国家自然科学基金(30370603)
- 作品数：6 被引量：32H指数：3
- 相关作者：蹇锐程小星蒋静邓少丽胡福泉更多>>
- 相关机构：第三军医大学第三军医大学大坪医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠BCMA基因启动子活性研究被引量：1
- 2008年
- 目的:探索B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)基因5′上游序列的启动子活性,为进一步研究BCMA基因的表达调控机制提供实验依据。方法:构建由BCMA基因5′上游-820^+145、-607^+145、-359^+145、-157^+145、-93^+145 5个片段驱动的荧光素酶报告载体pGL3-B820、pGL3-B607、pGL3-B359、pGL3-B157、pGL3-B93,通过转染J558L、293T、HeLa细胞检测荧光素酶的表达,观察荧光素酶相对活性。结果:5种5′删除体的转录激活性由大到小为pGL3-B157>pGL3-B607>pGL3-B359>pGL3-B93>pGL3-B820。pGL3-B157在3种细胞中的转录激活能力为J558L>HeLa>293T,且在J558L中的转录激活能力明显强于Hela和293T细胞。结论:BCMA基因5′上游序列"-820bp^+145bp"具有启动子活性,核心启动子可能位于-93^+145区域中。
- 邓少丽程小星蹇锐蒋静
- 关键词：启动子报告基因
- 抑制Blimp-1表达导致浆细胞去分化被引量：5
- 2006年
- 目的探讨转录因子Blimp-1在浆细胞发育中的作用。方法应用慢病毒载体稳定表达针对Blimp-1的siR-NA,抑制骨髓瘤细胞J558L中Blimp-1的表达。采用免疫荧光及流式细胞技术观察Blimp-1抑制前后细胞的免疫表型变化,半定量RT-PCR检测XBP-1J、-chainc、-myc、BCMA的变化。结果Blimp-1抑制后,浆细胞表面标志CD138表达显著下降,B淋巴细胞免疫标志CD19表达增加。同时,与浆细胞功能及存活密切相关的XBP-1、J-chain、BCMA基因表达下降,而促进B淋巴细胞增殖发育的c-myc表达上升。结论浆细胞中Blimp-1被抑制后,浆细胞发育程序出现再编程,发生了去分化现象,返回到更早期的发育阶段,提示Blimp-1特异性shRNA有可能用于浆细胞相关疾病的治疗。
- 邓少丽胡福泉蹇锐蒋静程小星
- 关键词：BLIMP-1浆细胞细胞发育RNA干扰
- U6和H1双启动子载体用于RNAi的实验研究被引量：9
- 2004年
- 为建立一条简便、有效的构建哺乳动物细胞随机RNAi文库技术路线 ,首先通过PCR将 1 9～ 2 1ntsiRNA编码序列及终止信号等元件引入U6启动子下游 ,再将该扩增产物定向克隆至H1启动子的下游。构建的双启动子载体中 ,U6和H1相对排列 ,均以其间插入的靶序列为模板 ,分别转录出其正义和反义链 ,形成功能性siRNA。以EGFP和bcl 2为靶基因的实验表明 ,该方法构建的载体可有效地干扰相应基因的表达。
- 蹇锐程小星彭涛邓少丽蒋静
- 关键词：反义靶基因哺乳动物细胞定向克隆
- 慢病毒载体感染终末分化骨髓瘤细胞的研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究慢病毒载体有效转移并表达于终末分化骨髓瘤细胞。方法构建表达GFP(绿色荧光蛋白)及NeoR(新霉素抗性基因)的慢病毒载体,分别感染多发性骨髓瘤细胞J558L。采用荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达,用G418筛选携NeoR慢病毒载体感染的J558L细胞。结果包装的慢病毒滴度达6×105IU/mL,对J558L细胞的感染效率为5%￣10%。通过G418筛选可得到稳定长期表达neo基因的阳性细胞克隆。结论慢病毒载体可有效感染终末分化细胞,是有发展潜力的基因治疗新载体。
- 邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星
- 关键词：慢病毒载体骨髓瘤细胞基因治疗
- 应用载体介导的RNAi技术抑制Bcl-2的表达被引量：13
- 2004年
- 目的 应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法 构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间接免疫荧光和免疫印迹检测转染后细胞中Bcl 2的表达水平。结果 3种含不同bcl 2特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在细胞中的表达 ,但干扰的效果存在差异 ,从 45 %～ 83 5 %。结论 本研究建立的载体介导的RNAi技术可成功地用于干扰Bcl
- 蹇锐程小星安静陈炜王嘉丽张俊磊万颖杰陈宗涛
- 关键词：载体介导RNAIBCL-2
- 转录因子Blimp-1的原核表达、纯化及抗体制备被引量：3
- 2006年
- 目的获得B limp-1纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究浆细胞发育的调控奠定基础。方法采用PCR方法从B limp-1质粒中克隆B limp-1编码前350个氨基酸的基因片段,构建B limp-1与6个H is的融合蛋白原核表达质粒,进行原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备B limp-1多抗。采用ELISA方法检测其效价,W estern检验抗体特异性及在骨髓瘤细胞株中的表达。结果构建了表达B limp-1前350个氨基酸的原核表达质粒PQE-B limp-1,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,得到分子量约46×103的融合蛋白,免疫家兔后得到多抗血清。ELISA显示抗体效价达1/20 000。W esternb lot结果显示此多克隆抗体与B limp-1蛋白特异性结合,并在骨髓瘤细胞中表达。结论本研究获得B limp-1纯化蛋白,制备了B limp-1多克隆抗体,为进一步研究B limp-1的作用机制及与血液疾病间的关系奠定了基础。
- 邓少丽胡福泉蹇锐饶贤才蒋静程小星
- 关键词：BLIMP-1原核表达抗体制备
