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小菜蛾成虫蛋白质组双向电泳图谱的建立及条件优化被引量：4: 2011年; 通过选择合适的pH范围及长度的胶条,并对蛋白样品上样量、等电聚焦伏小时数、银染时间及样品前处理等进行优化,建立了以双向电泳技术为基础的小菜蛾成虫蛋白质组学研究方法.优化结果表明使用17 cm、pH3~pH10的非线性胶条可以得到分辨率较高的胶图.该方法的建立为小菜蛾抗药性差异蛋白质组学研究奠定了基础.; 张娜娜许勤李风良程罗根; 关键词：小菜蛾双向电泳蛋白质组学

溴氰菊酯胁迫下小菜蛾泛素化蛋白的分析与鉴定: 2013年; 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western Blot和LC MS/MS技术,对在溴氰菊酯胁迫下的小菜蛾(Plutellaxylostella)四龄幼虫的泛素化蛋白(Ubiquitinated protein)的组分进行分析,结果表明小菜蛾溴氰菊酯敏感品系与小菜蛾溴氰菊酯抗性品系里的泛素化蛋白表达量有显著差异.本实验成功证明了在药剂胁迫下小菜蛾泛素化蛋白存在表达上的差异,该研究结果为分析昆虫细胞中泛素的功能及其对昆虫生理、生化和环境胁迫等方面的调节作用提供了参考.; 杜亚琼张宏李凤良程罗根; 关键词：小菜蛾溴氰菊酯

小菜蛾泛素基因的克隆与分析被引量：1: 2013年; 运用RT-PCR技术,从小菜蛾幼虫总RNA反转录产物中扩增出泛素基因的cDNA序列.利用RNA干扰(RNAi)技术将一段体外合成的与小菜蛾泛素延伸蛋白基因UBA52同源的dsRNA注入四龄幼虫体内,以抑制小菜蛾UBA52基因的表达.半定量RT-PCR结果显示,72 h后沉默组小菜蛾幼虫体内UBA52基因的mRNA表达量显著下调.本实验成功沉默小菜蛾泛素基因,此RNAi干扰体系的建立为利用此技术分析小菜蛾及其他昆虫基因的功能提供了参考.; 张宏杜亚琼李凤良周洲顾曙余程罗根; 关键词：小菜蛾 RNA干扰基因沉默

小菜蛾溴氰菊酯敏感和抗性品系蛋白质表达谱的比较分析(英文)被引量：1: 2013年; 杀虫剂抗性是害虫防治中的一个主要挑战。为有效治理抗性,我们必须了解杀虫剂诱导的害虫生理生化变化。目前害虫抗药性的一些机理已经清楚,但更多的相关机制还有待探究。本研究通过蛋白质组学方法检测了小菜蛾Plutella xylostella溴氰菊酯敏感和抗性品系间蛋白质组的表达差异。结果显示:SDS-PAGE胶上有大约300个蛋白差异点,其中23个蛋白点具2.5倍以上的表达差异,通过MALDI-TOF-MS,我们成功鉴定出8个蛋白,其中包括化感蛋白CSP2、铜锌超氧化物歧化酶和peroxiredoxin样蛋白。通过实时定量PCR(real-time quantitativePCR,qPCR)分析了其中5个蛋白的mRNA表达水平,结果表明mRNA表达水平不能真实反映蛋白的表达水平。免疫印迹验证了双向电泳中SOD1的表达差异。本研究有力地证明溴氰菊酯诱导小菜蛾成虫蛋白质组表达变化,这为进一步筛选抗性靶标提供很大的帮助。; 张娜娜张宏程晨李凤良高少奇程罗根; 关键词：小菜蛾溴氰菊酯蛋白质组

溴氰菊酯胁迫下小菜蛾幼虫体内差异表达蛋白的分析被引量：2: 2014年; 小菜蛾Plutella xylostella L.是世界性十字花科蔬菜的主要害虫,已对多种杀虫剂产生抗性,其中以对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性发展最快。溴氰菊酯是拟除虫菊酯杀虫剂中杀虫毒力最强的品种。我们前期的研究发现,小菜蛾溴氰菊酯敏感品系(DS)和抗性品系(DR)成虫期的蛋白质双向电泳(2-DE)图谱存在显著差异。本研究通过双向电泳技术从小菜蛾4龄幼虫中分离出89个有明显差异的蛋白点,从中选出30个进行串联质谱(MALDI-TOFMS)实验,并利用蛋白质数据库检索这些在抗性品系中表达而在敏感品系中不表达或者不同品系中差异表达的蛋白质的归属、性质和功能,最终成功鉴定出10个蛋白。对其中的3个基因进行了荧光定量PCR验证,发现这些蛋白质在mRNA水平的表达与在蛋白水平的表达是一致的。这些在溴氰菊酯胁迫下差异表达的蛋白为研究溴氰菊酯的作用靶标和作用机理,以及筛选与其抗性相关的蛋白质提供了依据。; 李瑾李凤良焦东旭李娜程罗根; 关键词：小菜蛾蛋白质组双向电泳溴氰菊酯

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国家自然科学基金(31071974)