国家自然科学基金(81170556)
- 作品数：13 被引量：51H指数：3
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- 胚胎期氟他胺暴露对SD大鼠支持细胞增殖和成熟的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨胚胎期暴露于氟他胺(Flu)对SD雄性仔鼠睾丸支持细胞的影响。方法:将妊娠的SD大鼠随机分为Flu组和正常组,Flu组自妊娠后第12～21日每日皮下注射25 mg/kg Flu以建立生殖发育障碍模型,正常组不作任何处理。分别在雄性幼仔出生后第13日(PD 13)、PD15、PD 17随机颈椎脱臼法处死幼仔鼠,收集雄仔鼠睾丸组织。免疫组织化学检测雄仔鼠BrdU并计算支持细胞增殖指数,Real-time PCR检测各组雄仔鼠SGP-2基因的表达。结果:随着生长发育,正常组和Flu组雄仔鼠睾丸支持细胞增殖指数均呈下降趋势,PD 17正常组支持细胞增殖已经停止,Flu组PD 13、PD 15、PD 17支持细胞增殖指数升高,明显高于正常组(P<0.05)。PD13 Flu组支持细胞SGP-2 mRNA表达量较正常组无明显差异(P>0.05);PD 15、PD 17 Flu组支持细胞中SGP-2 mRNA表达量明显低于正常组(P<0.01)。结论:胚胎期Flu暴露导致支持细胞增殖期延长、成熟延迟,这可能是导致其生殖细胞发育障碍的重要原因之一。
- 赵丹何大维张永波何文飞魏光辉
- 关键词：支持细胞细胞增殖
- 粒细胞集落刺激因子及其受体在儿童肾母细胞瘤中的表达
- 2012年
- 目的检测粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)及其受体(G-CSFR)在儿童肾母细胞瘤中的表达。方法收集我院2009年1月至2011年6月确诊的肾母细胞瘤患者手术标本27例。应用免疫组织化学方法检测肿瘤标本的G-CSF、G-CSFR的表达和分布情况。结果肾母细胞瘤标本中粒细胞集落刺激因子和其受体的表达率分别是62.96%、66.67%。其中,G-CSF和G-CSFR在同一样本中均阳性表达者16例(59.26%),均阴性表达者8例(29.63%)。G-CSF阳性和G-CSFR阴性表达1例(3.70%),G-CSF阴性和G-CSFR阳性表达2例(7.41%)。G-CSF和GCSFR的表达与性别、年龄、临床分期和病理分型均无相关性(P>0.05)。结论 G-CSF,G-CSFR在儿童肾母细胞瘤中高表达,无论性别、年龄、临床分期以及病理类型,均应检测肿瘤G-CSF、G-CSFR表达,对于G-CSFR阳性表达的患者,建议使用G-CSF时,应慎重考虑其对肿瘤的影响。
- 张永波何大维何文飞卞则栋吴鑫易钦君魏光辉
- 关键词：粒细胞集落刺激因子粒细胞集落刺激因子受体肾母细胞瘤
- T3对Flu诱导隐睾大鼠生殖功能的改善研究被引量：1
- 2017年
- 目的观察T3干预对氟他胺(Flu)诱导的SD大鼠成年后生殖能力改善情况。方法 16只SD新生鼠随机分为2组:①正常组8只:正常孕鼠常规喂养;②T3(1d)组8只:正常孕鼠常规喂养,出生后第1天(PD1)给予T_3 15μg/(kg·d)至PD13d。70只Flu诱导新生鼠随机分为2组:①Flu组35只:常规喂养;②Flu+T3(1d)组35只:PD1d给予T315μg/(kg·d)至PD13d。观察干预后各组小鼠隐睾发生率、睾丸、附睾、精子计数、组织学改变等。结果 Flu组隐睾发生率为45%(9/20),Flu+T3(1d)组隐睾发生率为25%(4/16),差异无统计学意义(P>0.05)。Flu及Flu+T3(1d)干预组隐睾雄鼠的附睾中均无精子;两组中所有的下降睾丸(包括单侧隐睾健侧)的附睾精子计数中,均存在无精子和少精子情况,两组差异无统计学意义(P>0.05)。T3(1d)组、Flu诱导正常有精子附睾的精子计数与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而Flu+T3(1d)组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常组及T3(1d)组雄鼠均可使正常雌鼠受孕,Flu组及Flu+T3(1d)组雄鼠,因均合并有尿道下裂,未能使雌鼠受孕。在有精子睾丸中,T3(1d)组睾丸质量、体积、脏器系数与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05);Flu+T3(1d)组睾丸质量、体积脏器系数均小于Flu组,差异有统计学意义(P<0.05);Flu组与正常组差异无统计学意义(P>0.05)。生精上皮计数及Johnson评分显示:正常对照组均高于T3(1d)组,Flu+T3(1d)有精子组低于Flu有精子组,Flu无精子组高于Flu+T3(1d)组,差异有统计学意义(P<0.01),但Flu诱导隐睾与Flu+T3(1d)隐睾组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 T315μg/(kg·d)剂量强度合理,T3可以降低Flu诱导暴露后隐睾发生率;对Flu诱导后的雄性仔鼠的生精功能有一定的改善作用,但并不能促进睾丸发育,提高精子生成率,不能显著改善生殖功能。
- 林阳马超何大维魏光辉
- 关键词：T3隐睾生殖功能
- 促红细胞生成素促进胚胎期氟他胺诱导隐睾生殖发育的实验研究
- 2015年
- 目的 探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）是否具有促进胚胎期氟他胺（flutamide,Flu）诱导隐睾生殖细胞发育的生物效应。 方法 氟他胺诱导后的SD仔鼠出生后按随机数字表法分为3组：Flu组（n=36）、Flu＋EPO组（n=42）和Flu＋PBS组（n=32），正常饲养的SD仔鼠分为正常对照组（n=40）及EPO组（n=16）；Flu组和正常对照组常规饲养，Flu＋EPO组、EPO组及Flu＋PBS组于出生后（postnatal day,PD）1-7 d隔天腹腔注射 1 000 U/kg外源性EPO或同等体积的PBS。出生后25 d统计隐睾发生率及睾丸脏器系数，观察睾丸组织学变化，统计生殖指数，测量曲细精管横截面积和直径，免疫组织化学法检测睾丸间隙连接蛋白Connexin43在睾丸组织中的表达。 结果 Flu＋EPO组隐睾发生率为38.1%（16/42），较Flu组[55.6%（20/36）]及Flu＋PBS组[53.1%（17/32）]降低，Flu＋EPO隐睾组生精上皮细胞数量、睾丸脏器系数、生殖指数、平均曲细精管面积及直径均明显大于Flu组（P〈0.01，P〈0.05），且与正常对照组差异无统计学意义。EPO能够促进Connexin43蛋白在隐睾组织中的正常表达。 结论 外源性EPO可以降低胚胎期Flu暴露后隐睾发生率，促进隐睾生殖细胞发育。
- 扶溢瑶何大维曾广平康青刘星魏光辉
- 关键词：促红细胞生成素氟他胺隐睾生殖细胞
- Piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究被引量：9
- 2013年
- 目的初步观察精原干细胞自我更新基因Piwil2重编程人成纤维细胞的细胞形态及功能特征变化,建立Piwil2调控肿瘤干细胞发生过程的细胞实验模型。方法将携带Piwil2-GFP标记和空载目的基因GFP标记的慢病毒载体分别感染原代培养的小儿包皮成纤维细胞,筛选建立稳定表达Piwil2-GFP和GFP成纤维细胞系,观察细胞形态变化及肿瘤球形成过程,分析细胞染色体核型,进行裸鼠体内成瘤实验,RT-PCR、免疫组织化学进一步鉴定重编程后细胞的干细胞特征及三胚层分化的相关标志物。结果转染后第5天,Piwil2-GFP成纤维细胞开始由长梭形逐渐转变为圆形,第14天出现集落样生长状态,挑选集落重悬后培养形成类似"肿瘤球"样克隆,其细胞染色体核型呈超二倍体的异质性改变。"肿瘤球"样克隆裸鼠体内移植2周时100%形成肿瘤,肿瘤组织学及免疫组化鉴定为表达多种外胚层、中胚层及内胚层肿瘤标志物的恶性肿瘤,RT-PCR显示细胞及裸鼠肿瘤表达干细胞多能基因Oct-4、Nanog、Sox2,以及三胚层特征标志物。结论Piwil2重编程人成纤维细胞后的细胞具有干细胞及多潜能分化特性,以及显著的肿瘤细胞异质特性。
- 吴鑫何大维张永波蔡春红魏光辉
- 关键词：成纤维细胞肿瘤干细胞
- T3调控氟他胺诱导大鼠隐睾生殖母细胞发育障碍及NCAM表达被引量：1
- 2011年
- 目的观察三碘甲腺原氨酸(T3)对氟他胺(Flu)诱导的SD大鼠隐睾生殖母细胞(Go)发育及神经细胞黏附分子(NCAM)表达的调控作用。方法 15μg/(kg.d)T3皮下注射Flu诱导出生后第1 d(PD1)仔鼠、PD20隐睾仔鼠,观察干预后隐睾发生率、组织学改变,免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NCAM表达。结果 Flu诱导仔鼠PD1给予T3干预,成年后隐睾发生率为25%(8/32),较未干预组的隐睾发生率40.9%(9/22)降低,且隐睾曲细精管内无残留生殖母细胞(Go),NCAM阴性表达。Flu诱导的PD13仔鼠睾丸组织、PD20仔鼠隐睾组织NCAMmRNA表达高于正常组(P<0.01,P<0.05),T3干预后,NCAMmRNA表达均低于非T3干预组(P<0.01),并与正常组无明显差异(P>0.05)。结论 T3可以降低Flu诱导暴露后隐睾发生率,下调NCAM表达,降低或消除隐睾曲细精管Go残存。
- 马超何大维姜勇超赵丹何文飞魏光辉
- 关键词：氟他胺隐睾三碘甲腺原氨酸神经细胞黏附分子
- 胚胎期氟他胺暴露对睾丸Connexin43基因表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的探讨胚胎期雄激素受体阻滞剂氟他胺（flutamide，Flu）暴露对睾丸间隙连接蛋白43（Connemn43，Cox43）基因表达的影响。方法在胚胎期12～21d，给予SD孕鼠氟他胺25mg·kg-1·d-1皮下注射。应用免疫组织化学法和Real—timePCR技术，分析出生后13、15、17、20dSD幼鼠睾丸Cox43mRNA表达及蛋白质定位分布情况。结果出生后（postnatalday，PD）13、15d，Flu暴露组睾丸Cox43mRNA和蛋白表达均明显低于正常对照组及玉米油对照组（P〈0．01）；PD17Flu暴露组与正常对照组及玉米油对照组相比，睾丸Cox43mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05），而生精小管基底膜精原细胞层有Cox43蛋白异常表达分布；PD20Flu暴露隐睾组Cox43mRNA表达明显低于正常对照组（P〈0．05）、玉米油对照组（P〈0．05）和非隐睾组（P〈0．01），并且PD20Flu暴露各组生精小管基底膜精原细胞层均有Cox43蛋白异常分布。结论胚胎期Flu暴露导致睾丸Cox43mRNA转录下降，生精小管内Cox43蛋白表达分布异常。
- 赵丹何大维马超何文飞张永波魏光辉
- 关键词：氟他胺间隙连接蛋白43雄激素受体睾丸
- Piwil2重编程人成纤维细胞成瘤组织的组织学特征被引量：6
- 2015年
- 目的观察生殖干细胞自我更新关键调节基因Piwil2重编程人包皮成纤维细胞获得的肿瘤干细胞（Piwil2-iCSC）体内成瘤组织的组织学特征。方法挑选Piwil2-iCSC肿瘤球样克隆细胞进行裸鼠体内成瘤实验，组织学观察Piwil2-iCSC肿瘤组织病理特点，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组化法检测Piwil2-iCSC肿瘤组织中干细胞标志物和常见三胚层肿瘤标志物，免疫组化法检测Piwil2-iCSC肿瘤组织中生殖细胞肿瘤标志物。结果接种2周时，裸鼠体内皮下100％形成肿瘤。Piwil2-iCSC肿瘤组织DAPI染色显示，Piwil2-GFP标记定位细胞核，且满视野高密度表达。HE染色显示，肿瘤细胞核分裂象高，每高倍镜下〉10个核分裂象，核增大畸形。RT—PCR检测显示，Piwil2-iCSC肿瘤组织仍表达Piwil2、部分干细胞自我更新标志物和三胚层特征标志物。免疫组化染色显示，Piwil2-iCSC肿瘤组织表达相关干细胞标志物、三胚层多种肿瘤标志物和生殖细胞肿瘤标志物AFP、HCG。结论Piwil2-iCSC肿瘤可能为胚胎性未分化小细胞癌，以未成熟畸胎瘤混有卵黄囊瘤和绒癌成分可能性大，可为研究相关肿瘤的肿瘤干细胞起源或发生机制及诊疗方法提供研究模型。
- 曾广平吴鑫何大维扶溢瑶刘星张德迎林涛魏光辉
- 关键词：成纤维细胞肿瘤干细胞肿瘤标记
- 人未成熟睾丸组织体外生殖细胞发育的实验研究
- 2015年
- 目的初步探讨人未成熟睾丸组织在体外培养条件下其生殖细胞发育情况。方法截取睾丸肿瘤术中的瘤旁睾丸组织进行体外培养，分别培养4～17周后苏木素伊红（HE）染色观察培养睾丸组织的组织学结构，测量曲细精管横截面积和直径，RT-PCR检测Piwil2基因在培养组织中的表达，免疫组化检测Piwil2蛋白在生殖细胞中的表达。结果人睾丸组织培养初期（4周）曲细精管横截面积和直径逐渐增大，培养后期有减小趋势，1岁时取材的睾丸组织曲细精管直径在培养前、培养4周、培养8周分别为（38．08±4．67）μm、（56．65±8．71）μm、（52．58±6．43）μm；2．9岁时取材的直径相应时间点分别为（38．40±2．33）μm、（56．81±7．71）μm、（54．15±5．44）μm；8．5岁时取材的直径相应时间点分别为（49．97±4．94）μm、（58．78±2．74）μm、（53．40±5．04）μm。1岁时取材的睾丸组织曲细精管横截面积在培养前、培养4周、培养8周分别为（1150．52±150．94）μm2、（2579．68±842．91）μm^2、（2203．97±549．04）μm^2；2．9岁时取材的横截面积相应时间点分别为（1162．30±143．57）μm^2、（2581．21±700．53）μm^2、（2326．26±468．48）μm^2；8．5岁时取材的横截面积相应时间点分别为（1979．91±386．05）μm^2、（2719．61±246．98）μm^2、（2259．42±433．24）μm^2。培养8周后曲细精管中观察到类初级精母细胞，Piwil2免疫组化染色提示生殖细胞具有更新分化能力。结论在体外培养条件下人未成熟睾丸组织中精原细胞可发育成精母细胞。培养8周生殖细胞仍然具有自我更新和分化能力，之后生殖细胞发育逐渐衰退。
- 蔡春红何大维扶溢瑶曾广平刘星林涛魏光辉
- 关键词：睾丸生殖细胞
- 粒细胞集落刺激因子及其受体在儿童神经母细胞瘤中的表达研究被引量：3
- 2012年
- 目的检测粒细胞集落刺激因子(G-CSF)及其受体(G-CSFR)在儿童神经母细胞瘤中的表达情况。方法收集2009年1月-2011年6月确诊的神经母细胞瘤患儿手术标本25例。应用免疫组织化学法检测肿瘤标本中G-CSF和G-CSFR的表达,分析G-CSF,G-CSFR的表达与患儿年龄、性别及肿瘤临床分期的相关性。结果神经母细胞瘤标本中,G-CSF和G-CSFR阳性表达率分别为68%、72%。其中,G-CSF与G-CSFR均呈阳性者12例(48%),均呈阴性者2例(8%);一致性检验显示,G-CSF与G-CSFR同时检测均为阳性的标本无一致性(Kappa=-0.0456,P=0.8187)。G-CSF阳性与G-CSFR阴性者5例(20%),G-CSF阴性与G-CSFR阳性者6例(24%)。G-CSF和G-CSFR的表达与性别、年龄及临床分期无显著相关性(P>0.05)。结论无论性别、年龄及临床分期,G-CSF和G-CSFR在儿童神经母细胞瘤中均高表达,对于G-CSFR阳性表达的神经母细胞瘤患者,外源性应用G-CSF应慎重考虑其对肿瘤的影响。
- 吴鑫何大维张永波何文飞卞则栋易钦君魏光辉
- 关键词：粒细胞集落刺激因子神经母细胞瘤免疫组织化学
