广东省海洋渔业科技推广专项项目(A201001H06)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：龙华喻达辉曾令兵陈健光黄桂菊更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院长江水产研究所中国水产科学研究院南海水产研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目广东省海洋渔业科技推广专项项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因shRNA干扰载体的构建及效果评价被引量：3
- 2012年
- 利用Invitrogen公司的在线生物学软件分析斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因,设计针对CP基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列[其结构特征为正链(19 nt)-环(4 nt)-负链(19 nt)]。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体pENTRTM/U6中,构建shRNA干扰载体pshRNA-124、pshRNA-896和pshRNA-NNV。然后,用脂质体转染法分别将3种shRNA干扰载体和pEGFP-CP基因共转染导入黑头呆鱼(FHM)肌肉细胞,荧光显微镜观察细胞荧光强度,分析荧光抑制效率,Real-time RT-PCR检测CP基因mRNA的表达水平变化。结果表明,在pEGFP-CP与shRNA干扰载体共转染组,pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV的荧光抑制效率分别为47%、68%、51%。3种shRNA干扰载体都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中pshRNA-896干扰效率最好。Real-time RT-PCR检测表明,干扰质粒pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV对pEGFP-CP基因的沉默效率分别约为60%、96%和55%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。研究表明,靶向斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因的shRNA干扰载体构建成功,为进一步运用RNA干扰技术进行CP基因的功能研究奠定了基础。
- 黄桂菊陈健光喻达辉曾令兵龙华
- 关键词：斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因
