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靶向程序性死亡因子-1配体的RNA干扰慢病毒载体构建及人胰腺癌稳转细胞株的建立被引量：1: 2013年; 程序性死亡因子一1配体（PD—L1）是T细胞共刺激分子B-7家族成员，胰腺癌PD-L1表达水平与不良预后有关^[1]。本研究旨在构建PD-L1的RNA干扰重组慢病毒，并建立稳定低表达PD—L1的胰腺癌Patu8988细胞株。; 赵鑫张光波干文娟李智张子祥李德春; 关键词：RNA干扰重组慢病毒人胰腺癌细胞株配体

慢病毒介导的B7同源性3基因RNA干扰对胰腺癌细胞侵袭转移的影响被引量：1: 2013年; 目的观察敲减B7同源性3（B7一H3）基因对胰腺癌Patu8988细胞侵袭转移的影响。方法将人B7-H3基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体感染胰腺癌Patu8988细胞，建立稳定低表达B7一H3的细胞株。细胞分为3组：空白对照组、阴性对照组和实验组。实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）和流式细胞仪检测B7．H3表达水平，Transwell小室检测细胞侵袭力。3组细胞皮下成瘤后，分别以1mm。的瘤组织移植入胰包膜下建立胰腺癌原位模型，6周后处死，观察肿瘤腹腔转移情况。结果RNAi慢病毒感染后，对B7-H3mRNA和蛋白敲减效率分别达91．6％和88．1％，Transwell实验中实验组每高倍视野过膜细胞数明显少于空白对照组[（37±9）个比（86±17）个，F=22．01，P〈0．05]。裸鼠模型中，实验组腹腔转移瘤重低于空白对照组[（0．26±0．13）g比（1．33±0．38）g，F=48．60，P〈0．01）。结论敲减B7-H3基因表达抑制了胰腺癌细胞的侵袭转移。; 赵华张光波赵鑫; 关键词：胰腺癌 RNA干扰

靶向B7-H3基因RNA干扰慢病毒的构建及人胰腺癌PaTu8988稳定感染细胞株的建立: 2013年; 目的构建靶向人B7同源性3（B7-H3）基因的小发夹RNA（shRNA）的慢病毒载体，并建立稳定感染的胰腺癌PaTu8988细胞株。方法根据GenBank提供的B7-H3cDNA序列，设计4条靶向B7-H3的siRNA序列，构建重组干扰质粒pGCSIL-GFP-B7-H3-shRNA。将重组干扰质粒和过表达B7-H3质粒共同转染293T细胞，经蛋白质印迹法筛选出干扰效果最佳的重组干扰质粒。该质粒经慢病毒包装，并感染胰腺癌PaTu8988细胞株，建立稳定低表达B7-H3细胞株。应用实时定量PCR及蛋白质印迹法检测细胞B7-H3基因的表达抑制率。结果携带干扰效果最好的shRNA的慢病毒感染PaTu8988细胞，建立了稳定低表达B7-H3基因的PaTu8988细胞株，其B7-H3mRNA表达的抑制率达96．8％，B7-H3蛋白表达的抑制率达88．1％。结论成功构建了人B7-H3-RNAi的慢病毒载体，并建立了稳定感染的低表达B7-H3基因的PaTu8988细胞株。; 赵鑫张光波李智干文娟朱东明赵华张子祥李德春; 关键词：B7-H3 RNA干扰慢病毒感染

RNA干扰技术建立稳定低表达B7-H1的胰腺癌Patu8988细胞株: 2013年; B7同源性1（B7Homolog1，B7-H1）分子，亦称为“程序性死亡因子-1配体”（programmed death ligand-1，PD-L1）是T细胞共刺激分子B-7家族成员，肿瘤细胞高表达B7-H1可在多个方面参与肿瘤的免疫逃避过程，研究表明胰腺癌中B7．H1的表达水平与预后呈显著负相关。; 赵鑫张光波干文娟李智朱东明李德春; 关键词：胰腺癌 B7-H1 RNAI 慢病毒载体

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