江苏省教育厅自然科学基金(08KJB320003)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- Tipα基因原核表达质粒的构建及其诱导条件的优化被引量：1
- 2011年
- 目的构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tipα)基因的原核表达载体,并优化诱导实验条件使其在大肠杆菌中表达。方法提取幽门螺杆菌(H.pylori)26695菌株总DNA,用PCR方法扩增位于H.pylori0596的Tipα基因编码序列。将Tipα基因与pET29a载体同时经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切、纯化及连接后,构建pET29a-Tipα原核表达质粒,转化至宿主菌Top10F'中。优化实验条件使pET29a-Tipα原核质粒表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot方法进行鉴定。结果 pET29a-Tipα原核表达质粒经双酶切证实插入片段分子量为519 bp DNA条带,测序结果与H.pylori0596的Tipα基因编码序列相一致。当诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为1.0 mmol/L,30℃诱导培养4 h时,诱导目的蛋白表达量最高。Western blot结果证实,表达的重组蛋白可与Tipα抗体产生分子量约为21.8 KD的特异性条带。结论成功构建了pET29a-Tipα原核表达质粒,并优化实验条件使其在大肠杆菌中表达了Tipα重组蛋白。
- 郝波程文芳张国新施瑞华
- 关键词：幽门螺杆菌原核表达载体
