬血清标本用RT -nPCR未扩增出HEVRNA。结论 用多基因型HEV重组蛋白建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEV抗体的检测 ;猪和犬对HEV易感 ,在HEV传播中可能起重要作用。
- 丁福孟继鸿张兰芳程险峰张汇东贺星亮杨志国许家璋
- 关键词：戊型肝炎病毒易感性
- 不同基因型戊型肝炎病毒重组蛋白的抗原性分析被引量：35
- 2002年
- 目的 :探讨不同基因型和亚型戊型肝炎病毒 (HEV)重组蛋白氨基酸序列的变化对HEV抗原性的影响 ,筛选出最佳的HEV抗原用于戊型肝炎的免疫诊断。方法 :用已知序列的HEV基因工程表达蛋白作为包被抗原 ,对已知血清标本进行酶联免疫吸附试验测定。结果 :6种不同抗原对 3 0份正常献血者血清无抗原性 ,对 17份急性戊型肝炎病人血清和 5份实验感染动物血清均呈阳性反应 ,但血清抗体滴度的高低与所用抗原的基因型有关 ,尤其是受到该抗原第 76位氨基酸变化的影响。结论
- 孟继鸿戴星窦晓光YE KHUDYAKOVH A FIELDS
- 关键词：戊型肝炎病毒基因型重组蛋白抗原性
- 不同基因型戊型肝炎病毒存在多种类型抗原表位被引量：10
- 2006年
- 以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2重组蛋白p166Us为免疫原制备单克隆抗体(McAbs),采用间接ELISA和免疫印迹法,检测McAbs与不同基因型和亚型HEV重组蛋白p166Bur(Ⅰa型)、p166Pak(Ⅰb型)、p166Mor(Ⅰc型)、p166Mex(Ⅱ型)、p166Us(Ⅲ型)、p166Nz(猪HEV,Ⅲ型)和p166Chn(Ⅳ型)的反应性,采用抗原或抗体竞争ELISA分析p166蛋白与天然HEV颗粒之间抗原表位的关系。结果获得4D3、2E3、11E11、12H5、3A3和1F16株稳定分泌McAbs的杂交瘤细胞株。4D3分泌的McAb与7种p166均发生反应,其与免疫原p166Us的结合可被Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ型天然HEV颗粒或病人血清竞争抑制。2E3、11E11和12H5分泌的McAbs只与p166Us、p166Nz和p166Chn发生反应,它们与p166Us的结合仅能被Ⅲ和IV型病毒或血清所抑制。3A3分泌的McAb只与p166Us及p166Nz结合,1F1分泌的McAb只与p166Us结合,两者均能被Ⅲ型美国株竞争抑制,而Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型不能抑制它们与p166Us的结合。由此可见,不同基因型和亚型HEV ORF2编码蛋白p166上存在多种类型抗原表位,其中包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ基因型共同的,Ⅲ、Ⅳ基因型共有的和第Ⅲ基因型特异的等,这些表位与天然HEV颗粒上的抗原表位具有相同的免疫学特征。
- 邓蕾孟继鸿赵宇张红梅戴星
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原表位单克隆抗体重组蛋白基因型
- 唾液抗戊型肝炎病毒IgM用于戊型肝炎诊断的探讨被引量：2
- 2005年
- 目的应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测唾液中抗戊型肝炎病毒(HEV)-IgM,评价其用于戊型肝炎早期诊断的可行性。方法应用东南大学基因工程疫苗研究所建立的HEV-IgM抗体ELISA检测方法,检测77例急性戊型肝炎患者、63例非戊型肝炎患者及64例正常人的唾液和血清样本中抗HEV-IgM,将唾液和血清两者的检测结果加以比较,并观察标本采集时间对检测结果的影响。结果77份急性戊型肝炎患者血清与唾液抗HEV-IgM阳性符合率为87%;在64份正常对照组及63份其他患者对照组中,血清与唾液抗HEV-IgM均阴性,阴性符合率为100%。标本采集时间对唾液和血清检测结果的相关性无显著影响。结论唾液标本用于抗HEV-IgM检测,特异性好,敏感性较高,具有无创伤、容易采集、操作简便等优点,在特殊情况下可代替血清用于戊型肝炎的诊断,尤其适用于戊型肝炎流行时HEV近期感染的血清流行病学调查。
- 耿全林梁久红李丹平丁福张兰芳周镇先孟继鸿
- 关键词：唾液免疫球蛋白M酶联免疫吸附测定
- 戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同被引量：11
- 2004年
- 目的 :制备戊型肝炎病毒 (HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白 (p16 6Bur和p16 6Mex)的单克隆抗体(McAbs) ,用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法 :将免疫BALB C小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,获得分泌抗 p16 6Bur和抗 p16 6MexMcAbs的杂交瘤细胞株 ,然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEVORF2编码蛋白p16 6的免疫反应性。结果 :获得 4株杂交瘤细胞株 ,即分泌抗 p16 6BurMcAbs的 2C2 、2B1 以及分泌抗 p16 6MexMcAbs的D8G1 0 和E5E1 2 ,其中 2B1 分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合 ,而其余 3株分泌的McAbs既能与I、II基因型HEV的p16 6重组蛋白发生反应 ,也能与III、IV基因型的p16 6蛋白反应。结论 :HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。
- 赵宇梁久红孟继鸿张兰芳张红梅丁福季晓辉
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原表位单克隆抗体重组蛋白基因型
- 不同基因型戊型肝炎病毒的抗原表位分析被引量：14
- 2003年
- 目的 研究不同基因型戊型肝炎病毒 (HEV)的抗原表位特点。方法 以HEV基因工程重组蛋白p16 6Bur、p16 6Mex为免疫原 ,制备单克隆抗体 (McAbs)。采用间接ELISA法及免疫印迹法(Westernblot) ,检测所制备的McAbs与 7种不同基因型和亚型p16 6 (p16 6Bur、p16 6Pak、p16 6Mor、p16 6Mex、p16 6Us、p16 6Nz和p16 6Chn)的交叉反应性。结果 获得 4株稳定分泌基因型相关McAb的杂交瘤细胞株 ,即 1B5、1D1 0 、1G1 0 和D4 A3。经检测 ,1B5、1D1 0 、1G1 0 分泌的McAbs只与p16 6Bur及p16 6Mor特异结合 ,D4 A3分泌的McAb只与p16 6Mex特异结合。结论 不同基因型HEV存在不同的抗原表位。
- 梁久红孟继鸿赵宇戴星丁福张兰芳
- 关键词：不同基因型戊型肝炎病毒抗原表位单克隆抗体免疫印迹法ELISA法
- 大学新生戊型肝炎病毒现/近期隐性感染的筛查被引量：3
- 2003年
- 张兰芳丁福孟继鸿
- 关键词：大学新生戊型肝炎病毒ELISA一步法戊型肝炎抗体检测
