北京市科技计划项目(H030230280410)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：王江华魏来姜颖王慧芬孙薇更多>>
- 相关机构：北京大学军医进修学院解放军第302医院更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法被引量：2
- 2006年
- 利用二维差异凝胶电泳技术(two-d im ensional d ifferential in-gel electrophoresis,2D-D IGE)研究肝癌细胞与正常细胞的差异时应先对其蛋白样品进行标记系统评估,以确保正式实验的成功。在细胞水平上展开蛋白质组研究应尽可能提取到细胞的所有蛋白,为此本研究先比较了机械刮除法、胰酶消化法和PBSE消化法收获肝癌细胞后的细胞形态与蛋白得率,结果显示PBSE消化法收集肝癌细胞时细胞形态完整,提取的蛋白得率最高。然后将提取的细胞蛋白经D IGETM试剂盒的3重荧光(Cy2、Cy3、Cy5)标记后再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向电泳(2DE,two-d im ensional electrophoresis)。前者图像使用Im ageQuant软件进行分析,结果说明肝癌细胞蛋白提取液与该染料能相互兼容,样品得到了有效的标记。2DE的扫描图像使用DeCyder 5.0软件的胶内分析(d ifferential in-gel analysis,D IA)和胶间分析(b iological variation analysis,BVA)模式,结果表明,Cy3和Cy5标记的蛋白质定量结果基本一致,但该染料标记肝癌细胞蛋白后会造成极少量蛋白出现位置偏差,给蛋白定量带来一定的误差影响,而BVA中的反标策略能够有效纠正这种由于不同荧光标记带来的定量误差。总之,本研究首次报道了用同一肝癌样品进行不同荧光标记后进行2DE的评估方法,该方法支持了D IGE体系定量的可靠性,而且能给出定量的误差范围,完善了评估体系,为D IGE技术平台的质量控制提供了参考。
- 方勤美孙薇焦丽燕钱小红姜颖夏春贺福初
- 关键词：肝癌细胞蛋白提取
- 神经胶质成熟因子β对肝星状细胞活化和肝纤维化的影响被引量：1
- 2007年
- 目的了解IFN β-1a抑制肝星状细胞活化新的作用分子，并进一步验证该分子与HSC活化和肝纤维化的关系。方法LX-2细胞经2000U／ml IFN β-1a处理48h后，采用二维电泳技术对IFN β-1a处理和未处理的LX-2细胞蛋白质进行分离，质谱鉴定IFN β-1a处理前后LX-2细胞中差异表达超过2倍的蛋白点。对于鉴定出的差异表达分子，通过Western blot和RT-PCR方法验证其在LX-2细胞中、肝组织中以及肺、脑、脾、肾、心组织中的表达情况。结果与对照组相比，IFN—β-1a处理组LX-2细胞中有31个差异蛋白点，其中1个特异表达、5个上调表达、25个下调表达。其中特异表达的蛋白经鉴定为神经胶质成熟因子β（GMFβ）；表达上调的5个点鉴定出2种蛋白，为组蛋白H2A和β-原肌球蛋白；表达下调的25个点鉴定出18种蛋白。进一步对GMFβ的表达情况进行验证发现，与对照组相比，经IFN β-1a作用后的LX-2的GMF β蛋白表达明显（t=1．81，P〈0．01）；大鼠正常肝组织中GMFβ的蛋白和mRNA相对表达量明显高于肝硬化肝组织（蛋白相对表达量为1．81对比0．10，mRNA相对表达量为0．85对比0．12，t值分别为2．53，2．13，P〈0．01）；GMFβ的蛋白和mRNA在大鼠的脑、脾、肝、肾组织中明显表达，而肺、心组织中无表达（t值分别为1．91、1．94，P〈0．01）。结论IFN β-1a处理后的LX-2的蛋白质表达存在差异，这些差异表达的蛋白质可能参与了IFN β-1a对HSC活化的抑制以及HSC的凋亡。IFN β-1a处理后的LX-2以及正常大鼠的肝组织中GMFβ有明显的表达，GMFβ可能抑制HSC的活化以及抑制肝纤维化的进展。
- 饶慧瑛王江华刘峰费然刘志达魏来
- 关键词：蛋白质组干扰素Β肝星状细胞
- 乙肝病毒HBsAg-EGFP融合蛋白真核表达载体构建及稳定转染Chang Liver细胞系的建立被引量：2
- 2008年
- 目的 构建可表达乙型肝炎病毒（HBV）HBsAg-EGFP融合蛋白的真核表达载体；获得重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系。方法 利用PCR技术从HBV基因组中扩增出HBsAg基因片段，BamH I／EcoR I双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP-N1真核表达载体，转化TG1菌株感受态细胞，获得阳性重组质粒pEGFPN1-HBsAg。将阳性克隆用脂质体法转染Chang Liver细胞，经持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系。结果 成功构建了真核表达载体pEGFPN1-HBsAg；建立了其重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系。结论 重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系可表达HBsAg-EGFP融合蛋白；该细胞系可以用于筛选HBsAg转染细胞后，差异表达的蛋白质研究，为深入研究HBsAg可能的致病机制提供依据。
- 牟劲松王慧芬王江华潘孝本张璐魏来
- 关键词：乙型乙型转染细胞系
- 蛋白质组学在肝病研究中的应用
- 2008年
- 随着人类基因组工作框架的完成和后基因组时代的到来，生命科学研究的重点从基因组学转向蛋白质组学（proteomics）。为了真正了解人类疾病，就必须认识具有生命活动执行功能的蛋白质^[1]。
- 牟劲松王慧芬
- 关键词：蛋白质组学肝病后基因组时代生命活动人类基因组人类疾病
