广东省自然科学基金(07003080)
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
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- 新生小鼠心肌干细胞与心肌细胞共培养诱导分化试验被引量：6
- 2010年
- 目的了解心肌条件培养液有无诱导心肌干细胞(cardiac stem cells,CSCs)分化为心肌细胞的作用,CSCs与心肌细胞接触能否影响CSCs向心肌分化。方法用免疫磁珠分选原代CSCs,得到纯化的c-Kit^+ CSC。分3组培养:条件液组用心肌条件培养液诱导CSCs 21 d,混合组分别用PKH 26或DAPI标记CSCs后与心肌细胞混合培养8 d,空白组无干预培养21 d,观察CSCs形态变化。各组完成培养后,用免疫组化法鉴定肌钙蛋白Troponin-T和缝隙连接蛋白connexin 43表达。结果心肌条件培养液不能有效诱导CSCs表达心肌细胞特异蛋白Troponin-T和connexin 43,未见自发搏动细胞。CSCs与心肌细胞接触后,两者同步搏动。CSCs可表达Troponin-T和connexin43。结论心肌条件培养液无诱导CSCs向心肌细胞分化的作用,心肌细胞与CSCs接触能有效诱导CSCs向心肌细胞分化。
- 欧念文陆东风杨镇军胡德喜
- 关键词：心肌干细胞共培养
- G-CSF体外诱导新生小鼠心肌干细胞分化的研究被引量：1
- 2008年
- 目的了解新生小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSCs)在体外的分化潜能,为重建缺血及坏死心肌的临床应用提供依据。方法采用组织块贴壁法体外培养小鼠CSCs,以免疫磁珠细胞分离(MACS)系统纯化原代细胞。纯化所得细胞分别予4个浓度的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)进行诱导,应用流式细胞术(FCM)、免疫荧光染色(IFS)鉴定细胞表型,RT-PCR检测心肌转录因子GATA-4与心肌结构基因β-MHC的表达。结果由组织块培养所得的原代细胞经FCM、IFS检测证实其部分表达Sca-1和CD 45。采用MACS成功得到高纯度的细胞,行FCM、IFS鉴定其表型为Sca-1+/CD 45-,RT-PCR检测显示其表达GATA-4,不表达β-MHC。纯化的细胞予诱导后培养3周,整个培养过程未见单个或成团细胞的自发搏动。诱导后3周各组细胞再次经FCM检测见Sca-1的表达均比诱导前减弱,RT-PCR检测见诱导后的细胞仍然不表达β-MHC。结论应用MACS后成功得到高纯度的表型为Sca-1+/CD 45-的CSCs;CSCs Sca-1的表达量可能随培养时间的延长而下降;G-CSF未能将CSCs诱导分化为心肌细胞。
- 杨镇军陆东风欧念文胡德喜
- 关键词：心肌干细胞粒细胞集落刺激因子心肌再生
