国家自然科学基金(30570624)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：许予明郭建新宋波张瑞张世杰更多>>
- 相关机构：郑州大学第一附属医院郑州大学河南职工医学院更多>>
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- β-BME与BDNF联合RA体外诱导成人MSCs分化为神经元样细胞对比观察被引量：2
- 2009年
- 目的寻找体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的良好方法。方法分别采用β-巯基乙醇(BME)、脑源性神经营养因子(BDNF)和维A酸(RA)为诱导剂,体外诱导人MSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化SP法对诱导后细胞进行鉴定。结果两种方法诱导6 h后,MSCs均呈现神经元样细胞改变,伸出突起,类似树突和轴突。该细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)均呈阳性表达,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)均呈阴性表达。其中β-BME诱导6 h后神经元样细胞分化率为68.32%±2.58%,BDNF+RA诱导6 h后神经元样细胞分化率仅为42.45%±3.26%,两组比较,P<0.05。但β-BME诱导后分化细胞存活时间较短,而BDNF+RA诱导后分化细胞存活时间较长。结论两种诱导方法均可在体外定向诱导人MSCs转化为神经元样细胞,神经元分化率及存活时间不同。
- 郭建新许予明宋波
- 关键词：神经元脑源性神经营养因子维A酸
- 小鼠SRY同源盒基因SOX1的克隆及其真核表达载体pEGFP-C_3-SOX1的构建
- 2006年
- 目的:克隆小鼠SRY同源盒基因SOX1的全长cDNA,构建其携带增强型荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C3-SOX1,为进一步研究SOX1在间充质干细胞神经分化中的作用奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从小鼠早期胚胎中扩增带有EcoRⅠ和HindⅢ双酶切位点的SOX1 cDNA片断,与pGEM-T载体连接后转化感受态细菌JM109,然后通过蓝白筛选、酶切技术筛选、鉴定出阳性菌落并进行DNA测序。用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切获得目的片断,再与EcoRⅠ和HindⅢ双酶切过的pEGFP-C3质粒相连接,重组子转化JM109感受态大肠杆菌,酶切方法鉴定阳性菌落。结果:多酶切及DNA测序结果表明提取及纯化的pEGFP-C3-SOX1质粒含有SOX1 cDNA碱基片段,方向及大小正确。结论:从小鼠胚胎中可成功克隆SOX1全长cDNA,并构建其真核表达载体pEGFP-C3-SOX1。
- 郭建新许予明赵国强张瑞宋波张世杰张世峰李京红
- 关键词：真核表达载体
- 重组Mash1慢病毒表达载体的构建
- 2006年
- 目的:克隆小鼠Mash1基因的全长cDNA,构建其慢病毒表达载体Lentivirus-Mash1,为进一步研究Mash1在神经发育及干细胞神经分化中的作用奠定基础。方法:应用RT-PCR从小鼠13d胚胎中扩增出Mash1cDNA片段,经回收纯化与pGEM-T载体连接并转化感受态细菌J M109,通过蓝白筛选、PCR扩增和双酶切鉴定出阳性菌落,并对其进行基因测序。BamHⅠ和XholⅠ双酶切pGEM-T-Mash1和Lentivirus获得的目的基因双粘片段与Lentivirus双粘线性质粒相连接,转化J M109,酶切方法鉴定重组阳性菌落。结果:PCR扩增、酶切分析及序列测定证实成功获取Mash1cDNA克隆;酶切鉴定证实Lentivirus-Mash1含有大小正确的正向Mash1cDNA片段。结论:成功建立了小鼠Mash1cDNA克隆并构建了慢病毒表达载体Lentivirus-Mash1。
- 张瑞许予明赵国强郭建新宋波张世杰韩志强
- 关键词：慢病毒表达载体RT-PCR基因
- 骨髓间充质干细胞、过表达Nurr1蛋白的骨髓间充质干细胞与胎脑细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较被引量：5
- 2011年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)和过表达Nurr1蛋白的MSC移植治疗帕金森病(Parkinson disease,PD)的效果。方法携带Nurr1基因的真核表达质粒pcDNA3.1/Nurr1转染大鼠MSC,构建稳定高表达Nurr1蛋白的MSC克隆(Nurr1-MSC);分别将Nurr1-MSC(Nurr1-MSC组)、MSC(MSC组)、胎鼠中脑腹侧细胞(VMC组)及生理盐水(对照组)植入PD大鼠纹状体,检测移植区Nurr1蛋白表达,观察移植前、后PD大鼠旋转行为变化,评估不同细胞移植治疗PD大鼠效果。结果移植术后8周内,Nurr1-MSC持续高表达Nurr1蛋白,3种移植细胞均明显改善PD大鼠症状(P<0.01),VMC组疗效最佳且持久;Nurr1-MSC组4周内效果优于MSC组(P<0.05),随时间延长其疗效逐渐减弱,至术后8周时与MSC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MSC及Nurr1-MSC移植PD大鼠纹状体后均可改善PD症状,Nurr1-MSC治疗PD大鼠模型效果短期内优于MSC,长期效果与MSC接近,胎鼠中脑腹侧细胞治疗效果最佳。
- 徐浩文孙石磊
- 关键词：帕金森病NURR1基因骨髓间充质干细胞
