首都医学发展科研基金(2009-3068)
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
- 相关作者：易勇敬华魏平贾莉萍尹玉峰更多>>
- 相关机构：解放军第306医院第三军医大学中国科学院更多>>
- 发文基金：首都医学发展科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 免疫磁珠分离技术在医学检验中的应用被引量：11
- 2010年
- 易勇敬华
- 关键词：免疫磁珠
- EHEC0157：H7紧密黏附素及突变体与受体Tir的结合特性研究
- 2012年
- 目的表达纯化肠出血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7的紧密黏附素（intimin）及突变体intiminN916Y，并构建其转位紧密黏附素受体（translocatedint intin receptor，Tir）结合片段（intiminbinding domain，Tir-IBD），通过BIACore技术检测紧密黏附素及突变体intiminN916Y与Tit．IBD蛋白质相互作用特性的变化，探索特定氨基酸的突变对其黏附结合功能的影响。方法设计引物采用PCR法自EHEC0157：H7基因组扩增Tir—IBD的编码基因tir-~d，TA克隆后构建原核表达质粒pET-21a（＋）-tir—ibd，经测序鉴定后转化最coliBL21（DE3），IPTG诱导表达，PAGE检测。目的蛋白经Ni．NTA亲和纯化后，再用阴离子交换柱ResourceQ和分子筛柱Superdex200进行纯化。同时按包涵体复性后纯化的方案制备紧密黏附素及突变体intiminNgl6Y，将所得高纯度目的蛋白Tir-IBD适当稀释后耦联BIACore3000配套的NTA芯片，在25℃和37℃条件下分别以紧密黏附素及突变体intim．inN916Y作为流动相进行BIACore检测。结果EHEC0157：H7基因组扩增出了约270bp的目的片段；原核表达质粒pET-21a（＋）-tir-ibd经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化EcoliBL21（DE3）后IPTG诱导目的蛋白表达率约15％；PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量（肘，）约10x103，破菌后电泳证实目的蛋白为可溶表达。Ni-NTA亲和纯化和阴离子交换纯化效果明显，高纯度的Tir-IBD蛋白耦联NTA芯片，在25℃和37℃条件下对紧密黏附素及突变体intiminN916Y与＇Fir．IBD相互作用的BIACore检测结果显示，intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并呈温度依赖性。结论EHEC0157：H7的紧密黏附素、突变体intiminN916Y及Tir-IBD经基因克隆后获得了较好的表达，纯化后获得高纯度的目的蛋白。在此基础上建立了蛋白相互作用的BIACore检测体系，证明intiminN916Y特定氨基酸的突变对其结合能力有明显影响并
- 易勇肖敏罗萍樊峥贾莉萍魏平陈兴明李丹刘春雷高峰王贵华司少艳毛旭虎邹全明敬华
- 关键词：蛋白质相互作用
- 国产磁珠核酸自动提取系统对HBV-DNA检测前处理的研究被引量：9
- 2011年
- 目的:比较国产磁珠法核酸自动提取系统和传统的沉淀离心提取法提取血清HBV DNA的效果,探讨其应用潜力。方法:以两种方法平行提取50份血清HBV DNA,荧光定量PCR检测其提取核酸的拷贝数及CT值,进行方法对比试验;配制成不同浓度的HBV应用血清,用国产自动提取系统提取HBV DNA,评价方法的灵敏度、重复性及线性范围;向已知浓度的HBV阳性血清中定量加入溶血及脂血的阴性血清,再同样提取HBV DNA,观察方法的抗干扰特性。结果:两种方法平行提取血清HBV DNA,方法对比试验显示无显著差别;国产自动提取系统的重复性良好,定量检测的灵敏度及线性范围与现行方法一致;抗干扰能力强,溶血及脂血等常见干扰物对HBV DNA提取无干扰。结论:国产磁珠法核酸自动提取系统对血清HBV DNA的提取效果良好,操作简单,自动化程度高,重复性好,适宜用于临床HBV DNA检测前处理的核酸提取。
- 易勇赵焕生贾莉萍魏平尹玉峰聂棱敬华
- 关键词：磁珠HBVDNA
