国家高技术研究发展计划(2003AA2Z3532) 作品数:8 被引量:25 H指数:4 相关作者: 王世立 韩金祥 王国栋 葛鲁娜 王素红 更多>> 相关机构: 山东省医药生物技术研究中心 济南市第四人民医院 山东省医学科学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 化学工程 更多>>
rhBMP-7对腺嘌呤致大鼠慢性肾衰竭的防治作用 骨形态发生蛋白-7 (BMP-7)在促进肾脏发育、维持肾脏正常生理功能等方面发挥着重要的作用。在多种慢性肾脏疾病的动物模型中,补充外源性骨形态发生蛋白-7治疗慢性肾功能衰竭都取得较好的治疗效果。本实验探讨重组入骨形态发生... 迟名峰 韩金祥 王世立关键词:RHBMP-7 慢性肾衰竭 重组人成骨蛋白-1骨修复材料的毒性研究 2006年 目的探讨重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)明胶海绵骨修复材料的体内毒性反应,为其临床应用奠定基础。方法选用昆明种小鼠80只,雌雄各半。随机分成对照组和观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组20只,均予乙醚麻醉,无菌条件下将rhOP-1/明胶海绵复合物置于观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠股部肌间隙,剂量分别为3、10、25 m g,术后不用抗生素。正常饲养2、4周时观察各组血液、血生化指标改变及主要脏器的组织形态和脏器系数变化。结果各观察组术后3 d活动力差,食欲减少,7 d后恢复。观察组与对照组各血液学指标结果无统计学差异;血生化指标中除蛋白含量、ALT、A ST观察组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)外,其余指标未见异常;4周时两组血液、血生化指标及组织学形态、脏器系数差异无统计学意义(P均>0.05)。结论rhOP-1明胶海绵骨修复材料体内使用无毒、安全、可靠。 赵甜娜 韩金祥 王世立 贾金秋 张维东 栾中华关键词:毒理学 骨修复材料 骨形态发生蛋白-7的研究进展 被引量:7 2004年 骨形态发生蛋白 7是转化生长因子 β (TGF β)超家族中的一员 ,最初因其能促进造骨细胞的分化和诱导异位骨的形成而得名。随着研究的深入 ,发现BMP 7的生物学功能不仅限于其诱导成骨活性 ,而且涉及全身许多器官的发育和形成 ,在骨、肾、肾上腺、膀胱和脑组织以及某些骨肉瘤细胞中都有表达。在许多肾脏疾病模型中 ,可以阻止肾小管间隙纤维化保护肾脏功能。 王国栋 王世立 韩金祥关键词:骨形态发生蛋白-7 骨诱导 纤维化 表达重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的发酵及表达产物的纯化 被引量:5 2006年 目的:研究表达重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的发酵和表达产物的纯化工艺。方法:利用16L发酵罐发酵培养工程菌,设定了溶氧、搅拌速度、诱导时机、补料和培养基pH值等发酵条件;通过包涵体洗涤、离子交换层析法纯化目的蛋白。结果:工程菌目的蛋白质表达量占菌体总蛋白质的30%以上,纯化后目的蛋白的纯度可达98%。结论:建立了大肠杆菌高效表达人骨形态发生蛋白-7的发酵及纯化工艺。 王国栋 王世立 韩金祥 张翠 张更林 车婧关键词:发酵 纯化 大肠杆菌 可溶性重组人成骨蛋白-1的制备 2008年 目的制备可溶性重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),并尝试制备注射制剂。方法rhOP-1工程菌经发酵表达,收集菌体,提取包涵体,用SP-FF阳离子层析柱纯化。取纯度达95%以上的rhOP-1蛋白,透析复性,加入L-精氨酸作为复性助溶剂,制备成冻干粉末,以不加助溶剂的rhOP-1为对照。将制备的冻干粉末复溶后,观察rhOP-1溶解性,并检测其活性。结果复性液中加入L-精氨酸的复性rhOP-1蛋白浓度为0.5mg/ml,回收率可达60%,冻干粉末复溶后,溶解性及rhOP-1活性良好。结论用此复性方法制备的rhOP-1溶液作为注射剂,有较好的应用前景。 王素红 韩金祥 王世立 张翠 葛鲁娜 丁宁关键词:L-精氨酸 复性 注射剂 rhBMP-7对腺嘌呤致大鼠慢性肾衰竭防治作用的初步研究 被引量:1 2010年 目的:探讨rhBMP-7对腺嘌呤致大鼠慢性肾衰竭的防治作用。方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、模型对照组、rhBMP-7预防组、rhBMP-7小、大剂量治疗组。除正常组外,其余各组按300mg.kg-1.d-1用腺嘌呤灌胃,rhBMP-7预防组在灌胃的同时按300μg.kg-1隔日腹腔注射rhBMP-7。在d 35各组停止灌胃并处死正常组、模型组、rhBMP-7预防组的大鼠,取血,作生化指标及血液指标检测,并留取肾组织。从d 36开始,模型对照组按1 mL.kg-1的剂量隔日腹腔注射生理氯化钠溶液,rhBMP-7小、大剂量治疗组分别以100和300μg.kg-1隔日腹腔注射rhBMP-7。在d 70处死大鼠,取血,作生化指标及血液指标检测,并留取肾组织。结果:rhBMP-7在不同程度上降低慢性肾衰大鼠的BUN,Cr,UA,磷含量,增加钙含量,改善贫血,降低肾脏指数,减轻肾衰大鼠的肾脏损伤。结论:rhBMP-7对腺嘌呤致大鼠慢性肾衰竭有一定的防治作用,为探索治疗肾功能衰竭提供新的途径。 迟名锋 韩金祥 王世立 郑秀峰 苑广盈关键词:重组人骨形态发生蛋白-7 慢性肾衰竭 腺嘌呤 离子交换色谱法去除rhOP-1蛋白溶液中内毒素的方法 被引量:6 2008年 目的建立一种去除重组人成骨蛋白(recombination human osteogenic protein-1,rhOP-1)溶液中内毒素的方法。方法提取包涵体蛋白,经纯化、复性得rhOP-1溶液。此溶液经DEAE离子交换色谱柱,通过线性增加盐浓度方式先将蛋白洗脱,内毒素则由较强盐浓度和NaOH洗脱。收集洗脱峰,用鲎试剂检测其内毒素含量。结果凝胶法检测rhOP-1溶液在DEAE-琼脂糖色谱柱上样前内毒素含量在限值以上,DEAE-琼脂糖色谱柱洗脱峰的蛋白内毒素含量降到限值以下,而经0.22μm滤膜除菌的蛋白溶液中内毒素含量在限值以上。结论rhOP-1蛋白溶液经DEAE-琼脂糖色谱柱洗脱,可得低于内毒素限值的蛋白溶液,因此这种方法可作为一种去除rhOP-1缓冲液中内毒素的方法。 王素红 韩金祥 王世立 葛鲁娜 孙燕关键词:离子交换色谱 内毒素 鲎试剂 重组人成骨蛋白-1的离子交换及分子排阻色谱法纯化及其复性研究 被引量:6 2005年 经发酵大量表达重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)。SDS-PAGE发现rhOP-1表达量占细菌总蛋白的35%。菌体经裂解、洗涤后,用8mol/L尿素溶解包涵体,离心后提取目的蛋白。经离子交换色谱法对变性状态下的目的蛋白进行纯化,绝大部分杂蛋白被去除,目的蛋白纯度达93%以上。为进一步提高目的蛋白浓度,采用分子排阻色谱法对目的蛋白进行再次纯化,纯度达98%以上。利用降低尿素梯度的方法对纯化的蛋白进行复性,二聚体的含量在50%以上。Westernblot证明了复性后的目的蛋白以单体和有活性的二聚体的形式存在。 赵甜娜 王世立 韩金祥关键词:包涵体 明胶海绵复合重组人成骨蛋白-1的骨修复材料免疫原性及肌肉刺激性实验研究 2006年 目的考察以明胶海绵为载体的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)骨修复材料的免疫原性及肌肉刺激性。方法以明胶海绵为载体制备rhOP-1骨修复材料,间接ELISA方法观察该骨修复材料植入小鼠体内的免疫原性反应,病理切片观察其对周围肌肉的影响及形态变化。结果ELISA结果表明,此法制备的以明胶海绵为载体的rhOP-1骨修复材料未引起小鼠的特异性抗体产生。植入部位肌肉虽出现炎细胞浸润现象,但炎症反应呈可逆性,未发现肌肉组织的坏死,且组织钙化现象明显。结论明胶海绵复合rhOP-1的骨修复材料在免疫原性和肌肉刺激性方面安全可靠。 赵甜娜 韩金祥 王世立 吴坚美关键词:免疫原性