河南省杰出人才创新基金(2005126)
- 作品数：9 被引量：14H指数：3
- 相关作者：陈广文刘德增董自梅马克学田士瑞更多>>
- 相关机构：河南师范大学黑龙江省科学院更多>>
- 发文基金：河南省杰出人才创新基金国家自然科学基金河南省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 日本三角涡虫hsp70 cDNA克隆及原核表达被引量：1
- 2010年
- 热休克蛋白70是热休克蛋白家族中的重要成员,它在保护生物体免受各种胁迫中发挥重要作用。由于其惊人的再生能力,淡水涡虫作为研究再生和发育的模式动物受到研究者关注。但是,有关涡虫抗逆性的分子机制却少有报道。研究采用RACE(Rapid amplification of cDNA end)技术首次从日本三角涡虫中克隆出hsp70(Djhsp70)全长cDNA序列。Djhsp70 cDNA全长2066bp,含有1947bp的开放阅读框,编码648个氨基酸,分子量71.18kD,GenBank登录号EU380241。DjHSP70的氨基酸含有真核生物HSP70家族蛋白的三个标签序列(9–16位的IDLGTTYS、199—206位的DLGGGTFD、334–339位的IVLVGG)和末端高度保守序列EEVD。经BLAST检索分析,Djhsp70的核苷酸序列和推定的氨基酸序列与目前已知HSP70家族成员高度同源。有趣的是,HSP70亲缘关系分析表明:涡虫更靠近脊椎动物,而与无脊椎动物果蝇和线虫相距较远。为了制备抗体研究DjHSP70的组织学定位,实验还成功构建了DjHSP70表达载体,在IPTG诱导下表达出约76kD的融合蛋白。Djhsp70 cDNA的克隆与表达载体的构建为下一步工作奠定了基础。
- 马克学陈广文娄昊费利娜
- 关键词：日本三角涡虫HSP70克隆
- 日本三角涡虫热休克蛋白70(DjHSP70)C-端多肽表达及其抗血清制备
- 2011年
- 首先运用在线生物学软件对日本三角涡虫(Degusia japonica)热休克蛋白70(DjHSP70)氨基酸序列进行亲水区分析,发现该蛋白C-端含有较多亲水性氨基酸,然后以该段多肽序列为基础构建原核表达载体。采用PCR方法扩增450 bp cDNA片段,编码DjHSP70 C-端150个氨基酸多肽。将双酶切的cDNA片段与pET-28a载体连接后导入BL21受体菌,在IPTG诱导下表达出21 ku融合蛋白,分子量与预期相符。该融合蛋白采用Ni2+-NTA agarose树脂进行纯化,纯化结果电泳检测后经灰度扫描分析显示纯度在95%以上。融合蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的抗血清,Western blot检测显示该抗血清不仅具有很强的特异性,而且还识别小鼠HSP70。此项工作为进一步研究淡水涡虫抗逆性奠定了基础。
- 马克学娄昊陈广文刘德增
- 关键词：涡虫蛋白纯化抗血清
- 热休克蛋白(HSPs)基因家族在涡虫中的研究进展
- 2016年
- 热休克蛋白(HSPs)广泛存在于从细菌到人类的各种有机体中,在生物生命活动中具有重要生理功能,如作为分子伴侣参与细胞增殖和分化以及免疫应答等;同时某些HSPs表达水平的高低可作为衡量环境污染或者人类恶性肿瘤疗效和预后的重要指标.涡虫是扁形动物门的代表动物,因其在动物系统演化中的特殊地位和极强的再生能力而作为研究发育和再生的模式动物之一.概述了HSPs基因家族成员在涡虫抗逆和再生研究中的主要成果和最新进展,并对目前存在的问题及未来的发展方向进行了总结和展望.以期为揭示HSPs在高等动物中的作用机制提供参考.
- 程方方董自梅陈静詹会娜陈广文
- 关键词：涡虫热休克蛋白基因
- 河北3产地日本三角涡虫的染色体变异与核型多样性分析被引量：7
- 2010年
- 利用空气干燥法,对采自河北省邯郸市漳河、朝阳湖和邢台市秦王湖3产地日本三角涡虫(Dugesiajaponica)染色体核型进行了研究,结果表明,日本三角涡虫漳河种群与秦王湖种群体细胞中染色体数目以16条为主(2n=2x=16=16m),分别占81.07%和68.47%,少数为24条(2n=3x=24=24m),分别占8.28%和11.71%,为二倍体和三倍体的混合倍体;日本三角涡虫朝阳湖种群体细胞中染色体数目以24条为主(2n=3x=24=24m),占64.60%,少数为16条(2n=2x=16=16m),占7.45%,为三倍体和二倍体的混合倍体。值得注意的是朝阳湖种群部分体细胞中染色体在结构上发生变异,使其核型呈现多型性。文中根据核型分析结果对上述3产地日本三角涡虫染色体及核型的多样性作了初步讨论。
- 陈广文董自梅田士瑞王清华刘涛刘德增
- 关键词：日本三角涡虫染色体核型多样性
- 河南两产地日本三角涡虫的染色体和核型多样性分析被引量：2
- 2011年
- 利用空气干燥法对采自河南省桐柏县西小河和三里岔村两产地日本三角涡虫(Dugesia japonica)的染色体和核型进行了研究,结果表明:日本三角涡虫西小河种群的体细胞中染色体数目以16条为主,少数为24条和25条,分别占86.67%、6.07%和7.26%,染色体基数为8,为2倍体、3倍体和3倍性非整倍体的混合体,核型公式分别为:2n=2x=16=16m,2n=3x=24=24m,2n=3x+1=25=24m+1;日本三角涡虫三里岔种群的体细胞中染色体数目以24条为主,少数为16条和25条,分别占63.48%、13.91%和9.56%,染色体基数为8,为3倍体、2倍体和3倍性非整倍体的混合体,核型公式分别为:2n=3x=24=24m,2n=2x=16=16m,2n=3x+1=25=24m+1,该产地日本三角涡虫种群部分个体体细胞中染色体在结构上发生变异,使其核型呈现多型性.
- 陈广文董自梅武丽敏田士瑞刘德增
- 关键词：日本三角涡虫染色体核型
- 持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。方法采用全自动生化分析仪测定转氨酶的活性变化,用复性电泳技术分析磷酸酶和蛋白水解酶的变化,用半定量RT-PCR技术分析PCNA mRNA的表达变化。结果饥饿过程中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性显著升高,是对照水平的10倍以上,恢复喂食后逐渐降低到正常水平;碱性磷酸酶(ALP)的活性在饥饿过程中明显减弱,而酸性磷酸酶(ACP)活性却显著增强;受饥饿影响,140kD和40kD蛋白水解酶的活性均明显增加;然而饥饿过程中PCNA的表达没有明显变化,说明饥饿对该基因的影响很小。结论持久饥饿对涡虫的生理和生化代谢有重要影响,酶活性的变化反应了涡虫适应持久饥饿的能量代谢变化。
- 马克学陈广文娄昊刘德增
- 关键词：饥饿转氨酶磷酸酶蛋白水解酶增殖细胞核抗原涡虫
- 淡水涡虫眼点形态发生相关基因研究进展被引量：3
- 2015年
- 涡虫是动物界最早出现两侧对称、三胚层、营自由爬行生活的动物类群,在动物系统演化中占有重要地位。由于涡虫眼点结构简单,再生能力极强,因此成为研究视觉系统形成、进化及再生的理想模型。我们以日本三角涡虫(Dugesia japonica)为例,对淡水涡虫眼点的结构、形态发生过程及眼点再生相关基因进行概述,重点介绍眼点形态发生过程中与眼点前体细胞分化、视神经纤维生长、视觉系统功能恢复及眼点视杯形成相关基因的表达模式及功能分析,并对目前存在的问题及未来的发展进行总结和展望。为探索高等动物包括人类的视觉系统的形成机制提供参考。
- 董自梅李小艳陈静程方方陈广文
- 关键词：基因淡水涡虫
- 中国云南三产地淡水三角涡虫核型分析被引量：2
- 2011年
- 利用空气干燥法,对采自云南省丽江市束河古镇、保山市龙王塘和香格里拉市小中甸3产地淡水三角涡虫(Dugesia sp.)的染色体和核型进行分析,结果表明:丽江市束河古镇淡水三角涡虫体细胞的染色体数目以16条为主,为二倍体(2n=2x=16=16m);保山市龙王塘淡水三角涡虫体细胞的染色体数目以24条为主(2n=3x=24=24m),少数为16条(2n=2x=16=16m),为三倍体和为二倍体的混合倍体;值得注意的是:香格里拉市小中甸淡水三角涡虫体细胞的染色体数目以极少见的26条为主(2n=3x+2=24+2=21m+3st+2m),少数为25条(2n=3x+1=24+1=21m+3st+1m)和24条(2n=3x=24=21m+3st),为三倍性混合倍体。研究根据核型结果对上述三产地淡水三角涡虫的分类和染色体非整倍性进行了分析。
- 陈广文田士瑞刘涛刘德增
- 关键词：三角涡虫核型
- 日本三角涡虫热休克蛋白90基因克隆及其表达模式被引量：1
- 2013年
- 目的克隆日本三角涡虫热休克蛋白90(Djhsp90)基因,并对其在不同应激条件下表达模式进行分析。方法采用PCR技术克隆日本三角涡虫hsp90 cDNA全长序列和基因组DNA序列,利用生物信息学软件对其序列进行分析,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测其在再生、饥饿和热激过程中的表达模式。结果 Djhsp90 cDNA全长2354 bp,含有2148 bp的开放阅读框(ORF),编码715个氨基酸,含有真核生物HSP90家族蛋白的5个标签序列和末端高度保守序列MEEVD。基因组DNA测序表明,该基因仅含有1个内含子(48 bp),内含子的5’-和3’-剪切位点符合经典的"GT-AG"法则。涡虫切断后1d Djhsp90的表达量显著增加,2d达到高峰,3d后逐步下降到正常水平。持久饥饿过程中Djhsp90的表达量维持在较高水平。提高培养温度能显著诱导Djhsp90的表达,且涡虫头部对热效应最敏感。结论我们成功克隆了日本三角涡虫hsp90基因,并证实切割、饥饿和热激能诱导其表达上调。
- 马克学冯程程豆贺程方方陈广文刘德增
- 关键词：热休克蛋白90基因克隆实时荧光定量聚合酶链反应涡虫
