青岛市科技发展计划项目(O5-2-JC-78)
- 作品数：10 被引量：64H指数：5
- 相关作者：王君玮王志亮赵云玲张维王华更多>>
- 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心扬州大学南京农业大学更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪链球菌2型溶血素基因与38KDa蛋白基因克隆及联合表达被引量：3
- 2007年
- 目的:研究有效的猪链球菌病疫苗。方法:以四川株猪链球菌2型基因组DNA为模板分别扩增溶血素基因和38KDa基因主要功能区基因;并经连接、克隆及酶切鉴定。分别构建原核表达载体pET32a-Sly、pET32a-38KDa,提取阳性克隆质粒分别进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片断,将目的片断定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21 (DE3),用IPTG进行诱导表达。结果:重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量约为60Ku的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western-blotting)证实该重组蛋白可以与SS2阳性血清发生特异性反应。结论:本研究为重组蛋白的免疫保护应用奠定基础。
- 王华王君玮陈义平赵永刚徐天刚赵云玲张维王志亮
- 关键词：猪链球菌2型溶血素克隆
- 貉群暴发犬瘟热的诊断被引量：7
- 2007年
- 为了对2006年7-9月间山东、河北的多个地区貉群发病情况进行诊断，根据临床症状，剖检变化，实验室诊断，确诊为犬瘟热病。
- 王君玮张维任炜杰张莉钟永彬李林
- 关键词：犬瘟热
- 貂、狐、貉源犬瘟热病毒分离株H和N基因的遗传多样性分析被引量：10
- 2007年
- 为研究鼬科动物犬瘟热病毒（CDV）毒株的变异特性,对来自不同地区的貉、狐、貂的5个CDV分离株（其中HD-m、LN-m为貂源,HTp-r、THD1-r为貉源,HB-f为狐源）和1个CDV国内弱毒疫苗株（vCh）的N基因和部分H基因进行了核苷酸测序,并构建系统发生树。结果表明,5个分离株之间H基因核苷酸序列同源性均达到97.5%以上,而N基因为94.5%-99.8%。vCh与5个分离株的H基因和N基因核苷酸序列同源性普遍较低（H基因：90.5%-91.8%;N基因：90.9%-93.5%）,而与国外疫苗株vCon和vOnder的H基因核苷酸同源性达96.8%和97.2%。分离株之间H蛋白氨基酸同源性差别不大（97.1%-100%）,而N蛋白氨基酸同源性差别较大（91.6%-100%）。5个CDV分离株与vCh疫苗株H蛋白和N蛋白同源性均普遍较低,H蛋白为89.7%-91.8%,N蛋白为92.8%-96.8%。vCh与vOnder、vCon有很高的同源性,其H蛋白氨基酸同源性分别为97.1%和95.6%,vCh与vOnder N蛋白氨基酸同源性达97.3%。结果显示,最近犬瘟热的流行和免疫失败现象的发生与国内所用疫苗毒株和野毒株的遗传关系甚远有关。
- 王君玮姜平王志亮张维李林赵永刚
- 关键词：犬瘟热病毒H基因N基因同源性
- 猪链球菌病流行病学及其疫苗研究现状被引量：26
- 2006年
- 猪链球菌病流行无明显的季节性,一年四季均可发生,尤其是重症猪链球菌2型感染暴发时,致病性强,传播迅速,猪病死率高。该病同时可通过破损皮肤如伤口或擦伤传染给人,也可通过呼吸道感染人,严重感染时可引起人的死亡。控制猪链球菌病的感染,重在预防。不同类型的疫苗已研制成功或正在开发。近年来,基因工程疫苗如重组亚单位疫苗,细菌载体疫苗等新型疫苗的研究具有广泛应用前景。虽然猪链球菌病在猪群中的流行早有报道,但人类感染的报道较少,认识较局限。文章主要对该病的病原特性。流行病学及疫苗的研究做了系统的阐述,为该病的研究提供参考。
- 王华赵云玲王君玮王志亮陈义平
- 关键词：猪链球菌病原学流行病学疫苗
- 貂、貉源犬瘟热病毒流行毒株H基因的克隆及遗传多样性分析被引量：5
- 2010年
- 为研究鼬科动物犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)毒株的变异特性,对分离自不同地区貉、貂的5个CDV毒株和1个CDV国内弱毒疫苗株(vacChina)的H基因进行了核苷酸测序,并与12个参考毒株构建系统发生树。结果表明:5个流行毒株之间H基因核苷酸序列同源性均达到97.5%以上,vacChina与5个流行毒株的H基因核苷酸序列同源性普遍较低(90.5%～91.8%),而与国外疫苗株Convac和Onderstepoort的H基因核苷酸同源性达96.8%和97.2%。流行毒株之间H蛋白氨基酸同源性差别不大(97.1%～100.0%),流行毒株与vacChina疫苗株H蛋白氨基酸同源性普遍较低(89.7%～91.8%),vacChina与Onderstepoort、Convac有着很高的同源性,其H蛋白氨基酸同源性分别为97.1%、95.6%。结果分析显示,CDV的流行和免疫失败现象的发生与国内所用疫苗毒株和野毒株的遗传关系甚远有关。
- 张维王君玮李林赵永刚任炜杰王志亮
- 关键词：犬瘟热病毒克隆同源性比较
- 猪链球菌2型检测技术概述被引量：3
- 2009年
- 猪链球菌(Streptococcus suis)病是由多种不同群的链球菌引起的一种人畜共患的急性、热性传染病,世界各地多个国家均有猪感染发病且致人死亡的报道。本文结合我们对猪链球菌2型的检测技术研究成果,从微生物学检测、血清学检测、分子生物学检测等方面进行了综述。
- 赵云玲王君玮王华王志亮
- 关键词：猪链球菌2型分子生物学
- 猪链球菌2型38000蛋白主要功能区基因的克隆与表达被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank中已发表的猪链球菌2型38000蛋白基因核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,采用PCR方法,以四川分离株猪链球菌2型基因组DNA为模板扩增38000蛋白主要功能区基因。将PCR产物纯化后与pMD18-T连接转化宿主菌DH5α,提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。将目的片段定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、0.8mmol/LIPTG条件下进行诱导表达,结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子质量约为35000的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western blotting)证实该重组蛋白可以与猪链球菌2型阳性血清发生特异性反应。
- 王华王君玮陈义平赵永刚赵云玲徐天刚王志亮
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 应用多重荧光Real-time PCR快速鉴定猪链球菌2型被引量：6
- 2007年
- 目的建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法。方法根据S.suis2CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2对引物及其相应探针。通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的实时荧光PCR方法。结果能在3h内对送检组织样品检测确定S.suis2型和MRP毒力基因,最低检测菌体浓度24CFU/ml。与普通PCR相比,敏感性在检测CPS2J时比普通PCR高至少10倍以上,而在检测MRP时比其高100倍。与葡萄球菌、化脓链球菌、沙门氏菌、S.suis1型、9型等无交叉反应。同一人在试剂放置0d、20d和60d检测,以及不同人用同一方法检测,变异系数均小于5%,差异不显著。用于检测SSsc0501攻毒后的样品,结果在心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、脑中均检测到S.suis2阳性,MRP阳性。而在肌肉中,S.suis2和MRP均为阴性。结论建立的多重荧光Real-timePCR敏感性高、特异性强,稳定性和重复性好,能用于可疑S.suis2型组织样品的快速定型和毒力鉴定。
- 王君玮王志亮王伟伟赵永刚孙承英李林赵云玲张维
- 关键词：猪链球菌2型MRP
- 猪链球菌2型四川株溶血素主要抗原决定簇基因的克隆及表达被引量：1
- 2007年
- 目的研究有效的猪链球菌病疫苗。方法采用PCR方法,以四川株、参考菌株和江苏分离株猪链球菌2型基因组DNA为模板扩增溶血素基因,克隆至PMD18-T载体。提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。经测序正确后,构建原核表达载体pET32a-SLY,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG进行诱导。结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量约为43ku的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western-blotting)分析证实,该重组蛋白与SS2-6阳性血清发生特异性反应。结论本实验旨在通过对溶血素主要抗原决定簇基因的克隆表达,分析表达产物的抗原性和免疫原性,为进一步对猪链球菌2型疫苗共表达的研制奠定基础。
- 王华王君玮陈义平徐天刚张维赵云玲王志亮
- 关键词：猪链球菌2型溶血素克隆
- 猪链球菌2型三种重组表达蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护性评价被引量：3
- 2007年
- 将150只BALB/c小鼠随机分成5组。用猪链球菌2型pET32a-Sly、pET32a-38ku和pET32a-Sly-38ku表达的重组蛋白制备的疫苗,以及猪链球菌2型全菌灭活疫苗分别免疫A、B、C、D组小鼠,E组为生理盐水对照。首免后第2周加强免疫1次,二免后第2周,用致死量强毒猪链球菌2型四川分离株和江苏分离株以及马链球菌兽疫亚种安徽分离株攻毒,观察攻毒后对小鼠的免疫保护率。结果,A组与C、D组对猪链球菌2型感染的保护率差异显著(P<0.05),而C组与D组之间保护率无显著差异;A、B、C、D组之间对马链球菌兽疫亚种安徽分离株感染的保护率差异不显著;各免疫组的保护率极显著高于对照组。结果表明,3种重组疫苗具有良好的免疫原性,能对强毒株猪链球菌2型的攻击感染起到保护作用。
- 王华王君玮陈义平张维徐天刚赵云玲王志亮
- 关键词：猪链球菌2型重组蛋白BALB/C小鼠免疫原性
