国家自然科学基金(30871176)
- 作品数：3 被引量：17H指数：3
- 相关作者：蒋素华丁小强邹建洲方艺朱加明更多>>
- 相关机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“211”工程上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 通过短时间预缺血改变肾小管上皮细胞命运诱导肾脏缺血耐受被引量：5
- 2011年
- 目的探讨短时间缺血预处理在诱导肾脏缺血耐受中的作用，及其对肾小管上皮细胞坏死、凋亡、增殖等的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组（Sham），只分离两侧肾蒂，不进行夹闭；单纯缺血再灌注组（I／R），第0天假手术，第4天用无损伤动脉夹夹闭两侧肾蒂40min，然后恢复灌注；缺血预适应组（IPC），第0天预缺血20min，第4天再次缺血40min。PAS染色观察肾组织形态学，透射电镜观察小管上皮细胞超微结构，原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况，免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果与单纯缺血再灌注组相比，缺血预适应组。肾脏功能和病理性损伤显著减轻（P〈0．01）；大鼠死亡率从33％降低为0；肾小管上皮细胞凋亡和坏死显著减少（P〈0．05），细胞增殖（PCNA阳性）显著增多（P〈0．01）。结论短时间缺血预处理能诱导肾脏耐受长时间缺血，减少小管上皮细胞死亡和促进其及时增殖修复可能是预缺血发挥肾脏保护作用的机制之一。
- 蒋素华邹建洲刘红任丽许迅辉陈越丁小强
- 关键词：肾小管缺血耐受坏死
- 小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α加重缺氧状态肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死被引量：3
- 2010年
- 目的探讨沉默缺氧诱导因子1α（HIF—1α）对缺氧状态肾小管上皮细胞增殖、凋亡和坏死的影响。方法利用氯化钴模拟缺氧状态，并应用小分子RNA干扰（siRNA）技术沉默HIF—1α基因表达。将细胞分成5组，分别是正常培养组、缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF—1αsiRNA组。用MTT试验检测细胞的生长抑制率；用TUNEL法、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（aspase）-3蛋白定量法检测细胞的凋亡率；检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力来测定细胞的坏死情况；用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞HIF—1α、HIF-2α、葡萄糖转运蛋白1（Glut-1）、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA和蛋白表达水平。结果（1）siRNA的细胞转染效率为95％-100％。在常氧条件下，终浓度100nmol／L的HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率为70％；在缺氧条件下，HIF—1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率达到97％。（2）HIF-1α siRNA组细胞的生长抑制率显著高于其它组（P〈0．05）；细胞凋亡率在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF—1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P〉0．05）；HIF—1α siRNA组细胞培养液中LDH水平显著高于缺氧培养组、转染试剂组和阴性对照组（P〈0．05）。（3）HIF—1α siRNA组细胞的HIF—1α、Glut-1、VEGF mRNA和蛋白表达量显著低于缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组（P〈0．05）；而HIF-2α mRNA和蛋白表达在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF—1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞Glut-1和VEGF表达，加重缺氧状态下肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死。
- 陈越蒋素华朱加明钟一红傅辰生刘红方艺丁小强
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基缺氧肾小管上皮细胞
- 5/6肾切除大鼠低氧诱导因子1α和2α在肾内的表达和定位被引量：10
- 2010年
- 目的 探讨慢性肾脏病（CKD）进程中低氧诱导因子（HIF）的肾内表达部位和动态表达变化.方法 雄性SD大鼠行5/6肾切除后,分别于术后第1、2、4、6、8和12周处死大鼠.采集血、尿和肾组织标本,PAS染色观察残肾病理改变;连续切片免疫组化染色观察HIF-1α、HIF-2α在肾脏中的表达部位;Western印迹检测二者的蛋白表达变化;RT-PCR检测靶基因血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶1（HO-1）的mRNA水平变化.结果 （1）大鼠5/6肾切除后第1周出现了短暂的急性肾衰竭[Scr（122.8±22.1）μmol/L],之后Scr下降并进入稳定的慢性肾衰竭阶段[（66.0±3.7）～（66.4±8.4）μmol/L],第6周后Scr进行性升高,残肾皮质出现进行性间质纤维化病变.（2）在肾切除早期阶段（术后第1周末）,HIF-1α和HIF-2α表达即开始增加,其中HIF-1α仅在萎缩扩张的肾小管上皮细胞表达,HIF-2α则表达于血管内皮细胞、间质成纤维细胞和小动脉的平滑肌细胞;至第4和6周,两者表达到达峰值;此后,伴随Scr升高和病理损伤加重,两者表达逐渐下降.（3）HIF靶基因VEGF、HO-1的mRNA在第4和第6周时呈暂时性的高表达.结论 CKD早期肾脏皮质HIF蛋白高表达和靶基因转录增加可能是对肾内缺氧的代偿性反应;CKD终末期HIF表达进行性减少,其在CKD进展中的作用值得进一步研究.
- 俞小芳丁小强朱加明方艺邹建洲许讯辉蒋素华
- 关键词：肾切除术缺氧诱导因子1,Α亚基
