河北省自然科学基金(303528)
- 作品数：6 被引量：4H指数：2
- 相关作者：王庆林周晓春徐大为许倩颜勇更多>>
- 相关机构：承德医学院湖南师范大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脐带血造血干细胞的分离和体外扩增被引量：3
- 2004年
- 目的 :通过对人新鲜脐带血造血干细胞的体外分离 ,探讨不同细胞生长因子的体外培养体系对CD34+ 细胞的扩增作用。方法 :用SCF、FL、GM CSF、IL 3、IL 6、G CSF、TPO组合成不同的实验组 ,对脐血中分离的CD34+ 细胞进行 2 1d的体外培养 ,扩增后经流式细胞仪分析 ,从而求得细胞培养较好的细胞因子组合。结果 :不同细胞因子组细胞培养孔CD34+ 细胞比例在培养 7d时已经开始上升 ,10d时继续上升 ,到 14d达高峰 ,继续培养 18d ,CD34+ 细胞比例逐渐下降 ,但仍高于培养前水平 ,培养 2 1d ,CD34+ 持续下降。总细胞数在第一周即扩增 35 .32倍 ,10～ 14d总细胞数扩增 331.7倍 ,2 1d总细胞数扩增 4 2 2 .2倍 ,SCF +IL 3+IL 6 +TPO +FL细胞因子组合对总细胞扩增最多 ,SCF +IL 3+IL 6 +GM CSF +G CSF对总细胞扩增略少 ,其次是SCF +TPO +FL细胞因子组合 ,最少为SCF +IL 3+IL 6 +GM CSF细胞因子组合 ,细胞涂片染色观察 ,体外培养 14d ,细胞胞体小 ,胞浆量少 ,胞核体积大 ,规则 ,为早期造血干细胞。结论 :体外HSC培养 ,细胞因子对细胞的增殖有明显的作用 。
- 刘云霞许倩马晔徐大为孙立新王庆林周晓春颜勇
- 关键词：脐血CD34+细胞流式细胞术
- 人白细胞介素-3基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建
- 2006年
- 目的:克隆人白细胞介素-3(hIL-3)基因cDNA,构建其真核表达质粒pcDNA3/hIL-3。方法:从人外周血单个核细胞中提取IL-3mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增IL-3基因cDNA,通过T/A克隆法,首先构建pUCm-T/hIL-3,然后构建其真核表达型载体pcDNA3/IL-3。结果:pUCm-T/hIL-3内插入片段序列与hIL-3基因序列一致;pcDNA3/IL-3经酶切鉴定与预期结果一致。结论:成功完成了hIL-3基因克隆和pcDNA3/IL-3真核表达质粒的构建。
- 赵秀荣周晓春米术斌段一娜徐大为王庆林
- 关键词：白细胞介素-3基因克隆真核表达质粒
- 人IL-3基因cDNA的克隆及其在造血干细胞的表达被引量：2
- 2006年
- 目的 克隆人IL-3基因cDNA并转导人脐带血造血干细胞，然后研究这一细胞因子的表达情况，从而为脐血扩增及移植打下理论基础。方法 从人外周血单个核细胞中提取IL-3mRNA，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增IL-3 cDNA，通过T／A克隆法，构建真核表达型载体pcDNA3／IL-3。将pcDNA3／IL-3质粒转导脐血造血干细胞，并于1—7d检测IL-3表达情况。结果 pcDNA3／IL-3重组质粒的目的基因与ID3基因序列相同；pcDNA3／IL-3转导脐血造血干细胞后，经检测能够有效表达。结论 成功克隆了hIL-3并构建重组质粒pcDNA3／IL-3，该质粒转导脐血造血干细胞后，能在短期内有效表达。
- 赵秀荣王庆林徐大为许倩周晓春颜勇
- 关键词：IL-3克隆造血干细胞
- 干细胞因子基因cDNA克隆及其在造血干细胞中的表达
- 2007年
- 目的:克隆人干细胞因子基因cDNA,构建真核表达载体并转导脐带血造血干细胞,观察干细胞因子在造血干细胞中的表达,从而为脐血造血干细胞扩增及移植奠定实验基础。方法:实验于2005-09/12在承德医学院基础医学研究所和湖南师范大学医学院寄生虫病研究室完成。①实验材料:健康胎儿脐带由承德医学院附属医院提供,产妇均签署知情同意书;pcDNA3.1.大肠杆菌E.coliDH5α由本室保存;pUCm-T vector (promega公司);BamHⅠ,XbaⅠ(New England BioLabs公司):②实验方法:无菌收集胎儿脐带,胶原酶+胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化,分离培养人脐带内皮细胞。从上述含脐带内皮细胞的培养液中分离提取干细胞因子mRNA,用反转录-聚合酶链反应扩增干细胞因子cDNA.纯化的PCR产物与载体pUCm-T加入连接反应体系,构建及克隆pUCm-T/SCF质粒,其与pcDNA3.1分别进行BamHⅠ、XbaⅠ双酶切反应,产物经琼脂糖凝胶电泳后回收干细胞因子cDNA和pcDNA3.1片段,构建真核表达型载体pcDNA3.1/SCF。以密度梯度法+免疫磁珠法分离收集人脐血CD34^+造血干细胞.导入pcDNA3.1/SCF,设立未转导对照组。③实验评估:转导后1～7 d检测两组细胞上清液中干细胞因子水平的表达。结果:①人于细胞因子基因cDNA克隆:扩增的人干细胞因子基因cDNA理论上应为690 bp,实际PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,紫外线下可见-预期大小的条带,证明干细胞因子mRNA提取成功,反转录合成的cDNA完整。②分泌型真核表达质粒pcDNA3.1/SCF的构建:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后电泳可见690 bp的插入片段,与干细胞因子基因序列相同,表明分泌型真核表达质粒pcDNA3.1/SCF构建成功。③脐血造血干细胞培养上清中的干细胞因子水平:培养第1～7天.转导pcDNA3.1/SCF的脐血造血干细胞上清中的干细胞因子表达水平均明显高于未转导对照组(P<0.01)。结论:成功克隆人干细胞因子基因cDNA,并构建�
- 胡义王庆林赵秀荣徐大为宋成军彭飞刘年猛许倩周晓春颜勇
- 关键词：干细胞因子基因克隆造血干细胞
- huGM-CSF研究现状
- 2005年
- 王传生王庆林
- 关键词：GM-CSF基因表达调控细胞因子疗法
- IL-3基因cDNA的克隆、测序及其在脐血造血干细胞中的表达
- 2005年
- 目的:克隆人IL- 3基因cDNA ,构建真核表达质粒并转导脐带血造血干细胞(HSC) ,探讨IL -3在HSC中的表达情况,从而为脐血HSC扩增及移植奠定基础。方法:从人外周血单个核细胞中提取IL -3mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应(RT- PCR)扩增IL -3cDNA ,通过T/A克隆法,构建真核表达型载体pcDNA3/IL- 3。将pcDNA3/IL -3质粒转导脐血HSC ,并于1～7d检测IL- 3表达情况。结果:pcDNA3/IL -3重组质粒的插入基因与I-L 3基因序列相同;pcDNA3/IL- 3转导脐血HSC后,经检测能够有效表达。结论:成功克隆了hIL- 3基因cDNA并构建了重组质粒pcD -NA3/IL- 3,该质粒转导脐血HSC后,能在短期内有效表达。
- 赵秀荣王庆林徐大为王传生许倩周晓春颜勇
- 关键词：IL-3克隆测序造血干细胞
