国家自然科学基金(30200005)
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 相关作者：陶美凤李文成邓子新肖亮孔会利更多>>
- 相关机构：华中农业大学上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 高G+C含量模板进行PCR扩增的高效缓冲液体系的建立被引量：9
- 2006年
- 高G+C含量模板进行PCR扩增时,往往通过添加增强剂如甘油、DMSO、甲酰胺等来提高扩增效率,但是目前研究单个增强剂对PCR影响的较多,而研究增强剂组合的不多,而且关于增强剂对聚合酶保真度的影响的研究也不够充分。本研究通过正交试验对不同增强剂组合的效应进行了探讨,建立了3个对高G+C含量模板进行PCR扩增的高效缓冲液体系,并且对其中2个进行研究发现它们可以提高Taq聚合酶扩增的保真度,因而具有较广的应用前景。
- 孔会利王超肖亮李文成
- 关键词：保真度PCR
- 一个链霉菌中微型转座子系统的构建
- 2006年
- 针对链霉菌中现有转座子系统的一些缺陷,构建了一个链霉菌中的微型转座子质粒pHL265,它携带的转座酶基因tnpA在转座子mini-Tn4560A外部,降低了发生二次转座的可能性,并带有大肠杆菌与链霉菌进行属间接合转移的起始位点oriT,可通过接合转移的方式将其从大肠杆菌导入到链霉菌中。利用该转座子系统转座筛选得到天蓝色链霉菌M145的约1 000株转座突变株。选取其中的8株,经Southern杂交验证可知,该转座子的转座基本具有随机性,并在宿主DNA中稳定存在。此系统为链霉菌功能基因组的研究提供了新的技术手段。
- 王志耘李文成陶美凤
- 关键词：链霉菌
- 天蓝色链霉菌M145中bldA依赖性突变的遗传定位与分析被引量：1
- 2006年
- bldA编码天蓝色链霉菌中识别UUA密码的tRNA,大部分菌株的生长不需要bldA功能。M145菌株发生了突变,使bldA成为必需基因。本研究以M145和1258等菌株为亲本,通过3轮杂交筛选构建了菌株LY3,作为遗传定位bldA依赖性(bldA-dependent,bad)突变的亲本之一。用LY3与1258杂交,筛选了217个重组子并鉴定其基因型。对217个重组子的基因型进行遗传分析,将bad突变定位于天蓝色链霉菌染色体SCO3934与SCO4659基因之间的758 kb区域。
- 赵丽云CHATER K F陶美凤
- 关键词：BLDA
- 阿维链霉菌NRRL8165中bldA_a的克隆及其对形态分化与阿维菌素合成的影响被引量：4
- 2007年
- bldA编码天蓝色链霉菌中唯一有效识别UUA亮氨酸密码的tRNA(Leu)UUA。通过构建阿维链霉菌NRRL8165基因组亚文库,筛选得到含有阿维链霉菌bldAa及其侧翼序列的克隆。利用λRED介导的PCRtargeting技术构建了bldAa的基因置换质粒pHL358,将其跨属接合转移进入阿维链霉菌NRRL8165,筛选得到bldAa基因置换菌株TW10。TW10表现为光秃表型,表明bldAa调控阿维链霉菌的形态分化。摇瓶发酵TW10菌株并对发酵产物进行HPLC分析,发现TW10菌株均不合成阿维菌素组分,提示阿维菌素的合成受bldAa调控;考察阿维菌素生物合成基因簇,其中aveA3和aveR含有TTA密码,它们的翻译可能受bldAa调控,与实验结果一致。
- 陶韦新吴菁邓子新陶美凤
- 关键词：BLDA阿维链霉菌基因置换阿维菌素
- NsdB——天蓝色链霉菌A3(2)中一个负调控抗生素产量蛋白的研究(英文)被引量：8
- 2007年
- TPR(tetratricopeptide repeat)是在很多蛋白中均被发现到的一个含有34个氨基酸的蛋白重复序列,其基本功能是参与蛋白间的相互作用。天蓝色链霉菌A3(2)中有70个蛋白含有类TPR结构域,NsdA是其中的一个,研究发现该蛋白对天蓝色链霉菌的产孢和产素都有负调控作用。本研究中发现基因SCO7252和SCO1593编码含TPR结构的蛋白,中断SCO7252基因后菌株放线紫红素和钙依赖抗生素产量均提高,但形态分化没有明显变化,基因SCO1593中断后菌株在产孢产素及形态等各方面均未受到影响。基因SCO7252被命名为nsdB,RT-PCR分析表明,该基因在生长30h时开始表达。通过生物信息分析表明,天蓝色链霉菌的70个含类TPR结构的蛋白中有32个仅含该结构域,有25个另外含有DNA结合区域,这些暗示着它们可能直接控制基因的表达。
- 章丽李文成赵春华Keith F.Chater陶美凤周秀芬邓子新
