浙江省科技厅创新团队建设与人才培养项目(2009R500273)
- 作品数：4 被引量：36H指数：3
- 相关作者：俞晓平申屠旭萍马正于冰刘金秀更多>>
- 相关机构：中国计量学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅创新团队建设与人才培养项目浙江省公益性技术应用研究计划项目杭州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学轻工技术与工程更多>>
- HPLC法测定发酵液中丰加霉素的研究被引量：6
- 2013年
- 丰加霉素是核苷类抗生素的一种,多由链霉菌发酵产生.本研究建立了放线菌发酵液中丰加霉素的高效液相色谱检测方法,采用SHIMADZU C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),甲醇为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱,洗脱程序为0～15min,5%～37%A;15～30min,37%～100%A;30～40min,100%～5%A;流速1.0mL·min-1,检测波长279nm,柱温30℃.该色谱条件下,丰加霉素能得到良好的分离,定量法的线性范围为5～150mg·L-1(r=0.999 7),平均加样回收率为101.01%,RSD(%)为0.62.本测定方法为今后高产丰加霉素的菌种选育和发酵工艺等研究提供了一套准确的检测技术.
- 申屠旭萍于冰李丹婷王康泉俞晓平
- 关键词：高效液相色谱梯度洗脱
- 透明颤菌血红蛋白基因在淀粉酶产色链霉菌中的表达及对合成丰加霉素的影响被引量：2
- 2013年
- 【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato-chromogenes 1628中的表达以促进丰加霉素的生物合成。【方法】首先以gfp为报告基因检测红霉素抗性基因启动子Perm*在S.diastatochromogenes 1628中的转录活性,再利用PermE*实现vgb的异源表达。【结果】在荧光显微镜下,重组菌1628-GFP菌丝可发出稳定明亮的绿色荧光,表明启动子PermE*在菌株1628中可有效启动外源基因的表达;通过一氧化碳结合差光谱分析显示VHb具有生物学活性;摇瓶实验表明:与原始菌株相比,重组菌可促进丰加霉素产量的提高,在中度和高度限氧条件下促进效果尤为明显,提高幅度分别为48.9%和104.5%。PCR和发酵效价检测显示重组菌具有良好的遗传稳定性。【结论】成功实现了vgb在S.diastatochromogenes 1628中的表达,有效提高了其丰加霉素的合成水平,为丰加霉素的工业化生产提供了基础条件。
- 马正刘金秀申屠旭萍边亚琳俞晓平
- 关键词：绿色荧光蛋白透明颤菌血红蛋白
- 脐孢木霉菌Trichoderma brevicompactum 0248 tri5基因片段的克隆及表达分析被引量：3
- 2013年
- 脐孢木霉菌Trichoderma brevicompactum能合成木霉素等单端孢霉烯类化合物,而基因tri5编码的单端孢霉二烯合酶是合成途径中的关键酶,它催化反式法呢基焦磷酸(tFPP)合成单端孢霉二烯。为分析基因tri5与木霉素合成的关系,本研究从脐孢木霉菌0248中克隆了基因tri5片段,并运用实时荧光定量PCR技术分析了基因tri5在不产木霉素培养基和产木霉素培养基中的差异表达。在相同培养时间下,基因tri5在不同产木霉素状态间的表达量差异显著;在培养96 h时基因tri5在2种培养基中均达到最大值,基因tri5在产木霉素状态下的表达量是不产木霉素状态下的107.18倍。通过检测产木霉素培养基中基因tri5表达量与木霉素含量的变化,结果显示木霉素的含量随着基因tri5表达量的增加而不断增加,在培养96 h时达到最大值118.71 mg L 1,推测基因tri5表达量与木霉素合成相关。该研究为基因tri5功能的进一步研究和对脐孢木霉菌0248进行基因工程菌改造奠定了理论基础。
- 詹晓奂申屠旭萍刘卫平马正俞晓平
- 关键词：木霉素基因克隆实时荧光定量PCR
- 黄瓜枯萎病拮抗放线菌筛选及其生防作用鉴定被引量：25
- 2012年
- 通过高效筛选法从不同环境采集的土样中分离出44株对黄瓜枯萎病菌有拮抗作用的菌株,通过平板对峙法初筛和复筛得到一株具有较高拮抗活性的放线菌XF-7。研究了菌株XF-7发酵液对黄瓜枯萎病病原菌孢子萌发、菌丝生长及黄瓜种子发芽的影响,以及对苗期枯萎病的生防效果。结果表明:菌株XF-7发酵液对黄瓜枯萎病菌的菌丝生长及孢子萌发均有明显的抑制作用,可促进黄瓜种子发芽,且对黄瓜苗期枯萎病的防治效果显著,防效达79.57%。经16S rDNA序列分析,发现菌株XF-7与毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini)的16S rDNA序列同源性达100%。结合形态特征和生理生化特性,将菌株XF-7鉴定并命名为Streptomyces toxytricini XF-7,在GenBank中该菌株的序列登录号为JN315670。
- 刘金秀马正申屠旭萍于冰俞晓平
- 关键词：黄瓜枯萎病拮抗放线菌菌株鉴定生防作用
